방법 논문

정맥 이식편을 사용하여 동맥 혈압하에서 인티맥 증식을 평가하는 재혈관 외과를 모방한 토끼 정맥 중개 모델

DOI:

10.3791/60931

⸱

2020년 5월 15일

 ,  , 
1Department of Cardiovascular Surgery, Graduate School of Medicine, Kyoto University, 2Clinical Translational Research Program, RIKEN Center for Biosystems Dynamics Research, 3Department of Cardiovascular Surgery, Takamatsu Red Cross Hospital

이 논문에서

요약

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본 프로토콜은 정맥 이식편을 사용하여 정맥 혈관 화 수술 후 정맥 심상 증식을 감쇠하는 전략을 개발하기 위한 동맥 혈압에 정맥을 복종시킴으로써 정맥 친혈증을 실험적으로 만드는 것을 목표로 합니다.

초록

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정맥 이식편은 허혈성 질환에 대한 재혈관 화 수술에서 자가 이식편으로 일반적으로 사용되었지만 동맥 혈압에 노출되기 때문에 친밀한 증식의 가속화로 인해 장기적인 길직성은 여전히 좋지 않습니다. 본 프로토콜은 토끼 경정맥을 원소 경동맥에 끼워 실험적인 정맥 내 심상 증식의 확립을 위해 설계되었습니다. 이 프로토콜은 신체 트렁크 깊숙이 외과 적 수술을 필요로하지 않으며 절개 범위가 제한되어 있어 동물에 대한 침습력이 적어 이식 후 장기 관찰이 허용됩니다. 이 간단한 절차는 연구원이 이식된 정맥 이식의 친밀한 증식의 진행을 감쇠하는 전략을 조사하는 것을 가능하게 합니다. 이 프로토콜을 사용하여, 우리는 수베정맥 이식편으로 증식상태에서 수축상태에 이르는 혈관 평활근 세포(VSMC)의 표현형을 제어하는 것으로 알려진 microRNA-145(miR-145)의 전달 효과를 보고했습니다. 우리는 VSMC의 표현형 변경을 통해 이식 수술 전에 miR-145를 변환하여 정맥 이식의 친시 증식의 감쇠를 확인했습니다. 여기에서 우리는 revascularization 수술에 있는 정맥 이식의 친근한 증식을 감쇠하기 위하여 이용될 수 있는 전략을 조사하기 위하여 보다 적게 침략적인 실험 적인 플래트홈을 보고합니다.

서론

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동맥경화증으로 인한 허혈성 질환을 경험하는 환자의 수는 전 세계적으로1으로증가하고 있다. 심혈관 질환에 대한 의료 및 외과 적 치료의 현재 발전에도 불구하고, 허혈성 심장 질환, 이러한 심근 경색 등, 사망률과 사망률의 주요 원인 남아2. 더욱이, 사지로의 혈류감소가 특징인 말초 동맥질환은 치명적인 사지 허혈을 유발하며, 여기서 환자의 약 40%가 진단 후 6개월3이내에 다리를 잃고 사망률은 최대 20%3이다.

관상 동맥 우회 이식 (CABG) 및 말초 동맥에 대한 우회 수술과 같은 혈관 혈관 화 수술은 허혈성 질환에 대한 주요 치료 옵션입니다. 이 수술의 목적은 죽상 경화성 동맥의 협착 또는 폐색 병변의 말단 부위를 향한 충분한 혈류를 제공하기 위해 새로운 혈액 경로를 제공하는 것입니다. CABG를 위한 내부 흉부 동맥과 같은 실동맥 이식편에서는, 예상되는 더 긴 개통때문에 우회 접목으로서 선호되지만, 자가 사페누스 정맥과 같은 정맥 이식편은 접근성 및 가용성이 높기 때문에 일반적으로 사용된다4. 정맥 이식편의 약점은 동맥 이식편 질환으로 이어지는 동맥 압박을 받을 때 가....

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프로토콜

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참고: 동물에 대해 수행되는 모든 외과 적 절차는 실험실 동물의 관리 및 사용 가이드 (www.nap.edu/catalog/5140.html) 또는 기타 적절한 윤리 지침에 따라 수행되어야합니다. 의정서는 진행하기 전에 해당 기관의 동물 복지 위원회의 승인을 받아야 합니다.

