이 실험에서 마우스는 혈관을 얼룩지게 할 수있는 로다민 B 이소티오카네이트 -dextran과 꼬리 정맥에 주입됩니다. 간이 노출되고 고정된 후에, 간의 특정 부분은 다광 현미경 검사를 사용하여 살아있는 바디에 있는 깊은 조직을 관찰하기 위하여 선택될 수 있습니다.
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방법 논문
마우스 간 조직에서 혈관의 다광 현미경 관찰
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
마우스 간 조직의 내트라바산 역학을 관찰하면 마우스 간의 조직 관련 질병에 대한 심층관찰 및 연구를 더욱 심층적인 관찰할 수 있습니다. 마우스는 혈관을 얼룩지게 할 수 있는 염료를 주입합니다. 생체 내에서 마우스 간을 관찰하기 위해, 그것은 노출되어 프레임에 고정된다. 간 조직에서 혈관의 2 차원 및 3 차원 이미지는 다광 현미경을 사용하여 수득된다. 선택한 사이트의 조직의 이미지는 장기적인 변화를 관찰하기 위해 지속적으로 획득됩니다. 간 조직에 있는 혈관의 동적 변경은 또한 관찰됩니다. 다광현미경검사는 깊은 조직 단면 또는 기관에서 세포 및 세포 기능을 관찰하는 방법입니다. 다광 현미경 검사는 조직 미세 구조에 감도를 가지며 생체 내에서 높은 공간 해상도에서 생물학적 조직의 이미징을 가능하게하여 조직의 생화학 적 정보를 캡처 할 수있는 기능을 제공합니다. 다광현미경검사는 간 일부를 관찰하는 데 사용되지만 간을 고정하여 이미지를 보다 안정적으로 만드는 것은 문제가 된다. 이 실험에서, 특수 진공 흡입 컵은 간을 고치고 현미경의 밑에 간보다 안정적인 심상을 얻기 위하여 이용됩니다. 또한, 이 방법은 염료로 이러한 물질을 표시하여 간에서 특정 물질의 동적 변화를 관찰하는 데 사용할 수 있습니다.
서론
혈관은 인체의 다양한 장기 조직에 영양분을 제공하고 물질을 교환 할 수 있습니다. 동시에, 많은 사이토카인, 호르몬, 약물 및 세포는 또한 특정 위치로 혈관 수송을 통해 기능. 간 조직의 혈관 변화를 관찰하면 간 조직에서혈량의 분포와 물질의 운반을 이해하는 데 도움이 될 수 있으며, 특정 혈관 관련 질환의 분석을돕는다 1,2.
마우스에서 간 혈관을 관찰 하는 많은 방법이 있다. 그 중에서도 광학 현미경 검사법은 불투명혈관 조직3을관찰하는 데 많은 한계를 가지고 있다. 다광 현미경 검사는 비침습적 고해상도4를가진 살아있는 간의 혈관을 이미지하기 위하여 이용될 수 있습니다. 뿐만 아니라 혈관의 3 차원 이미지를 얻을 수 있습니다., 하지만 기술은 또한 그 안에 생물학적 효과를 관찰 하는 조직을 구성 하는 데 도움이 사용할 수 있습니다.; 더욱이, 전체 조직은 계산된 단층 촬영 및 자기 공명 화상 진찰5에서와같이 마이크로혈관만이 아니라 심영상될 수 있다.
다광 현미경 ....
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프로토콜
모든 동물 관리 및 절차는 히스와 웰빙에 대한 중국 난팡 병원 정책에 따라했다 (응용 프로그램 번호: NFYY-2019-73).
1. 마우스 준비
- 마우스를 마취합니다.
- 주사기에 펜토바르비탈 나트륨(50 mg/kg)을 준비합니다.
- 마우스(8주된 남성 C57BL/6)를 왼손으로 잡아 배가 위를 향하고 머리가 꼬리보다 낮을 수 있도록 하십시오. 75%의 알코올로 복부 피부를 소독하십시오.
- 오른손에 주사기를 잡고, 3-5mm피부의 오른쪽에 바늘로 복부 흰색 선을 관통한다. 주사기 바늘과 피부가 45° 각도에 있는지 확인하고 펜토바르비탈을 복강에 천천히 주입하십시오. 면도 후 마우스 절개 부위 주변을 3번 번 소독하여 75%의 알코올과 클로르헤시딘 용액을 번갈아 사용합니다.
