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방법 논문

절연, 전파, 그리고 인간의 치과 펄프의 줄기 세포의 신경 분화 동안 프리온 단백질 표정

7.3K 조회수

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DOI:

10.3791/59282

⸱

2019년 3월 18일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Experimental Medicine and Environmental Pathology, Sabina Universitas - Rieti University Hub, 2Department of Experimental Medicine, Sapienza University of Rome, 3Department of Science Dentistry and Maxillofacial, Sapienza University of Rome

이 논문에서

요약

여기 우리는 프리온 단백질 표정 신경 분화 과정을 평가 하기 위해 인간의 치과 펄프의 줄기 세포 분리 및 전파에 대 한 프로토콜을 제시.

초록

Bioethical 문제점 배아 줄기 세포의 조작에 관련 된 의료 연구의 분야에서 발전을 방해 있다. 이러한 이유로, 혈액, 골 수, 탯 줄, 지방 같은 다른 조직에서 성체 줄기 세포를 얻기 위해 매우 중요 하다. 가능한 소스 중 치과 펄프 이므로 특히 흥미로운 bioethical 고려 사항에 대 한 얻을 쉽습니다. 실제로, 인간 치과 펄프 줄기 세포 (hDPSCs) 같은 신경 세포에서 분화 할 수 성인 줄기 세포의 종류와 건강 한 환자 (13-19 세)의 세 번째 어 금 니에서 얻어질 수 있다. 특히, 치과 펄프 굴 삭 기 제거, 작은 조각으로 잘라, 콜라 4로 치료 되었고 플라스 크에서 경작. 신경 감 별 법을 유도, hDPSCs는 2 주 동안 EGF/bFGF와 자극 했다. 이전에 우리는 분화 과정에서 세포 프리온의 내용을 hDPSCs에서 단백질 (PrPC) 증가 증명 하고있다. Cytofluorimetric 분석 PrPC 신경 감 별 법 과정 후 증가의 초기 표현을 했다. SiRNA로 PrPC 의 절제 PrP EGF/bFGF에 의해 유도 된 신경 감 별 법을 방지. 이 문서에 우리 우리 향상 격리, 분리 및 여러 쉬운 절차를 가진 hDPSCs의 재배 방법을 생체 외에서 보다 효율적인 세포 클론 했다 중간 엽 줄기 세포 (MSCs)의 획득 및 대규모 확장 설명 관찰 되었다. 우리는 또한 어떻게는 프로토콜에 대 한 자세한 방법으로 얻은 hDPSCs는 MSCs의 신경 분화 과정과 후속 세포질과 분자 과정을 공부 하는 우수한 실험 모델을 보여줍니다.

서론

중간 엽 줄기 세포는 골 수, 탯 줄 혈액, 인간의 치과 펄프, 지방 조직, 그리고 혈액1,2,3,,45 를 포함 하 여 여러 조직에서 고립 되어 있다 , 6. 여러 저자에 의해 보고, hDPSCs 표시 플라스틱 준수, 전형적인 구와 같은 형태학. 이러한 개별 복제와 증식 및 차별화 용량7,8차이 매우 이질적인 인구를 나타냅니다. hDPSCs 익스프레스 중간 엽 줄기 세포 (CD44, CD90, CD73, CD105, STRO-1)에 대 한 특정 마커, 그들은 일부 조 혈 마커 (CD14 CD19 등)에 대 한 부정적인 고 생체 외에서 multilineage 차별화9, 의 10,11.

몇몇 저자가이 세포는 NGF, bFGF, 특정 미디어 및 보충7,12와 함께에서 EGF의 추가 포함 하는 다른 프로토콜을 사용 하 여 같은 신경 세포로 분화 할 수 나타났습니다. 또한, 많은 단백질 신경 분화 과정에 참여 하 고,이 중, 여러 논문 표시 모두 배아와 성체 줄기 세포13, 관련 역할 및 세포 프리온 단백질 (PrPC)의 중요 한 표현 14. PrPC 나타냅니다 구리 물질 대사, apoptosis로 셀 안에 서로 다른 기능을 수행할 수 있는 다 면 발현 성 분자 그리고 저항을 산화 스트레스15,,1617 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22.