1. 동물의 준비

  1. 2.7~3.0kg의 수컷 흰 토끼(또는 몸크기에 해당하는 토끼)를 구입하십시오.
  2. 토끼를 12시간 동안 밝은 -어두운 주기로 1주일 동안 적응시키고 시술 전에 일반 토끼 차우 다이어트를 먹입니다.

2. 마취 및 동물 설정

참고 : 모든 후속 절차는 무균 조건하에서 수행해야합니다. 수술 분야 및 장치는 사용하기 전에 10 % 포비돈 - 요오드 용액, 70 % 알코올 또는 사분면 암모늄 화합물로 소독해야합니다.

  1. 양구리 정맥을 통해 펜토바르비탈 나트륨 (25 mg/kg)의 정맥 투여로 토끼를 마취시.
  2. 토끼가 강도를 잃어 버렸는 것을 확인 한 후 수술대에 옮기고 척추 위치에 놓습니다. 마취 마스크로 코와 입을 덮습니다. 0.7-1.0 % 이소플루란 산소 혼합물을 흡입하여 전신 마취의 ....

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결과

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도 1A는 정맥 중보 수술 후 2주 후에 성공적인 종양 성 증식의 대표적인 이미지를 나타낸다(상부 패널). 하부 패널은 친위 증식(lower panel)을 감쇠시킨 마이크로RNA-145-로드 폴리(젖산-코글리콜산) 나노입자의 치료 효과를 나타낸다. 도 1B는 인산완충식염수 대조군(PBS), 대조군 마이크로RNA(Cont-miR), 및 마이크로RNA-145(miR-145) 군을 이용한 대조군 간의 친혈 증식의 비교를 나타낸다. 마이크로RNA는 폴리(젖산-코글리콜산) 나노입자를 함유하였다. microRNA-145를 가진 처리는 현저하게 감쇠된 친혈 증식. 도 2는 세포 증식 마커인 Ki-67에 대한 면역 염색을 나타낸다. miR-145 군에서 더 적은 Ki-67 양성 세포가 관찰되며, 이는 미성숙증식 상태에서 성숙한 수축 상태로의 VSMC의 표현형 변화를 나타낸다.

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토론

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본 프로토콜은 VSMC가 증식상태에서 수축 상태로 의 한 표현형을 제어하고 이어서 생체 내에서 정맥 친위증의 진행을 감쇠시키기 위한 다양한 분자 또는 유전적 개입을 테스트하기 위한 실험 플랫폼을 제공하도록 설계된다. 이 모델을 사용하여, 우리는 성공적으로 수술 후 2 주에 친시 증식을 준비(그림 1A)VSMC 표현형을 제어하는 microRNA-145의 치료 잠재력을 표시26,,27,추가 자궁 정맥 증식의 감쇠를 조사하기 위한 모델로 본 프로토콜을 검증.

우리의 토끼 친밀한 증식 모형은 다음 3개의 중요한 단계로 이루어져 있습니다: 1) 카테터 상해; 2) 경정맥 중간; 및 3) 원위 가지 결찰(그림 3). 풍선 카테터 통로로 다친 정맥 이식편은 탈멸된 것으로 나타났으며,.......

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공개 사항

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저자는 공개 할 것이 없다.

감사의 글

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이 작품은 일본 문부과학성(25462136)의 연구보조금으로 지원되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
10% 포비돈-요오드 용액Nakakita872612Surgical 소모품
2-0 VICRYL PlusJohnson and JohnsonVCP316HSurgical 소모품
4-0 실크 봉합Alfresa pharmaGA04SB수술용 소모품
8-0 폴리프로필렌 봉합사Ethicon8741H수술용 소모품
Cefazorin sodium니치이코 제약6132401D3196항생제
포가티 카테터 (2Fr)Edwards Lifesciences LLCE-060-2F외과 소모품
헤파린니프로873334항응고제
정맥 카테터 (20G)테루모SR-OT2051C외과 소모품
이소플루란후지필름095-06573마취
리도카인 염산염MP Biomedicals193917마취
펜토바르비탈 나트륨도쿄 화학 산업P0776마취
사

참고문헌

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  1. Causes of death, 2000-2016, Global Health Estimates (GHE). World Health Organization (WHO). , Available from: https://www.who.int/healthinfo/global_burden_disease/estimates/en/ (2019).
  2. Benjamin, E. J., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2019 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 139....

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