방법 논문

마우스에서 대장 내 시경 유도 핀치 생검을 수행하고 후속 조직 변화를 평가

DOI:

10.3791/60949

⸱

2021년 2월 5일

 ,  ,  , 
1Department of Pathology, Renaissance School of Medicine, Stony Brook University, Stony Brook, NY, 2Stony Brook Cancer Center, Stony Brook, NY, 3Department of Medicine, Weill Cornell Medicine, New York, NY

이 논문에서

요약

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여기에서, 우리는 마우스에 있는 대장 내시경 유도핀치 생검을 유도하고 실시간으로 상처 폐쇄를 추적하는 절차에 대한 상세한 설명을 제공합니다. 또한, 상처 침대의 조직학적, 면역 조직 화학 및 분자 분석을 위한 조직의 제조를 위한 방법이 제공됩니다.

초록

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급성 부상 반응뿐만 아니라 상처 치유 과정에서 발생하는 조직 및 세포 변화를 이해하는 것은 위장관 (GI) 관의 질병을 연구 할 때 가장 중요합니다. 뮤린 식민지 핀치 생검 모델은 이러한 프로세스를 정의하는 유용한 도구입니다. 추가적으로, 창자 발광 함량 (예를 들면, 세균) 및 결장 사이 상호 작용을 공부할 수 있습니다. 그러나, 상처 유도 및 신뢰할 수 있는 방식으로 시간이 지남에 따라 상처 폐쇄를 추적 하는 능력은 어려울 수 있습니다. 더욱이, 조직 제제 및 방향은 조직학적 및 분자 변화를 최적으로 심문하는 표준화된 방법으로 수행되어야 합니다. 여기서는 생검으로 인한 부상과 반복대장내시경 검사를 통한 상처 폐쇄 모니터링을 설명하는 상세한 방법을 제시합니다. 상처 크기의 일관되고 재현 가능한 측정, 분자 분석을 위해 상처 침대를 수집하고 조직의 단면에 상처 침대를 시각화할 수 있는 능력을 보장하는 접근법이 설명되어 있습니다. 성공적으로 이러한 기술을 수행 하는 능력은 급성 부상 응답의 연구에 대 한 수 있습니다., 상처 치유 와 결장 내에서 발 광 호스트 상호 작용.

서론

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위장관(GI)은 여러 기능, 숙주 세포 유형(예: 상피, 면역, 기질 등)뿐만 아니라 수조 개의 미생물을 고려할 때 복잡한 장기 시스템입니다. 이 복잡성에 비추어, 기관의 질병은 수시로 이 요인의 전부의 상호 작용을 관련시킵니다. 예를 들어, 염증성 장질환(IBD)은 염증성 세포, 이영양증 및 상피수리1,2,3,4,5,6,7의활성화를 포함하는 기관내 염증 및 완화의 주기와 관련이 있다. IBD 및 기장의 그밖 선동적인 조건을 연구하기 위하여 적당한 모형 시스템을 갖는 것은 질병의 병인을 해명하기 위하여 중요합니다. 여러 가지 모델은 유전적으로 조작된 마우스를 포함한 IBD 병인증을 연구하고 설치류8,9,10에서황산나....

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프로토콜

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여기에 설명 된 모든 절차는 Weill Cornell 의학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다." 에: "여기에 설명 된 모든 절차는 웨일 코넬 의학과 스토니 브룩 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었다.

1. 대장 내시경 검사 및 상처 유도

  1. 1.9mm 강성 보어 내시경을 칼집에 먼저 삽입하여 내시경의 성분을 미리 조립한다(도1A-B). 제공된 튜브를 이용하여 에어 펌프(대장 결핍을 제공하기 위해)를 작동 채널 옆 칼집의 왼쪽에 있는 가스 밸브에 부착한다(도1C).
    참고: 여기에 설명된 렌즈는 0°이지만 이 목적을 위해 30° 렌즈를 사용할 수도 있습니다.
  2. 작업 채널이 열린 위치에 있는지 확인하고 작업 채널을 통해 3 Fr 생검 집게를 삽입하고 칼집의 끝까지 진행 (칼집에서 튀어 나오지 않도록하는 동안)(도 1C). 조립된 내시경을 제조업체의 지침에 따라 광원 및 비디오 이미징 장치에 부착합니다.
  3. 유도 챔버에서 산소로 5 %의 이소플루란으로 마우스를 마취시화하십시....

