이 문서는 여러 상악 골치와 관련된 뮤린 치주염의 합자 유발 모델을 확립하기위한 프로토콜을 제시, 후속 분석뿐만 아니라 감소 동물 사용에 대한 관련 치은 조직과 뼈의 더 큰 영역의 결과. 인간 피험자와 유사한 방식으로 경구 호중구를 평가하는 기술도 설명되어 있다.
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이 문서는 여러 상악 골치와 관련된 뮤린 치주염의 합자 유발 모델을 확립하기위한 프로토콜을 제시, 후속 분석뿐만 아니라 감소 동물 사용에 대한 관련 치은 조직과 뼈의 더 큰 영역의 결과. 인간 피험자와 유사한 방식으로 경구 호중구를 평가하는 기술도 설명되어 있다.
뮤린 모델을 활용한 치주 질환의 병리생리학을 연구하는 주요 장점은 동물의 비용 절감, 유전자 변형 균주의 배열, 수확 된 부드럽고 단단한 조직에서 수행 할 수있는 방대한 수의 분석입니다. 그러나 이러한 시스템 중 상당수는 절차적 비판을 받습니다. 대안으로, 치주 유발 모델인 치주 질환은 국부적으로 개발 및 보유되는 이영양성 경구 미생물군유전체의 개발 및 보존에 의해 구동되며, 이는 급속히 유도되고 비교적 신뢰할 수 있는 것으로 채택될 수 있다. 불행히도, 합자 유도 뮤린 치주염 프로토콜의 변이체는 치주암의 초점 영역으로 격리되고 설치된 합자의 조기 avulsion을 받습니다. 이것은 후속 분석에 사용할 수 있는 조직의 양을 최소화하고 연구에 필요한 동물의 수를 증가시킵니다. 이 프로토콜은 앞서 언급한 것을 완화하는 대안적인 접근을 가진 마우스에 있는 경구 호중구를 복구하기 위하여 새로운 헹구 기술의 향상한 보유 그리고 사용으로 확장한 몰 합자를 두는 것을 요구하는 정확한 조작을 기술합니다 기술적 과제에 대한
치주질환(PD)은 현저한 숙주 이환율 및 경제적 부담과 관련된 골용해 질환으로, 이는 치은 염증 및 연조직 부착 및 골변 지지체 모두의 손실로나타나며,1, 2,3,4. 이 프로세스는 경구 microbiota와 호스트의 타고난 면역 계통 사이 상호 작용에 의해 지배됩니다. 또한 당뇨병, 심혈관 질환 및 암5,6,7,8을포함하는 다른 전신 염증성 질환의 악화와 관련이 있다. 역사적으로, PD 병인은 포르피로모나스 치은염9와같은 특정 박테리아의 다량에 의존한다는 가설을 세웠다. 그러나, 최근의 증거는 PD의 미생물 성분이 치과 생물막에 의해 매개된다는 것을 시사한다. 생물막은 건강한 공생 및 파괴적인 이영양제 상태10,
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모든 뮤린 연구는 관련 윤리 규정을 준수하고 토론토 동물 관리 위원회와 연구 윤리 위원회 (프로토콜 20011930)에 의해 승인되었습니다.
1. 합자 설치
참고 : 이것은 표준 수술실에서 수행 할 수있는 비 멸균 수술 절차입니다. 세균이없는 동물 (여기에 포함되지 않음)의 사용은 생체 안전 캐비닛 내에서 의 취급, 멸균 기구의 사용 및 치주 병원균과 구강의 접종을 의무화하여 치주염의 임상 증상을 유발합니다.
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나이브(도3A)와염증(도3B)뮤린구강이 합자 유발 치주염에 이차적인 경구 헹구 샘플로부터의 대표적인 유동 세포분석 데이터가 제공된다. 설치된 합자로부터의 PMN의 회수도입증된다(도 3C). 유동 세포계 채널 전압을 수동으로 보정하고 단일 스테인드 보정 비드로 보정을 수행하였다. PMN은 Ly6G+veF4/80-ve로 정의되었으며, 개략적인 게이팅 전략38을사용한다. 각 경구 헹구 및 합자 샘플로부터 최소 500개의 문이 닫힌 PMN 이벤트를 획득하였다. PMN 생존가능성은 트라이판 블루 염색에 의해 약 37%로 결정되었다. 폐포 골 수위(ABC)에서 건강한 시멘로에나멜 접합부(CEJ)까지 측정된 폐포.......
