이 프로토콜은 합성 소변 및 인간 혈청에서 말라리아 프리마퀸 (PMQ) 검출을위한 새로운 색채 방법을 설명합니다.
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방법 논문
UV-Vis및 말라리아 방지 프리마퀸의 육안 측정을 위한 최적화된 Griess 반응
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
Primaquine (PMQ), 중요 한 안티 말라리아 약물, 세계 보건 기구에 의해 권장 되었습니다 (WHO) P. vivax와 ovale에의해 발생 하는 생명을 위협 하는 감염의 치료에 대 한. 그러나, PMQ는 포도당-6-인산 탈수소 효소 (G6PD) 결핍을 가진 환자에 있는 심각한 용혈으로 이끌어 내는 원치 않는 역효과가 있습니다. 복용량 모니터링의 목적으로 PMQ 결정에 대 한 간단 하 고 신뢰할 수 있는 방법을 개발 하는 필요가 있다. 2019년 초, PMQ 색채 정량화를 위한 UV-Vis 및 육안 기반 접근법을 보고했습니다. 검출은 PMQ와 anilines 사이의 Griess와 같은 반응을 기반으로하여 착색 된 아조 제품을 생성 할 수 있습니다. 합성 소변에서 PMQ의 직접 측정에 대한 검출 한계는 나노 몰 범위에 있다. 더욱이, 이 방법은 임상적으로 관련된 농도에서 인간 혈청 샘플로부터 PMQ 정량화에 대한 큰 잠재력을 보여주었다. 이 프로토콜에서는 유색 아조 제품의 합성 및 특성화, 시약 준비 및 PMQ 결정 절차에 대한 기술적 세부 사항을 설명합니다.
서론
PMQ는 가장 중요한 말라리아 약물 중 하나이며, 재발을 방지하기 위해 조직 주혈계뿐만 아니라 질병전염을방해하는 게임 세포질로도 작동1,2,3,4. 혈관 내 용혈은 PMQ의 부작용에 관한 중 하나입니다, 이는 G6PD에 그 결핍에 매우 심각해진다. G6PD 유전 무질서는 말라리아 풍토성 지역에 있는 3-30% 사이 유전자 주파수로 세계전반 분포한다는 것을 알려지다. PMQ 약점의 엄격은 G6PD 부족의 정도 뿐만 아니라 복용량 및 PMQ 노출의 내구에 달려있습니다5,6. 위험을 낮추기 위해 WHO는 말라리아 치료를 위해 PMQ의 단일 저용량(0.25 mg 염기/kg)을 권장했습니다. 그러나, 이것은 여전히 환자 약물 감수성5,7의변화에 의해 도전된다. 용량 모니터링은 PMQ 투여 후 약물 동력학을 평가하는 데 필요하며, 이는 제한된 독성으로 성공적인 치료를 ....
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프로토콜
1. 유색 아조스의 합성
- 25 mL 라운드 바닥 플라스크(RBF)에서, 안일린(0.1 mmol)과 프리마퀸 비스포스페이트(45.5 mg, 0.1 mmol)를 H3PO4 용액 10 mL(5% v/v)로 용해시. 얼음 욕조에 RBF를 넣고, 용액에 적절한 크기의 교반 바를 추가하고, 교반 판에 RBF를 넣어.
참고: 아조 3g (그림 2)의합성을 위해, 프리마퀸 비스포스페이트 0.2 mmol을 사용한다. - NaNO2 (6.9 mg, 0.1 mmol)를 냉각수 1 mL에 녹인 다음 반응 혼합물을 드롭 으로 첨가하십시오. 얼음 욕조를 제거하고 반응 혼합물을 실온에서 교반하십시오.
- 실리카 겔 코팅 된 얇은 층 크로마토그래피 (TLC) 플레이트로 반응을 모니터링합니다. 디클로로메탄(DCM)/메탄올(MeOH) 혼합물(vol/vol = 5:1)을 TLC용 용리온으로 사용하십시오. Azo 제품은 TLC 플레이트에 색이 있는 반점을 나타내며, 육안으로 구별하기 쉽습니다. TLC에서 PMQ 반점이 사라지면 반응을 멈춥시다.
