여기서, 간세포암(HCC)의 전형적인 면역 특징을 재기하는 간암의 임상적으로 관련 있는 뮤린 모델의 개발을 설명한다.
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방법 논문
간 염증과 섬유증의 설정에서 발생하는 간세포암의 종양 성 간세포 유도 직교 마우스 모델
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
간세포암(HCC)의 전형적인 면역 특성을 다루는 임상적으로 관련된 동물 모델의 부재는 근본적인 메커니즘의 해명과 혁신적인 면역 치료 전략의 개발을 크게 저해했습니다. 인간 HCC를 재량화하는 이상적인 동물 모델을 개발하기 위해, 면역 적격 남성 C57BL/6J 마우스는 먼저 간 섬유증을 유도하기 위해 탄소 사염화물 (CCl4)주사를 받은 다음 젊은 남성으로부터 조직학적으로 정상 인간 세포체를 받습니다. SV40 T 항원 (TAg)-형질전환 마우스 (MTD2) 인트라 비장 (ISPL) 접종에 의해. 사춘기에 수용자 남성 마우스에서 생성 된 안 드로 겐 간 특이적 프로모터의 제어 하에 TAg 발현을 시작. 결과적으로, 전송된 간세포는 암세포가 되고 간 섬유증/간경변의 조정에 있는 종양 질량을 형성합니다. 이 새로운 모델은 간 섬유증/간경변의 맥락에서 인간 HCC 개시 및 진행을 모방하고 면역 기능 장애를 포함하여 인간 HCC의 가장 전형적인 특징을 반영합니다.
서론
간세포암(HCC)은 미국에서 가장 빠르게 증가하는 유형의 암(미국)1,2,3. 매년 약 850,000개의 새로운 사례가4,5 및 700,000명의 환자가 이 치명적인질병으로6, 7,8,9,10으로 진단됩니다. 전 세계적으로 암 관련 사망의 두 번째로 높은 원인입니다. HCC의 관리는 외과적 절제술, 이식, 절제, 화학색전증, 또는소라페닙(sorafenib) 과같은 전신 요법을 포함한다. 외과 절제술 또는 이식으로 조기 진단 및 관리는 전체 생존 율이 가장 높은4. 불행하게도, 환자의 대다수는 나중 단계에서 나타나고 절제, 화학색전증 또는 sorafen....
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프로토콜
참고: 동물 과목을 포함한 모든 절차는 미주리 대학의 IACUC에 의해 승인되었습니다. 모든 마우스는 "실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 가이드"에 설명 된 기준에 따라 인도적 치료를 받았다. 세포 격리 및 예방 접종에 대한 다음 절차는 후드에서 수행해야합니다. 모든 연주자는 마우스와 조직을 처리하기 위한 표준 개인 보호 장비를 착용해야 합니다.
1. 탄소 사염화물의 IP 주입으로 간 섬유증 과 간경변의 유도 (CCl4)
참고: 그림 1을 참조하십시오. (CCl4는 매우 위험한 시약이며, 내화학성 장갑을 착용하여 신중하게 취급해야 합니다.)
- 6~8주 된 수컷 C57BL/6J 마우스를 구하십시오(재료 표참조).
- 원심분리기 튜브에 옥수수 오일에 10% CCl4 (v/v) 용액을 준비합니다. 주입할 마우스의 수를 기준으로 총 부피를 결정합니다(단계 1.6 참조).
- 적절한 마우스 처리 기술을 사용하여 주사를 위해 하나의 마우스를 선택합니다.
- 등쪽(복부) 측면을 위로 올려 마우스를 수동으로 제지합니다. ....
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결과
TAg-형질전환 마우스로부터 분리된 종인성 간세포(도2)를비장 내 주사에 의해 야생형 마우스의 간에서 파종하였다(도3). 이식된 간세포는 종양 특이적 항원 SV40 TAg(도 5)와 함께 정형암 HCC 종양을 성공적으로 안정적으로 성장시키고 간염증 및 섬유증의 설정에서 성장하였다(도1).
