2 단계 피부 발암은 2개의 국소 적용된 화학제품에 의해 유도됩니다. 돌연변이 원 7,12-디메틸벤젠[a]anthracene)은 표피 세포의 돌연변이를 일으키고 일반적인 성장 자극기 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-아세테이트의 지속적인 적용은 피부 유두종 형성을 가속화합니다.
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방법 논문
디메틸벤드[a]안트라세네 및 12-O-테트레이드카노일 포르볼-13-아세테이트(DMBA-TPA)를 이용한 화학적 유발 피부 발암 모델
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
암은 가장 치명적인 인간의 질병 중 하나입니다. 실험적인 암 모형은 종양 진행을 승진시키기에 있는 다른 세포 모형 및 유전자의 복잡한 상호 작용에 통찰력을 얻고 다른 치료 접근의 효험을 시험하기 위한 발판을 제공하기 위하여 중요합니다. 가장 일반적으로 사용되는 실험적 염증성 암 모델 중 하나는 DMBA-TPA 2단계 피부 발암 모델입니다. 종양 형성은 두 가지 다른 화학 물질, 7,12-디메틸벤드[a]안트라세네(DMBA) 및 12-O-테트레이드카노일 포르볼-13-아세테이트(TPA)의 국소 적용에 의해 이 모델에서 유도되며, 이는 함께 피부에 유두종 형성을 일으킨다. 1 차적인 결과는 피부에 있는 유두종 대형이기 때문에, 모형은 종양 개시 (종양 자유로운 생존) 및 종양 진행 (눈에 보이는 종양의 수 그리고 크기) 둘 다를 해결하는 이상적이고, 믿을 수 있고, 재현가능한 방법입니다. DMBA-TPA 치료의 효과는 염증 메커니즘을 통해 전달되며, 이 모델은 종양 형성에서 면역 계통의 역할을 연구하는 데 특히 적합합니다. 그러나 이 모델은 화학 물질을 적용할 수 있는 피부 및 기타 표면으로 제한됩니다. 이 문서에서는 모델을 성공적으로 사용할 수 있는 자세한 프로토콜이 제공됩니다.
서론
암은 세계에서 사망의 주요 원인 중 하나입니다. 따라서, 질병에 대한 더 나은 이해를 얻고 잠재적인 치료 접근법을 탐구하기 위해 신뢰할 수 있는 실험적 질병 모델을 개발해야 하는 요구가 있다. 피부암 발병을 연구하기 위해 생체내에서 가장 일반적으로 사용되는 실험 모델 중 하나는 화학적으로 유도된 2단계 피부발암 생성 모델1,2이다. 이 모델은 면역 세포 침투 및 혈관 신생과 같은 특정 사건 이외에 종양 개시, 승진 및 진행을 연구하는 도구를 제공합니다.
2단계 피부 발암 모델을 사용하기 위해, 마우스의 뒷피부는 함께 종양 형성을 유도하는 2개의 상이한 화학물질로 치료된다. 모델은 돌연변이원, DMBA의 저용량으로 개시되고, 종양 프로모터, TPA3에 장기간 노출된다(도1). DMBA는 표피 세포와 1 차적인 각질 세포 줄기 세포의 DNA를 가진 공유 adducts를 형성하여 무작위로 DNA를돌연변이4,5,
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프로토콜
여기에 설명된 프로토콜은 핀란드 국립 동물 윤리 위원회(프로토콜 번호 ESAVI/23659/2018)의 승인을 받았습니다.
1. 실험 동물, 시약 및 장비
- 나이와 성냥생을 사용한다. 대부분의 마우스에 있는 피부가 그 나이 의 주위에 텔로겐 (휴식 단계)에 있기 때문에 나이의 7-9 주에 연구 결과를 시작합니다2.
- 연구 기간 동안 동물의 행동을 관찰하고 종종 남성과 함께 발생하는 싸움을하면 별도로 보관하십시오. 싸움은 종양 형성을 촉진하는 피부에 상처를 일으킬 수 있습니다. 암컷 마우스는 그들의 보다 적게 공격적인 행동 때문에 선호됩니다. 일반적인 실험군 크기는 그룹24, 25,26,27당8-20 마리의 동물 사이에서 다양하다.
참고: 이전 연구에서 볼 수있는 생물학적 차이를 기반으로 전력 계산은 충분히 큰 그룹 크기를 선택하는 데 도움이됩니다. 이 문서에서 예로 사용되는 균주는 Balb /c 및 C57B....
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결과
주요 결과는 치료 또는 유전자형 그룹 사이의 생존 (즉, 유두종 무료) 시간입니다. 두 번째 결과는 각 그룹에서 주당 유두종의 수입니다(그림 2). 예상 된 결과는 유두종 자유 시간 및 실험 (2 개 이상의) 그룹 사이의 유두종의 수에서 통계적으로 유의한 차이이다. 유두종의 수를 계산하고 프로모션 (TPA) 단계에서 곡선을 그리는 것이 좋습니다 그 단계에서 그룹 간의 차이의 아이디어를 얻을 수 있습니다. 실험을 너무 일찍 종료하는 것은 통계적으로 유의한 차이를 숨길 수 있습니다.
도 2: DMBA-TPA 유도 피부 발암 모델의 주요 결과. 마우스 피부와 두 가지 주요 결과에 유두종의 대표적.......