- 얼음 욕조에서 NaOH (2M)에 의해 pH....
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결과
반응 조건을 최적화하기위해(그림 2),다양한 아니라인이 Griess 반응을 통해 PMQ와 결합하는 데 사용되었다. 우리는 다른 색상의 아조스의 시리즈를 달성했다. 전자 기증 치장을 가진 아니라인은 UV-vis 흡수 스펙트럼에 적색 변화를 일으킬 수 있다는 것이 밝혀졌다. 이론적 계산은 시간 의존 밀도 기능 이론(TD-DFT)을 통해 수행되었다. 도 2A에제시된 바와 같이, 계산 결과는 3.1%의 평균 오차와 광학 측정에 양호한 일치하였다. 4-메톡시아니린은 반응속도, 제품 용해도 및안정성(21)에서의양호한 성능으로 인해 PMQ 검출 반응을 수행하기 위해 사용되었다. 또한, 4-메톡시아니라인의 아조 제품은 붉은색으로 육안으로 구별하기 쉽습니다. 따라서, 이러한 반응은 육안 PMQ 검출에 대한 잠재력을제공한다(그림 3).
<.......액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
편리한 PMQ 정량화를 위한 대색 방법을 설명했습니다. 잠재적으로 가장 간단하고 비용 효율적인 현재 방법입니다. 더 중요한 것은, 이 방법은 어떤 장비를 사용하지 않고 육안 기반 PMQ 측정을 가능하게 제공 제공합니다.
PMQ 검출을 위한 최적화된 Griess 반응은 504 nm에서 최대 흡수를 가진 적색 아조를 생성할 수 있습니다. 내인성 생체 분자의 UV-vis 흡수로 인한 잠재적 영향은 제한적이므로 생물학적 유체에서 PMQ를 직접 측정할 수 있는 방법을 약속합니다. 결과에 의해 지시된 바와 같이, 우수한 선형관계(R2= 0.998)는 0-200 μM의 농도 범위에 걸쳐 소변 PMQ 검출에 대해 발견되었다(도6A). PMQ에 대한 검출 한계(LOD)는 0.63 μM인 것으로 나타났다. 이 방법은 또한 인간 혈청에서 PMQ의 직접 측정에 대한 큰 잠재력을 보여 주었다. 혈청 PMQ 검출을 위한 10~200.......
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공개 사항
저자는 선언할 것이 없습니다.
감사의 글
저자는 광저우 중국 의학 대학의 창업 보조금과 GZUCM의 청소년 과학 연구 교육 프로젝트 (2019QNPY06)를 인정합니다. 우리는 또한 시설에 대한 지원에 대한 광저우 중국 의학 대학의 링난 의학 연구 센터를 인정합니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 4-메톡시아닐린 | 알라딘 | K1709027 | |
| 2,4-디메톡시아닐린 | 10154207 | ||
| 3,4-디메톡시아닐린 | 비데팜 | BD21914 | |
| 4-메틸아닐린 | 아다마스-베타 | P1414526 | |
| 4-니트로아닐린 | 맥클린 | C10191447 | |
| 96-웰, 플랫 보튼 | 랩서브 | ||
| Gaussian@16 소프트웨어 | Gaussian, Inc | 버전 : x86-64 SSE4_2 지원 / Linux | |
| 염산 | GCRF | 20180902 | |
| Marvin 스케치 (소프트웨어) | CHEMAXON | 무료 버전 : 15.6.29 | |
| 인산 | 맥클린 | C10112815 | |
| 프리마퀸 bisiphosphate | 3A 화학 물질 | ||
| 아질산나트륨 | Alfa Aesar | 5006K18R | |
| 설폰아미드 | TCI(상하이) | GCPLO-BP | |
| Varioskan LUX 플레이트 리더 | Thermo Fisher | SkanIt 소프트웨어 4.1과 함께 제공 |
참고문헌
- Fernando, D., Rodrigo, C., Rajapakse, S. Primaquine in vivax malaria: an update and review on management issues. Malar Journal. 10, 351(2011).
- Deng, C., et al. Large-....
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재인쇄 및 허가