그림 1: HCC의 마우스 모델을 준비하기 위한 회로도. HCC의 혁신적인 뮤린 모델을 확립하기 위한 실험적인 디자인. C57BL/6J 마우스는 간 섬유증을 유도하기 위하여 4 주 동안 매주 두 번 CCl
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토론
이 프로토콜을 통해 우리는 인간 HCC 개시 및 진행을 모방하는 HCC의 신뢰할 수 있고 재현 가능한 뮤린 모델을 확립했습니다. 임상적으로, 많은 위험 요소는 연속적으로 간 손상을 유도, 간 섬유증, 간경변과 HCC의 최종 단계. 우리의 프로토콜에서, CCl4의 IP 주입은 먼저 야생 형 마우스에서 간 섬유증을 생산하는 데 사용되며, 이는 후속 종양 발생 간 세포가 간 섬유증의 설정에서 종양을 형성 할 수 있게합니다. 우리는 종양 대형이 CCl4 처리 후에 2 주 후에 간세포 접종을 수신한 마우스에서 가장 성공적으로 일어났다는 것을 것을을 발견했습니다, 그밖 시간 점에 주사를 수신하는 마우스에 비해. 또한, 우리는 간 섬유증이 CCl4 주입 후에 4 달까지 검출될 수 있다는 것을 것을을 발견했습니다. 이 접근은 CCl 4에 노출 없이 마우스에 비교된 HCC 종양을 개발하는 마우스의 90% 이상 에서유래합니다. 우리의 모형에서, 간세포는 C57BL/6J.......
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공개 사항
선언할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작품은 NIH / NCI R01 CA16435-01A1 (K. F. 스타벨리 - 오 캐롤, PI) 및 NIH / NCI R01CA208396 (마크 케스터, 광푸 리, 케빈 F. 스타벨리 - 오 캐롤)에 의해 지원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 마취 기계 | VETEQUIP | IMPAC6 | 수술용 마취기 |
| 나비 바늘 | BD | 8122963 | 간 관류에 사용되는 바늘 |
| C57BL/6 마우스 | Jackson Lab | 000664 | Prototol에 사용된 마우스 |
| Carprofen | CRESCENT CHEMICAL | 20402 | 통증 방출용 Carprofen |
| Cell Strainer | CORNING | REF 431751 | 셀 스트레이너, 70µ m, 간세포 격리용 |
| 원심분리기 | Beckman Coulter | Allegra X-30R | 세포 격리용 원심분리기 |
| 클립 | Teleflex Medical | REF 523700 | 티타늄 클립, 비장 |
| 현미경 | Zeiss | Primovert | 세포 관찰을 위한 현미경 |
| Mtd2 마우스 | N/A | 2002년 로스웰 파크 암 연구소에서 개최된 윌리엄 A 박사의 선물, 우리 실험실에서 유지 | |
| 바늘 | BD | REF 305109 | BD precisionglide 바늘, 27G x 1/2 (0.4mm x 13mm) |
| 봉합 | ETHICON | J303H | 코팅 VICRYL 봉합사 |
| SV40 T Ag 항체 | Abcam | ab16879 | IHC 주사기 BD용 항-SV40 T-항원 항체 |
| REF 309626 | 세포 주입용 1mL TB 주사기 | ||
| Trypan blue SIGMA | T 8154 | 세포 생존율 테스트용 Trypan blue 용액 | |
| 상처 클립 | Reflex | reflex9, 부품 번호 201-1000 | 상처 닫힘용 스테인리스 스틸 상처 클립 |
참고문헌
- O'Connor, S., Ward, J. W. Hepatocellular carcinoma - United States. Morbidity and Mortality Weekly Report. 59, 517-520 (2010).
- Petrick, J., Kelly, S., Altekruse, S., McGlynn, K., Rosenberg, P.
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