우리의 이전 종이23, 우리는 PrPC hDPSCs 신경 분화 과정에서의 역할을 조사. 사실, hDPSCs 익스프레스 PrPC 조 하 고, 신경 감 별 법 후 추가 증가 관찰 하는 것이 가능 했다. 다른 저자는 PrPC 줄기 세포의 신경 분화 과정에서의 가능한 역할을 가정 했다. 실제로, PrPC 신경, oligodendrocytes, 및 이다24에 인간 배아 줄기 세포의 분화를 드라이브. 이 연구의 목적은 신경 감 별 법 동안 치과 펄프, 그것의 분화 과정과 PrPC 의 역할에서 줄기 세포를 얻기 위한 방법론을 강조 했다.

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프로토콜

연구에 사용 하는 세 번째 어 금 니 환자 (13-19 세)의 약물 또는 알코올 소비 이전 역사 없이, 모든 비 흡연와 적절 한 구강 위생에서에서 excised 했다. 설명 과학 치과와 로마의 "역사적인" 대학 Maxillofacial 당일 동의 환자 또는 부모에서 얻은 했다. 동의 윤리적 고려 사항 및 윤리 위원회의 승인에 따라 얻은 했다.

1. 치아 및 치과 펄프 추출

  1. 보존 또는 교통에 대 한 적절 한 매체의 준비.
    1. L-글루타민 (494.5 mL)와 포도 당 (DMEM-L)의 Dulbecco의 수정이 글의 중간 낮은 농도 준비 합니다.
    2. 페니실린/스 (1%)의 5 mL을 추가 고 암포 (0.1%)의 0.5 mL.
  2. 환자에서 세 번째 어 금 니를 추출, 신속 하 게 PBS와 린스, 매체와는 15ml 테스트 튜브에 넣고 2 시간 미만에 실험실으로 전송.
  3. 생물 학적 후드 코로나 가공 패스 병렬 및 펄프 챔버의 지붕을 통해 접선 하 여 치아 커터 엽니다.
  4. 부드럽게 작은 굴 삭 기와 펄프를 제거 하 고 테스트 튜브에.
  5. PBS로 3 회 세척 하 고 실시간에 10 분 동안 2500 x g 에서 원심

2. 치과 펄프의 줄기 세포 분리 처리

  1. 제거는 상쾌한, 행 크의 솔루션에는 펠 릿을 resuspend 및 페 트리 접시에. 5% CO2에서 37 ° C에서 2 시간에 대 한 품 어.
  2. 4 콜라 솔루션 준비를 입력 합니다.
    1. DMEM L. 0.8 mL를 준비
    2. 유형 IV 콜라 DMEM과 몇 분 동안 소용돌이의 0.8 ml의 1 m g을 녹여.
    3. DMEM L 추가 최종 농도를 1 mL을 1 mg/mL.
    4. 0.22 μ M 필터 솔루션을 필터링 합니다.
  3. RT에서 10 분 동안 2500 x g 에서 원심 분리 하 여 행 크의 솔루션을 제거 하 고 일회용 메스와 각자 작은 조각 approximatively 1 m m으로 펄프를 분할.
  4. 펄프 조각을 페 트리 접시에 놓고 유형 IV 콜라 5% CO2에서 37 ° C에서 15 분의 1 mL와 함께 품 어.
  5. 중간 문화 준비 (500 mL)입니다.
    1. DMEM-L과 L-글루타민의 445 ml.
    2. 소 태아 혈 청 (FBS) (10%)의 50 mL를 추가 합니다.
    3. 페니실린/스 (1%)의 5 mL를 추가 합니다.
  6. RT에서 10 분 동안 2500 x g 에서 샘플 원심, 제거는 상쾌한, 5% CO2에서 37 ° C에서 줄기 세포에 대 한 특정 T25 플라스 크에 문화와 매체 (2.5 단계)에서 펠 릿 resuspend.