- 마취가 올바른 반사의 부족에 의해 성공적이었는지 확인하십시오.
- 로다민 B 이소토오카네이트-dextran을 카우달 정맥에 넣습니다.
- 10 mg/mL 로다민 B 이소토오카네이트-디엑스트라넨의 100 μL을 주사기에 준비한다.
- 마우스의 꼬리를 75%의 알코올로 닦으부습니다.
- 왼손으로 꼬리를 잡고, 정맥....
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결과
간에서 혈관의 분포는 다광현미경검사를 사용하여 수득된 도 1에서볼 수 있다. 혈관은 트렁크에서 방출되는 복수의 가지로 나누어 주변 공간으로 분배된다. 혈관의 외주는 빨간색이며 내부 구멍은 어둡고 내부에는 많은 것들이 있습니다. 이미지가 명확해질수록 관측 평면에 가깝습니다. 염료가 주변 조직을 침투하여 다른 물질을 얼룩지게 하기 때문에 붉은 반점도 있습니다. 비디오 1에서는적혈구에서 움직이는 세포가 될 수 있는 비적색것들이 있습니다. 동영상이 끝나면 이러한 것들 중 일부가 어두워져 있습니다. 이것은 아마도 고정 된 간 시간이 지남에 잘 고정 되지 않은 때문에. 이 방법은 2 시간 동안 이미징을 허용합니다.
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토론
특정 살아있는 조직을 관찰하는 것은 조직 내부의 물질의 변화, 국소화 및 생물학적 효과를 이해하는 효과적인수단이다(17) 이 실험에서 중요한 단계는 호흡과 심장 박동으로 인한 운동 유물의 문제를 해결할 수있는 장기 이미징 기구로 간을 고정하고 관찰을위한 다광자 현미경을 사용하는 것입니다. 이 방법을 이용하여, 생체 내 간의 내부 조직은 다광 현미경을 통해 관찰되고, 혈관은 형광으로 표시되어 그들의 위치와 3차원 구조를 명확하게 관찰한다. 이 방법은 형광으로 물질을 라벨링하고 추가 시각화를 제공하기 위해 살아있는 조직에서 물질을 동적으로 따라가하여 특정 효과를 관찰하는 데 사용할 수 있습니다.
다광현미경검사는 조직화된 조직 환경에서 세포 이벤트에서 정보를 수집하기 위한 필수 도구가 되기 위해 새로운 기술에서 진화했습니다. 그러나, 기관은 특정 조직 및 장기를 관찰하는 데 효과적일 수 있도록 안정적인 이미지를 생성하기 위해 제자리에 고정되어.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작품은 중국 국립 자연과학 재단(81772133)의 지원을 받았습니다. 8190244), 광동자연과학기금(2020A1515010269, 2020A1515011367), 광저우시민건강과학기술연구프로젝트(201803010034, 201903010072), 군사의료혁신사업(108X7).
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 1mL 주사기 x 2 | Hunan Pinan Medical Devices Technology | YA0551 | |
| 5W 가열 패드 | BiolinkOptics Technology | BL336 | |
| 75% 절대 에탄올 | Guangdong Guanghua Sci-Tech | 1.17113.023 | |
| 흡수성 면봉 | 건강한 위생 왕국 | ||
| 마우스 수술 기구 | RWD 생명 과학 | SP0001-G | 가위와 핀셋 포함 |
| 다광자 현미경 | Olympus | FV1200MPE | |
| Organ 이미징 픽스처 | BiolinkOptics Technology | BL336 | 흡입 컵, 호스, 음압 펌프 및 브래킷 포함 |
| Rhodamine B isothiocyanate– 덱스트란 | 시그마 | R9379 | |
| 면도기 | Lei Wa | RE-3201 | |
| 나트륨 펜토바르비탈 | 시그마 | P3761-25G |
참고문헌
- Wu, Z., et al. Multi-photon microscopy in cardiovascular research. Methods. 130, 79-89 (2017).
- Zhou, M., Ling, W., Luo, Y. Intrahepatic mass-forming cholangiocarcinoma growing in a giant hepatic hemangioma: A case report. Medicine (Baltimore)
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재인쇄 및 허가