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결과

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생검을 수행하는 데 필요한 작은 항목 (렌즈, 칼집, 생검 집게)은 이러한 구성 요소의 적절한 조립 지표와 함께 도 1에 표시됩니다. 도 2는 상처 침대의 크기와 상처의 폐쇄 속도를 정확하게 정량화하기 위해 상처 침대의 허용 가능한 뷰의 대표적인 이미지를 보여줍니다. 상처 침대의 전 생체 보기의 예는 상처 침대의 둘레의 지표를 포함하는 도 3A (분자 분석을 위해 소비하는 영역을 나타내는) 및 단면시 상처 침대의 시각화를 가능하게하기 위해 조직을 절단하는 위치를 포함하는 도 3A에 도시된다. 도 3B는 상처 침대를 명확하게 관찰할 수 있는 H&E 염색 섹션의 대표적인 이미지를 나타낸다. 보충 비디오 1마우스결장 내부에서 생검 시술을 볼 수 있습니다.

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토론

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이 모델에서 상처 폐쇄 속도를 효과적으로 평가하려고 할 때 일관되고 정확한 생검과 상처 크기의 측정을 보장하는 것이 가장 중요합니다. 따라서 절차가 올바르게 수행되고 있음을 확신하기 위해 몇 가지 조치를 취해야 합니다. 첫째, 생검의 깊이가 너무 얕거나 깊어서는 안됩니다. 너무 얕으면 상처 닫기를 평가하기에 충분한 창이 없습니다. 그림 2는 0일째에 최적의 생검 깊이와 크기를 보여줍니다. 상처 침대 주위점막과 상처 침대 아래에 남아있는 조직 사이의 명확한 구별을 주의하십시오(그림 2). 생검이 너무 깊으면 천공이 발생하여 귀중한 마우스가 생길 수 있습니다. 0일째생검 후 부속이 발생하면 마우스의 복부가 심하게 변태되면 천공이 발생하고 마우스를 평가에 사용할 수 없으며 안락사되어야 합니다. 동일한 개인이 일관성을 더 보장하기 위해 주어진 연구에 대한 생검을 수행하는 경우 도움이됩니다. 둘째, 더 근위 부위가 아닌 직장에서 생.......

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공개 사항

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저자는 공개 할 것이 없습니다.

감사의 글

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이 작품은 크론과 대장염 재단(D.C.M)과 뉴욕 크론재단(D.C.M 및 A.J.D.의 보조금으로 지원되었습니다. 저자는 이 기사에 비디오 반주를 만드는 데 도움을 준 카르멘 페라라 양에게 감사드립니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
생검 겸자, 3 FrKarl Storz61071ZJ
Coloview 타워 시스템Karl Storz연락처 회사
검사 칼집, 9 Fr, 키트Karl Storz61029DK
홉킨스 망원경, 0', 1.9 mm x 10 cmKarl Storz64301AA
이소플루오란Covetrus2905
메틸렌 블루Sigma-AldrichM9140
마이크로 아이리스 가위Integra18-1619
NIH ImageJNIHN/A 소프트웨어는 다음에서 무료로 다운로드할 수 있습니다:
https://imagej.nih.gov/ij/ Pawfly MA-60 수족관 펌프아마존N/A
스칼팔 #10 블레이드Hill-Rom372610

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Boal Carvalho, P., Cotter, J. Mucosal Healing in Ulcerative Colitis: A Comprehensive Review. Drugs. 77 (2), 159-173 (2017).
  2. Chen, M. L., Sundrud, M. S. Cytokine Networks and T-Cell Subsets in Inflammatory Bowel Diseases. Inflammatory Bowel Diseases. 22

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재인쇄 및 허가

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