3. 줄기 세포 배양 및 전파

  1. 매일 매일 문화를 확인 하 고, 3 일 후의 성장, 플라스 크 내의 부착 세포의 다른 클론을 관찰.
  2. 3 일 마다 문화 매체를 변경합니다.
  3. 7 ~ 12 일, 부착 셀 범위 합류, 일단 분리 그들 트립 신-EDTA 37 ° C에서 3 분의 1 mL로 세포 치료 또는 셀 스 크레이 퍼를 사용 하 여 부드럽게 합니다.
  4. 트립 신 작업 중지 문화 매체 (2.5 단계)의 4 ml (비율 1:5)를 추가 합니다.
  5. 259 x g6 분에 대 한 세포 현 탁 액을 원심, 제거는 상쾌한 고 전파 T25 플라스 크에 세포를 배치.
    참고: 3 일 마다 셀 합류에 도달합니다.
  6. 비-줄기 세포 문화에와 같은 존재를 피하기 위해 21 ~ 28 일 (약 6-8 구절)까지 셀을 전파 합니다.
  7. 트립 신-EDTA 부드럽게 된다고 37 ° C에서 3 분의 1 mL로 세포를 분리 합니다. 셀 서 스 펜 션 259 x g6 분에 대 한 원심
  8. 제거는 상쾌한 고 cytofluorimetric 분석 (6 단계)에 대 한 셀을 테스트 합니다.

4. 과도 PrPC Silencing siRNA에 의해

  1. 24 시간 배양 (2.5 단계)의 2 개 mL와 hDPSCsin 6 잘 플레이트 (2 x 105 셀/mL) 문화.
  2. 다음날, siRNA PrP 매체 (400 µ L)를 준비 합니다.
    1. 멸 균 시험관에 추가 384 µ L DMEM L.
    2. DMEM-l 5의 최종 농도를 1 µ L siRNA PrP의 각 유형에 대 한 추가 nM (4 siRNA PrP 사용 하 고 최저 효율 ≥70 %를 보장 하는 공급자에 의해 확인 되었다).
    3. DMEM L. transfectionreagent의 12 µ L 추가
    4. 소용돌이 혼합물과 transfection 단지의 형성 수 있도록 RT에서 10 분 동안 품 어.
  3. 각 샘플에 siRNA PrP 매체의 400 μ를 추가 하 고 37 ° c.에 6 h에 대 한 품 어
  4. SiRNA PrP 매체를 폐기 하지 않고 문화 매체 (2.5 단계)의 1.6 mL (1 ~ 5의 비율)을 추가 합니다.
  5. 37 ° c.에서 72 h에 대 한 셀을 두고
  6. 상쾌한을 제거 하 고 3 번 실시간에 PBS의 2 mL로 씻어
  7. 7 / 14 일 (단계 5.1)에 대 한 신경 문화 매체의 2 개 mL를 추가 합니다.
  8. 3 일 마다 신경 문화 매체를 변경 합니다.
    참고: SiRNA PrP 솔루션 각 시간 바꾸기 신경 문화 매체를 교체 합니다.
  9. 시간의 끝에, RT에서 PBS의 2 mL로 3 번 세척 하 고 서쪽 오 점 분석에 의해 신경 표면 항 원에 대 한 테스트.