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치주염의 뮤린 합자 유발 모델의 사용과 관련된 가장 중요한 요소는 희생 또는 의도적 제거의 시간까지 합자의 보존을 중심으로한다. 설치된 생물막-리텐션 합자는 11-16일 기간39일사이에 고원, 6일 만에 폐포골 높이의 상당한 손실을 유도할 수 있다. 뼈 손실의 최대 기간 전에 동물 대상자를 희생하기로 결정, 이 합자 유발 치주염의 훨씬 짧은 모델을 렌더링, 더 조기 합자 avulsion의 발생률을 줄이기 위해 선택되었다, 희생의 시간 전에 합자의 손실로 정의, 이는 동물을 렌더링 비 진단.
이 모델의 가장 일반적으로 인용된 단점은 4.4 mm (M1)에서 2.6 mm (M3)40까지둘레범위의 뮤린 몰 치열의 작은 치수로 인해 합자를 설치하는 인식 된 기술적 어려움을 강조합니다. 이 문제는 (최대) 10 분 / 동물을 필요로하고 마취의 전달을 포함하는 합자 설치를위한 외과 직원 / 연수생의 참여를.......
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저자는 공개 할 것이 없다.
J. W. C. 건강 연구의 캐나다 학회에 의해 지원 됩니다 (CIHR). 저자는 트라이판 블루 염색을 수행하는 그녀의 도움에 대한 박사 춘샹 태양에게 감사드립니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 안티 마우스 F4/80 항체 | BioLegend | 123131 | BV421, 클론 BM8 |
| 안티 마우스 Ly6G 항체 | BD | 560602 | PerCP-Cy5.5, 클론 1A8 |
| C57BL/6 수컷 | 마우스 Charles River | 8-12주 된 | |
| 원추형 원심분리기 튜브 | FroggaBio | TB15-500 | 15mL |
| 원추형 원심분리기 튜브 | FroggaBio | TB50-500 | 50 밀리리터 |
| FACS 버퍼 | 다중 | 1% BSA(BioShop), 2mM EDTA(Merck), 1x HBSS-/- (Gibco) | |
| FACSDiva | BD | v8.0.1 | |
| Fibre-Lite | Dolan-Jenner | 모델 180 | |
| FlowJo | Tree Star | v10.0.8r1 | |
| 열 요법 펌프 | Hallowell | HTP-1500 | |
| 핫 유리 비드 살균기 | 전자 현미경 과학 | 66118-10 | Germinator 500 |
| 홍채 가위 | Almedic | 7602-A8-684 | 직선 |
| 케타민 | Vetoquinol | 100mg/mL | |
| LSRFortessa | BD | X-20 | |
| 마우스 세럼 | Sigma | M5905-5ML | |
| 나일론 메시 필터 | Fisher Scientific | 22-363-547 | 40 & 마이크로; m |
| 파라포름알데히드 | Fisher Scientific | 28908 | 16%(w/v), 메탄올 프리 |
| 인산염 완충 식염수 | 시그마 | D1408-500ML | CaCl2 및 MgCl2 제외, 10x |
| 플라스틱 일회용 주사기 | BD | 309659 1mL | |
| 쥐 혈청 | 시그마 | R9759-5ML | |
| 실크 봉합사 | Covidien | SS652 | C13 USP 5-0 |
| 스플린터 집게 | Almedic | 7726-A10-700 | #1 |
| 스플린터 집게 | Almedic | 7727-A10-704 | #5 |
| 스테레오 해부 현미경 | Carl Zeiss | 28865 | Photo-Zusatz |
| 멸균 하이포데믹 바늘 | BD | 305111 | 26G X 1/2" |
| 주사기 | BD | 309659 | 1 mL |
| 자일라진 | 롬푼 | 20mg/mL |
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