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토론
DMBA-TPA 유도된 피부암은 매우 재현성이 뛰어나고 개시에서 악성종양에 이르는 종양 진행에 대한 정보를 제공하기 때문에 가장 일반적으로 사용되는 암 모델 중 하나입니다. 주요 결과 측정, 유두종 형성은 쉽고 안정적으로 양적입니다. 이 모델은 종양 개시 (종양없는 생존) 및 진행성 (종양 수 및 크기)을 동시에 해결합니다. 이 모델은 잠재적 치료제와 같은 다양한 화합물을 연구하는 데 적합하며 유전자 변형 동물의 종양 진행에 대한 개별 유전자의 영향을 연구하는 데 적합합니다. 주어진 변형에 대한 모델을 적용할 때 기존 문헌을 연구하여 변형이 모델에서 어떻게 반응하는지(예: 첫 번째 유두종이 얼마나 빨리 나타나는지 알아내기 위해) 하는 것이 좋습니다. 유전자 변형 마우스를 사용할 때, 야생 형 흰자 새끼의 사용은 항상 권장됩니다. DMBA 또는 TPA를 아세톤으로 대체하거나 둘 다 대체하는 것과 같은 잠재적인 추가 제어의 사용은 DMBA 또는 TPA를 제거하거나 투여 순서를 반전시킬 가능성이 매우 낮기 때문에 매우 논쟁의 여지가 .......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없다.
감사의 글
이 작품은 핀란드 아카데미 (보조금 25013080481 및 25013142041 (I.J.), 286377 및 295814 (M.P.), 287907 (T.J.), Päivikki 및 사카리 솔베르크 재단 (M.P., T.J.), 핀란드 의학 재단 (T.P.), 경쟁 국가 연구 탐페레 대학 병원의 전문가 책임 영역 의 자금 조달 (부여 9V049 및 9X044 (M.P.), 9X011 및 9V010 (T.J.), Fimlab 실험실의 전문가 책임 영역의 경쟁 국가 연구 자금 조달 (부여 X51409 (I.J.)), Tays 지원 재단(I.J., M.P., T.J.), 탐페레 결핵 재단(I.J., M.P., T.J.), 핀란드 문화 재단(M.V.), 파울로 재단(T.P.), 핀란드 암 학회(M.P.), 에밀 알토넨 재단(T.P.).
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 1000 ul rpt XL 눈금 필터 팁(멸균), 리필 | Starlab | S1182-1730-C | |
| 300 ul RTP 눈금 필터 팁(sterile), 리필 | Starlab | S1180-9710-C | |
| 7,12-Dimethylbenz[a]anthracene (DMBA) | Sigma | D3254-100MG | 삼키면 유해하며 암을 유발할 수 있습니다. 빛으로부터 보호하여 보관하십시오. |
| 아세톤 | 시그마 | 1000141011 | 빠르게 증발하며 인화성이 있습니다. |
| Attane vet 1000 mg/g | Piramal Critical Care Limited | 흡입용 액체 이소플루란 | |
| 배터리로 작동되는 클리퍼 Isis | Albert Kerlb GmbH | GT421 | 모피 면도용 |
| CONTRAfluran-Restgasfilter | ZeoSys GmbH | 마취용 | |
| Linex Nature N1030 Ruler 30 cm | Staples Business Advantage | 60383 | 유두종 |
| 측정용중간 CO2 챔버 300 x 200 x 200mm - Red | VetTech Solutions Ltd | AN045AR | 희생 |
| Mekasoft | Mekalasi | 23008 | 테이블 커버 |
| 마우스 (Balb / c JRj) | Janvier labs | 다른 변종도 가능한 | |
| 마우스 (C57BL / 6JRj) | Janvier labs | 다른 변종도 가능 | |
| Panasonic Lumix DMC-FS5 디지털 카메라 | Panasonic | ||
| 파라포름알데히드 | Merck | 30525-89-4 | 조직학 샘플용 |
| Phorbol 12-myristate 13-acetate 일명 12-Otetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) | Enzo | BML-PE160-0001 | |
| 정밀 저울 PLJ-C/PLJ-G | KERN & SOHN GmbH | PLJ 600-3CM | |
| Pre-Set CO2 System-2 Chamber-S/S Housing | VetTech Solutions Ltd | AN044BX | 희생용 |
| RNAlater | Qiagen | 76104 | 핵산 샘플용 |
| Tacta 피펫 100-1000 ul | Sartorius | LH-729070 | |
| Tacta 피펫 20-200 ul | Sartorius | LH-729060 | |
| UNO 마취키 필러 | Scintica 계측 Inc. | 마취용 | |
| UNO 안면 마스크 마우스 | Scintica instrumentation inc. | 마취용 | |
| UNO FM2200 유량계 | Scintica instrumentation inc. | 마취용 | |
| UNO 가스 배기 장치 | Scintica instrumentation inc. | 마취용 | |
| UNO 인덕션 박스 | Scintica instrumentation inc. | 마취용 | |
| UNO200VAP Vaporizer | Scintica instrumentation inc. | 마취용 |
참고문헌
- DiGiovanni, J. Multistage carcinogenesis in mouse skin. Pharmacology & Therapeutics. 54 (1), 63-128 (1992).
- Abel, E. L., Angel, J. M., Kiguchi, K., DiGiovanni, J. Multi-stage chemical carcinogenesis in mouse skin: fundamentals and applications. Nature Protocols.....
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