5. 신경 유도 과정 hDPSCs

  1. 신경 문화 매체 준비 (500 mL)입니다.
    1. 신경 세포에 공식화 하는 기저 미디어의 444.7 mL를 준비 합니다.
    2. 매체에 배아와 성인 신경 줄기 세포 (10%)의 장기 생존 능력을 지 원하는 데 사용 되는 혈 청 무료 보충의 50 mL를 추가 합니다.
    3. 매체 (최종 농도 20 ng/mL)를 200 µ L의 기본적인 섬유 아 세포 성장 인자 (bFGF) (최종 농도가 40 ng/mL) 및 100 µ L 표 피 성장 인자 (EGF)를 추가 합니다.
    4. 페니실린/스 (1%)의 5 mL을 추가 하는 매체.
  2. 6 잘 플레이트 (2 x 105 셀/mL)에 문화 hDPSCs 펄프 분리에서 28 일까지 고 신경 문화 매체의 2 mL와 함께 그들을 자극 하는 것.
  3. 3 일 마다 삭제는 상쾌한, RT에서 PBS의 2 mL로 3 번 세척 하 고 신경 문화 매체의 2 개 mL를 대체.
  4. 7 / 14 일 후, 트립 신-EDTA 37 ° C에서 3 분의 1 mL 또는 부드럽게를 스 크레이 퍼 셀을 분리 합니다.
  5. 문화 매체 (2.5 단계) trypsin 작업 중지의 4 mL (비율 1:5)를 추가 합니다.
  6. 교류 cytometry 분석에 의해 프리온 단백질 표정 (7 단계) 나 신경 표면 항 원 (6 단계)의 존재에 대 한 테스트.

6입니다. hDPSCs Flow Cytometry로의 특성

  1. 선택 mesenchymal stromal (MSC)-특정 또는 신경 표면 항 원.
  2. 문화 문화 매체 (2.5 단계)의 2 개 mL와 6 잘 플레이트 (2 x 105 셀/mL)에서 hDPSCs.
  3. 28 일 치과 펄프 분리 또는 37 ° C 또는 부드럽게 스 크레이 퍼에 3 분에 대 한 트립 신-EDTA의 1 mL와 신경 문화 매체 (단계 5.1)의 14 일 후에 hDPSCs를 분리 합니다.
  4. 트립 신 행동을 막으려고 문화 매체 (2.5 단계)의 4 ml (비율 1:5)을 추가 하 고 259 x에서 centrifugate g 실시간에서 6 분에 대 한 다른 2 mL의 PBS로 2 회에 세척 실시간
  5. 4 ° c.에서 10 분에 대 한 PBS에 4 %paraformaldehyde 치료 또는 치료 hDPSCs를 수정
  6. 0.1% (v/v) 비 이온 계면 활성 제 PBS에서 실시간에 추가 10 분으로 hDPSCS를 permeabilize
  7. 실시간에서 1 시간에 대 한 PBS의 1 mL에 5% 탈지 말린 우유와 함께 차단 수행
  8. 1 mL의 PBS로 3 회 세척 하 고 안티 CD105 셀을 품 어 (1: 100 / 5 x 105 셀), 안티-CD44 (1: 100 / 5 x 105 셀), 안티-STRO-1 (1: 100 / 5 x 105 셀), 안티-CD90 (1: 100 / 5 x 105 셀), 안티-CD73 (1: 100 / 5 x 105 셀), β3-Tubulin 안티 (1: 100 / 5 x 105 셀), 안티-NFH (1: 100 / 5 x 105 셀)와 안티-GAP43 (1: 100 / 5 x 105 셀) 실시간에서 1 h mAb
  9. 셀 1 mL의 PBS로 3 회 세척 하 고 반대로 마우스 PE (1시 50분/5 105 셀 x) 또는 반대로 토끼 CY5 품 어 (1시 50분/105 셀 x 5) mAb 실시간에 추가 1 시간에 대 한
  10. 게이팅 (반대로 마우스 PE 또는 반대로 토끼 CY5 mAb) immunopositive 세포에 대 한 2 차 항 체를 사용 하 여 교류 cytometer와 모든 샘플을 분석 하 고 적어도 20000 이벤트를 취득.

