애기 장 대의 바닥 싱크대 조직에 로드 Cfda 추적자의 총격전 운동

요약

이 프로토콜의 목표는 애기장 대의 아래 부분의 다른 사이트에 cfda를 로드 하는 방법을 보여주기 위한 것입니다. 그런 다음 촬영에 CF의 결과 분포 패턴을 제시 합니다.

초록

Symplastic 트레이 서 5 (6)-carboxyfluorescein 디 아세테이트 (CFDA)는 세포 간 연결, 걸러 수송 및 혈관 패터 닝을 보여주기 위해 살아있는 식물에 널리 적용 되 고 있다. 이 프로토콜은 뿌리 절단 및 피하-핀치 과정을 각각 사용 하 여 애기 장 대의 CARBOXYFLUORESCEIN (CF) 이동을 보여준다. 이 두 가지 절차는 CF 이동의 다양 한 효율성을 초래 합니다: 약 91%는 반면에 하 부 틸 핀치 절차를 가진 촬영에서 CF의 외관, 루트 절단 절차와 CF의 약 70% 외관. 로딩 사이트의 간단한 변화는이 symplastic 염료의 이동 효율에 상당한 변화를 초래 하 고, CF 운동은 대부분 뿌리 hypocotyl 접합부에 의해 symplastic 규제 될 수 있음을 시사 한다.

서론

다양 한 스펙트럼 특성을 가진 많은 형광 추적자 (carboxyfluorescein)¹, 8 hydroxypyrene, 3, 6 트리 설파 닉 산², 루시퍼 옐로우 CH (lych)³,에 스 컬 린 및 cter⁴가 개발 되어 symplastic 운동 및 걸러 활동을 모니터링 하는 식물에 적용. 일반적으로, symplastic 염료는 표적 조직에서 절단으로 로딩 되 고, 리포터의 순차적 분산은 식물의 다른 부분으로 전달 되어 세포 간 통신을 보여줄 것 이다. 염료 흡수의 메커니즘은 완전히 이해 되지 않았지만, 살아있는 세포 내부의 CF 움직임을 기본으로 하는 원리는 널리 인정 받고 있습니다. CF (CF 디 아세테이트, CFDA)의 에스테 르 형태는 비 형광 이지만 막 투과성입니다. 이 속성은 세포에 염료의 급속 한 막 확산을 허용. 살아있는 세포 내부에서, 세포내 에스테 라 제는 CFDA의 3 ' 및 6 ' 위치에서 아세테이트 그룹을 제거 하 고, 형광 및 막 불 투과성 CF를 방출 한다 (도 1을 참조 하면 라이트 외²). C....

프로토콜

1. 애기 장 대 MS 배지에서 수직 성장

1. 층 류 캐비닛의 내부는 사용 전에 30 분의 자외선과 15 분의 공기 흐름으로 처리 해야 합니다. UV 표시등이 켜져 있을 때 유리 도어를 닫아야 합니다. 모든 공구와 플레이트를 캐비닛에 배치 하기 전에 70% 에탄올로 분무 하십시오.
2. 층 류 캐비닛 아래 표준 90 mm 직경의 페 트리 디쉬에서 무라 시 게와 스 쿤 크 (MS) 배지를 준비 한다.
   참고: MS 미디어에는 다음과 같은 구성 요소가 포함 되어 있습니다. 20.6 mM NH₄아니오₃, 18.8 mm kno₃, 1.25 mm 2 PO₄,1.5 mm 2· 2 시간₂분, 0.1· H2o, 1.03 µ m 나₂무₄·₂시간 3 분 0.1 mM, 30 µm 즈 소 4 · 7 월₃일(일), 0.1 µ m.₅시간 2 분, 0.1µ, 1.39, 97 µ_....

결과

Symplastic 운동은 종종 환경 변동에 따라 달라질 수 있습니다. 식물 성장 상태의 섭 동, 및 심지어 조직 준비의 과정은 plasmodesmata의 크기 배제 한계에 영향을 미칠 것 이다, 따라서 symplastic 수송에 영향을 미치는²². 염색 효율을 개선 하기 위해, 우리는 온도와 습기가 단단히 제어 되는 성장 실에서 우리의 작업을 제한 하 고 또한 가능한 한 빨리 전체 절차를 수행 합니다 (이상적으로 10-15 분 이내에 페 트리 디쉬의 뚜껑을 들어 올려). 실험 중 이러한 예방 조치는 실패 한 촬영 얼룩의 비율을 효과적으로 줄일 수 있습니다.

우리는 CF 촬영와 드의 움직임을 보여주기 위해 두 가지 약간 다른 절차를 설명 했다. 일반적으로 두 절차는 먹이 후 약 2 시간 동안 촬영에서 CF 염색을 초래할 .......

토론

신생 연구는 식물이 실험 절차 (²²)에 도입 된 조작을 포함 하는 외부 자극 (²³)에 신속히 반응할 수 있다는 것을 보여주었다. 우리의 초기 실험에서,이 지식에 대 한 우리의 감독은 종종 염색 실패로 이어집니다. 이 단원에서는이 실험을 수행할 때 다음 예방 조치를 염두에 두어야 합니다. (1) 수확 후 씨앗은 저온과 낮은 수 분으로 설정 된 저장 캐비닛에 보관 해야 합니다. (2) 식물의 조작, 특히 캐비닛의 공기에 대 한 노출은 최소한의 시간으로 유지 되어야 합니다. (3) 실험 조건은 일정 하 게 유지 되어야 하며, 예를 들어, 모든 절차는 성장 실에서 수행 되어야 한다.

지적 되어야 하는이 실험의 또 다른 측면은 CFDA의 로딩 볼륨이 가능한 한 작게 유지 되어야 한다는 것입니다. 과잉 솔루션은 종종 과잉 CFDA 용액이 모 세관 작용을 통해 촬영까지 확산 될 수 있는 유물로 이어지고,.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
KNO3	시노팜 화학 시약	10017218
KH2PO4	Sinopharm 화학 시약	10017608
MgSO4· 7H2O	Sinopharm 화학 시약	10013018
CaCl2· 2H2O	Sinopharm 화학 시약	20011160
MnSO4· H2O	Sinopharm 화학 시약	10013418
Na2MoO4· 2H2O	시노팜 화학 시약	10019818
붕산	시노팜 화학 시약	10004818
ZnSO4· 7H2O	Sinopharm 화학 시약	10024018
CuSO4· 5H2O	Sinopharm 화학 시약	10008218
CoCl2· 6H2O	Sinopharm 화학 시약	10007216
KI	Sinopharm 화학 시약	10017160
FeSO4· 7H2O	시노팜 화학 시약	10012118
EDTA	Sinopharm 화학 시약	10009717
NaOH	Sinopharm 화학 시약	10019718
KOH	Sinopharm 화학 시약	10017018
설탕	Sinopharm 화학 시약	10021418
Myo-inositol	맥클린	I811835
니코틴산	맥클린	N814565
피리독신 HCl	맥클린	V820447
티아민 HCl	맥클린	T818865
글리신	맥클린	G800880
한천 분말	Novon	ZZ14022
형광 현미경	Zeiss	Axio Zoom V16
해부 현미경	SDPTOP	SRE-1030
200&뮤; l 피펫	드래곤 실험실 기기	713111110000-20-200ul
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