방법 논문

마우스 폐 내 선택적 에이전트 침착을 개선하기 위한 직접 기관내 투여

DOI:

10.3791/59450

⸱

2019년 5월 20일

 ,  ,  , 
1Department of Medicine, University of Colorado Denver, 2Department of Medicine, Denver Health Medical Center

이 논문에서

요약

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쥐에서 실험제의 INTracheal (IT) 투여는 종종 말단 폐에 비대칭 전달을 초래한다.  이 보고에서는, 우리는 살아있는 마우스에 있는 각 폐를 비 작동가능하게 캐뉼기 위하여 직접적인 기관내 (IB) 접근을 기술합니다.  이러한 접근법은 하나의 폐에 제제를 선택적으로 투여하기 위해 사용될 수 있거나 또는 두 폐에 대한 대칭에이전트 전달을 개선하기 위해 적응될 수 있다.

초록

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실험제의 INTratracheal (IT) 투여는 출혈성 폐 섬유증과 같은 확산 폐 질환의 뮤린 모델에서 필수적인 기술이다.  그러나, 말단 마우스 폐에 경부 투여 에이전트의 분포는 종종 비대칭, 폐 실치 농도가 마우스의 작은 (그러나 동등하게 접근) 왼쪽 폐에서 증가와.  본 보고서에 기재된 것은 살아있는 마우스의 왼쪽 및/또는 우측 폐를 비수술적으로 캐뉼로 하는 새로운 기관내(IB) 접근법이다.  또한 이 접근법이 실험제의 폐 전달의 좌우 대칭성을 개선하기 위해 하나의 폐에 제제를 선택적으로 투여하거나 적응(투여량 조정 IB 전달을 통해)하는 데 사용될 수 있는 방법을 입증하여 확산 모델을 개선하는 방법을 입증하였다. 청혈유도 폐 섬유증과 같은 폐 질환.

서론

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마우스에서 실험제의 직접 폐 투여는 폐 면역 반응, 급성 폐 손상, 및 폐 섬유증의 연구를 허용한다. 직접 폐 투여는 전형적으로 설명된 바와 같이, 내강내(IT) 주입을 통해 수행된다1,2,3. 그러나, 이 접근은 비선택적이고, 비표적및 수시로 비대칭 적인 방식으로 두 폐에 영향을 미칩니다.  폐 손상의 실험 적인 모델링은 선택적으로 대조군으로 반대쪽 폐의 사용을 허용하는 1개의 특정 폐를 표적으로 하는 기능에서 유익할 수 있습니다. 반대로, 인간 확산 폐 질환의 정확한 모델링은 양측 폐 실치종에 대한 실험제의 대칭 분포로부터 유익합니다.

이 보고서의 전체적인 목표는 마우스의 왼쪽 또는 오른쪽 폐에 실험제제를 선택적으로전달하는 방법을 설명하는 것이다(도 1). 이러한 기관내(IB) 투여 접근법은 마우스 폐의 일방적인 치료를 허용하고 양측 메인스템 기관지에게 제제의 동등한 전달을 보장하기 위해 용이하게 적응될 수 있다. IB 투여를 사용하여 더 큰 우측 폐에 더 큰 용량의 실험제제를 전달하고 더 작은 좌측 폐(....

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프로토콜

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모든 동물 프로토콜은 콜로라도 덴버 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다. 아래에 설명 된 모든 절차 (섹션 4-7) 남성과 여성 C57BL/6 마우스를 사용 하 여 최적화 되었습니다. 이 접근은 체중에 있는 19-40 g에 구역 수색하는 마우스를 사용하여 유효했습니다.

1. IB경영을 위한 플랫폼 구축

  1. 기저 날개와 스탠딩 윙 사이의 원래 90° 각도에서 북엔드를 70°(그림2A)로구부립니다.
  2. 금속 북엔드의 스탠딩 윙중앙에 구멍을 뚫습니다(그림2A).
  3. 플라스틱 보드의 해당 위치에서 동일한 크기의 구멍을 뚫습니다. 두 개의 작은 구멍을 열등하고 측면으로 드릴합니다(그림2A).
  4. 플라스틱 보드의 작은 구멍 사이에 4:0 실크 봉합사를 드레이프(그림2A).
  5. 후크와 루프 테이프를 플라스틱 보드 의가장자리에 놓습니다(그림 2A).
  6. 플라스틱 보드를 나사....

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결과

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선택적 IB 삽관은 특정 로브 (오른쪽 폐) 또는 바실라 세그먼트 (왼쪽 폐)를 대상으로합니다.

오른쪽 폐에 대한 EBD의 IB 투여는 섹션 5.1에 기재된 바와 같이 수행되었다. 실험이 완료된 후, 마우스는 복강내 케타민/자일라진의 치명적인 용량을 투여하였고, 폐는 EBD 분포의 데모를 위해 수확되었다(도4A,오른쪽). 폐의 총 외관은 시도의 90%가 오른쪽 폐의 작은 후방 엽을 수액으로 하는 반면, 시도의 10%는 열등한 로브를 표적으로 한다는 것을 보여줍니다. 이러한 로브의 작은 부피가 말단 캐nulation 동안 마우스의 보상 빈맥을 설명하는 것으로 추측됩니다 (카테터를 통한 미세 환기를 유지하기 위해).

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토론

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폐 상해는 BLM 6과 같은 해로운 에이전트의 IT 행정을사용하여 설치류에서 고전적으로 모델링되었습니다. 그러나 이러한 IT 관리는 이러한 접근법을 통해 폐 전달의 비표적 특성을반영하여 누덕거리는 상해로 이어질 뿐이다 7. 폐 상해 모델링의 이러한 제한은 약물, siRNA 또는 세포 치료와 같은 비 해로운 실험 에이전트의 IT 전달을 시도할 때 직면한 유익한 과제입니다.

이 보고서에서는 실험 에이전트의 직접 IB 관리에 대해 설명합니다. 이 접근 방식은 IT 관리에 대한 고전적인 접근 방식에 비해 두 가지 뚜렷한 이점을 제공합니다. 첫째, 접근은 반대쪽 폐의 절약을 허용하는 1개의 폐에 선택적인 일방적인 행정을 허용합니다. 이러한 접근법은 일방적으로 손상된 폐(예를 들어, 허혈 재관류 상해 8)로약물을 선택적으로 투여하여, 손상되지 않은 폐에서 비특이적.......

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공개 사항

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저자는 그들이 경쟁 적인 재정적 이익이 없다고 선언합니다.

감사의 글

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 작품은 NHLBI 교부금 HL125371에 의해 E.P.S.와 DOD (CDMRP) 교부금 W81XWH-17-1-0051Y에 의해 지원되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
22 G 차폐 IV 카테터BD381423
BleomycinEnzo 생명 과학BML-AP302-0010
컴팩트 미니 설치류 마취기 DRE 수의학9280
에반스 블루 염료시그마-알드리치E2129
FITC-덱스트란시그마-알드리치FD150
이소플루란피라말 중환자 치료NDC 
LED-30W 광섬유 듀얼 구즈넥 라이트 현미경 조명기AmScopeLED-30W
저온 소작기와 세밀한 팁;BovieAA02
Precisionglide 바늘, 18G x 1"BD305195베벨 팁, 길이 12mm 
자일라진AKORNNDC 59399-110-20
자타민VetOneNDC 13985-702-10 케타민

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. An improved simple method of mouse lung intubation. Journal of Applied Physiology. 106 (3), 984-987 (2009).
  2. Thomas, J. L., et al. Endotracheal intubation in mice via direct laryngoscopy using an otoscope....

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재인쇄 및 허가

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