7. hDPSCs Flow Cytometry 분석에 PrPC 식의 평가

  1. 문화 문화 매체 (2.5 단계)의 2 mL와 함께 hDPSCsin 6 잘 플레이트 (2 x 105 셀/mL).
  2. 21, 28 일 치과 펄프 분리에서 트립 신-EDTA의 1 mL와 신경 문화 매체 (5.1 단계)와 7 / 14 일 후에 hDPSCs를 분리 하 고 단계 6.4에에서 설명 된 대로 trypsin 작업 중지. 표본 4% paraformaldehyde PBS에 4 ° c.에서 10 분으로 수정
  3. 0.1% (v/v) 비 이온 surfactantin PBS 10 분에 대 한 실시간 제거에서와 상쾌한 permeabilize 고 얼룩 토끼 안티-PrP mAb EP1802Y (1시 50분/105 셀 x 5) 셀 mAb 실시간 품 방지 토끼 CY5 (1시 50분/105 셀 x 5)에서 1 시간에 대 한 대 한 mAb 실시간에 추가 1 시간
  4. 교류 cytometer와 모든 샘플을 분석 하 고 적어도 20000 이벤트를 확보.

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결과

세 번째 모 랄에서 얻은 치과 펄프에서 hDPSCs의 격리 및 분리 절차는 작은 변화 파괴적인 결과 발생할 수 있는 복잡 한 프로세스. 이 문서에서 사용 하는 프로토콜의 아서 외. 12 여러 가지 개선입니다. 절차의 대표적인 구조는 그림 1에 표시 됩니다.

hDPSCs 셀 별개 복제와 증식 및 차별화 용량7,8차이의 이종 인구를 나타냅니다. 펄프 분리 및 펄프의 작은 파편의 시드, 후 주변에 확장 하는 셀의 클러스터 관찰 합니다. 그림 2 는 4 일 (중앙 패널)과 7 일 (오른쪽 패널) 치과 펄...

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토론

이 작품에서는, 우리가 격리와 hDPSCs;의 신경 분화에 대 한 방법론에 초점을 맞춘 또한, 우리는이 과정에서 PrPC 의 역할 평가. 분리 과정에서 신경 세포와 같은 세포에 중요 한 단계는 hDPSCs를 차별화 하는 여러 방법이 있다. hDPSCs는 chondroblasts, adipocytes, osteoblasts, 신경 등 여러 계보에서 차별화 수 있습니다. 우리 신문, 우리 신경 감 별 법의 메커니즘 및 PrPC의 존재를 조사. 위에서 설명 했 듯이, 이러한 세포 STRO 1 CD44, CD90, CD105, CD73, 및10,,2526같은 전형적인 엽 stromal 특정 표면 항을 표현 한다.

프로토콜, 몇 가지 중요 한 단계는 분리 절차의 실패를 일으킬 수 있습...

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공개 사항

저자는 공개 없다.

감사의 글

이 작품은 "피코 Varrone" 및 티 대학 허브 "사비 나 Universitas" 빈첸초 Mattei에 의해 지원 되었다.

그림 5 (A, B) 테일러 & 프랜시스 회사에서 게시자의 허가 reprinted: 역할의 프리온 단백질-EGFR multimolecular 복잡 한 인간의 치과 펄프 파생 된 줄기 세포의 신경 분화 하는 동안. Martellucci, S., Manganelli V. Santacroce C., Santilli F., 자녀 가족 L., Sorice M., Mattei V. 프리온. 3 월 4 2018입니다. 테일러 & 프랜시스

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Amphotericin B 솔루션Sigma-AldrichA2942이것은 세포 배양 매체를 보충하는 데 사용되며, Streptomyce
Anti-B3tubulin세포 신호 기술의#4466여섯 가지 B-tubulin isoform 중 하나로, 태아와 출생 후 발달 중에 높게 발현되며, 말초 신경계에서 높게 유지
Anti-CD105 BD Biosciences611314Endoglin (CD105)은 인간 혈관 내피의 주요 당단백질로, 큰 세포 외 영역, 소수성 transmembrane 영역, 그리고 짧은 세포질 꼬리를 가진 타입 I 일체형 막 단백질입니다
Anti-CD44MilliporeCBL154-20ul양성 세포 마커 항체는 중간엽 줄기 세포에 대해 지시
Anti-CD73 세포 신호 전달 기술 13160CD73은 세포 외 뉴클레오시드 모노포스페이트의 가수분해를 촉진하는 70 kDa 글리코실 포스파티딜이노시톨, 막 결합 당단백질로, 세포 외 뉴클레오시드 모노포스페이트의 가수분해를 촉매
Anti-CD90MilliporeCBL415-20ul양성 세포 마커 항체는 중간엽 줄기 세포에 대한
Anti-GAP43 세포 신호 전달 기술 #8945는 성장 원뿔 및 고가소성
항-마우스 PE Abcamab7003은 플로우 사이토메트리 또는 FACS 분석에서 사용되는 항체입니다
. Anti-NFH 세포 신호 전달 기술 #2836은 총 Neurofilament-H 단백질
Anti-PrP mAb EP1802Y의Abcamab52604토끼 단클론 [EP 1802Y]에서 프리온 단백질 PrP
안티-토끼 CY5 Abcamab6564는 유세포 분석 또는 FACS 분석에 사용되는 항체입니다
Anti-STRO 1MilliporeMAB4315-20ul양성 세포 마커 항체는 중간엽 줄기 세포
B27 Supp XF CTSGibco에 의해 생명 과학 기술A14867-01B-27  만능 줄기 세포(PSC)에서 인간 신경 줄기 세포(hNSC)의 유도, hNSC의 확장을 지원하는 데 사용할 수 있습니다. hNSC의 분화 및 배양에서 성숙한 분화 뉴런의 유지
BD Accuri C6 유세포 분석기 블루 레이저(488 nm)와 레드 레이저(640 nm)가 장착된BD BiosciencesAC6531180187
BD Accuri C6 소프트웨어 BD Biosciences는 데이터를 획득하고, 통계를 생성하고, 결과를 분석하기 위해 BD Accuri C6 유세포 분석기 시스템을 제어합니다
bFGFPeproThec, DBA100-18Bbasic Fibroblast Growth Factor 
원심분리기 CL30RTermo fisher Scientific11210908이것은 밀도를 기반으로 액체, 가스 또는 액체의 분리에 사용되는 장치입니다
CO2 인큐베이터 3541Termo fisher Scientific317527-185세포 배양에 대한 최적이고 재현 가능한 성장 조건을 보장합니다
콜라겐 분해 효소, IV 타입;Life Technologies17104019Collagenase는 중성 아미노산 (X)과 글리신 사이의 결합을 Pro-X-Glyc-Pro 순서로 절단하는 프로테아제이며, 이는 콜라겐 일회용 메스에서 높은 빈도로 발견됩니다
.Swann-Morton501절단하는 데 사용됩니다
.DMEM-LEurocloneECM0060L Dulbecco's Modified Eagle's Medium Low Glucose with L-Glutamine with Sodium Pyruvate
EGFPeproThec, DBAAF-100-15표피 성장 인자 
라이프 테크놀로지10270-106소 태아 혈청는 세포 배양에서 다양한 기능을 제공하기 때문에 인기 있는 미디어 보충제입니다. FBS는 영양소, 성장 및 부착 인자를 전달하고 무혈청 매체(SFM) 시스템에서 재현하기 어려운 메커니즘에 의해 산화 손상 및 세포사멸로부터 세포를 보호합니다
Filtropur BT50 0.2,500 mL Bottle top filterSarstedt831,823,101용액의 여과에 사용되는 장치입니다
QiagenGS5621용 Flexitube GeneSolutionEntrez 유전자 5621을 위한 4개의 siRNA. 표적 서열 N.1 TAGAGATTTCATAGCTATTTA  N.2 CAGCAAATAACCATTGGTTAA  N.3. CTGAATCGTTTCATGTAAGAA  N.4  CAGTGACTATGAGGACCGTTA
Hank의 솔루션 1xGibco by life technologies240200083Hanks&prime의 필수 기능; 균형 잡힌 소금 용액은 pH와 삼투압 균형을 유지하는 것입니다. 또한 세포에 물과 필수 무기 이온을 제공합니다
. HiPerFect Transfection Reagent Qiagen301705HiPerFect Transfection 시약은 양이온성 및 중성 지질의 독특한 혼합물로, 효과적인 siRNA 흡수와 세포 내 siRNA의 효율적인 방출을 가능하게 하여 낮은 siRNA 농도의
Neurobasal A 를생명 기술의 Gibco10888022Neurobasal-A Medium은 순수한 출생 후 및 성인 뇌 뉴런의 장기 유지 및 성숙을 위해 설계된 기초 배지입니다 
파라포름알데히드Sigma-Aldrich30525-89-4파라포름알데히드는 염색 절차 중 세포와 조직 부분을 고정하는 데 사용되었습니다
. 페니실린/스트렙토마이신;유로클론ECB3001D 세균 오염을 통제하기 위하여 세포 배양 매체를 보충하기 위하여 사용
인산염 완충 식염수  (PBS)유로클론ECB4004LX10 PBS는 포유류 세포의 취급 및 배양에 사용되는 균형 잡힌 염 용액입니다. PBS는 포유류 세포를 관개하고, 세척하고, 희석하는 데 사용됩니다. 인산염 완충은 생리학적 범위
TC-Platte 6 well, Cell+,FSarstedt833,920,300부착 세포의 성장 표면입니다
조직 배양 플라스크 T-25,Cell+,Vented CapSarstedt833,910,302조직 배양 플라스크 T-25, 폴리스티렌, 민감한 부착 세포를 위한 Cell+ 성장 표면, 예: 일차 세포, 경사진 목, 환기 캡, 노란색, 멸균, 발열원이 없고, 비세포 독성, 10 개/봉지
Triton X-100 Sigma-Aldrich9002-93-1약한 비변성 조건에서 막 구성 요소의 회수를 위해 널리 사용되는 비이온 계면활성제
Trypsin-EDTA 유로클론ECB3052D 트립신은 라이신과 아르기닌 아미노산 잔기의 C 말단 쪽에서 펩타이드를 절단합니다. 트립신은 배양 표면에서 부착 세포를 제거하는 데 사용됩니다.
튜브Sarstedt62,554,502튜브 15 mL, 120 mm x17 mm, PP
VBH 36 C2 컴팩트멸균ST-003009000환경 및 작업자를 완전히 보호합니다
ZEISS Axio Vert.A1 – 반전  현미경Zeiss3849000962ZEISS Axio Vert.A1은 독보적인 보급형 가격이며 명시야, 위상차, PlasDIC, VAREL, 향상된 hoffman 변조 대비(iHMC), DIC 및 형광을 포함한 모든 콘트라스트 기술을 제공할 수 있습니다. 형광 표지된 세포에 대한 부드러운 이미징을 위해 LED 조명을 통합합니다. Axio Vert.A1은 일상적인 작업을 위해 인체공학적으로 설계되었으며 조직 배양 후드 내부에 넣을 수 있을 만큼 컴팩트합니다.
폴리엔 항진균 항생제입니다.되는 . 됩니다. 합니다. 항체입니다. 내인성 수준을 감지하는 항체입니다.. 유세포 분석기. . . 조직을 스 FBS의 깁코. . PRNP 사용하더라도 높은 유전자 녹다운을 가능하게 합니다. 입니다.

참고문헌

  1. Robey, P. G., Kuznetsov, S. A., Riminucci, M., Bianco, P. Bone marrow stromal cell assays: in vitro and in vivo. Methods in Molecular Biology. 1130, 279-293 (2014).
  2. Jiang, Y., et al. Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow. Nature. 418, 1-49 (2002).
  3. Kern, S., Eichler, H., Stoeve, J., Kluter, H., Bieback, K. Comparative analysis of mesenchymal stem cells from bone marrow, umbilical cord blood, or adipose tissue. Stem Cells. 24, 1294-1301 (2006).
  4. Zannettino, A. C. W., et al. Multi-potential Human adipose-derived stromal stem cells exhibit a perivascular phenotype in vitro and in vivo. Journal of Cellular Physiology. 214, 413-421 (2008).
  5. Mattei, V., et al. Role of lipid rafts in neuronal differentiation of dental pulp-derived stem cells. Experimental Cell Research. 339, 231-240 (2015).
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