우리는 에스트로겐 활성에 대한 인간 및 비 인간 영장류 식품을 선별하기위한 기자 분석 β 시판 가능한 에스트로겐 수용체를 최적화했습니다. 우리는 알려진 에스트로겐 성 인간 음식 콩 높은 등록 을 보여 줌으로써이 분석 확인, 다른 식품은 활동을 표시 하지 않는 동안.
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이 논문에서
요약
초록
식물은 많은 동물을위한 음식의 원천이며 수천 개의 화학 물질을 생산할 수 있습니다. 이러한 화합물 중 일부는 내 분 비 기능 등 그들을 소비 하는 척추 동물에 생리 적 과정에 영향을. 가장 잘 연구된 내분비 활성 식물화학 물질인 식물성 물질은 척추동물 내분비 시스템의 시상라모-뇌하수체 골나달 축과 직접 상호 작용합니다. 여기서 우리는 에스트로겐성 생물학적 활성을 갖는 화합물의 존재를 위해 식물 추출물을 선별하기 위해 세포 기반 분석의 새로운 사용을 제시합니다. 이 분석체는 고도의 발현 에스트로겐 수용체 베타 (ERβ)로 설계된 포유류 세포를 사용하고 루시파아제 유전자로 감염되었습니다. 에스트로겐 활성 화합물에 노출 빛을 생산 하는 세포 결과. 이 분석은 생물학적 에스트로겐 성 활동을 테스트하는 신뢰할 수 있고 간단한 방법입니다. 그것은 일시적인 과도 분석, 특히, 사용의 용이성, 세포의 안정성 및 분석의 감도에 대한 몇 가지 개선이 있습니다.
서론
식물은 생존, 번식, 성장, 발달 및 행동1에중요한 칼로리와 영양소를 제공하는 많은 동물에게 필요한 식량 공급원입니다. 식물은 수천 개의 화학 물질을 생산하며, 많은 화학 물질은 자체 성장, 금식 유지 보수 및 재생을 위한 적응으로 많은 것을 생산합니다. 다른 화합물, 간주 식물 이차 대사 산물 (PSM), 덜 명확한 기능을 가지고, 일부는 독성과 가능성이 약초 및 기생에 대한 방어로 사용하지만 (예를 들어, 알칼로이드, 탄닌)2,3. 이러한 화학 물질 중 일부는 내분비 기능과 같은 동물의 장기 생리 적 과정에 영향을 미칠 수있는 능력을 가지고 있지만, 이러한 내분비 활성 식물화학 물질이 척추 동물 내분비 시스템과 상호 작용하는 이유는 여전히 불분명2,4.
가장 잘 연구된 내분비 활성 식물화학 물질인 식물성 내스트로겐은 구조적으로 나기능적으로 에스트로겐을 모방하여 척추동물 내분비 시스템5의hypothalomo-뇌하수체 고나달 축과 직접 상호 작용하는 ....
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프로토콜
1. 식물 재료의 준비
- 리오필라이저를 사용하여 신선한 수거된 건조 식물 아이템을 동결하십시오.
- 빛으로부터 샘플을 보호하기 위해 건조 공정 중에 알루미늄 호일로 챔버를 덮습니다.
- 샘플이 완전히 건조하도록 하기 위해 챔버가 더 이상 차갑게 느껴지지 않고 계량시 더 이상 질량을 잃지 않도록 합니다.
- 분쇄 될 때까지 빛이없는 멸균 낮은 잔류 물 봉투에 말린 식물을 저장합니다.
- 0.85mm 메쉬 스크린을 갖춘 분쇄 공장을 사용하여 샘플을 미세하게 연마합니다.
- 추출 될 때까지 빛이없는 가방에 접지 샘플을 저장합니다.
2. 식물 이차 대사 산물 추출
- 이차 식물 대사 산물을 추출하려면 HPLC 급 메탄올의 10 mL에 건조 된 샘플 1 g의 비율을 사용합니다.
- 분석 균형에 샘플을 무게와 적절한 크기의 Erlenmeyer 플라스크 (125 – 250 mL)에 추가합니다. 그런 다음 메탄올의 적절한 볼륨을 추가합니다. 추출된 샘플의 질량을 기록합니다.
- 알루미늄 호일로 식물 메탄올 용액을 덮은 다음 궤도 셰이커에서 3일 동안 실온(RT)에서 100rpm....
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결과
인간의 식단에서 흔히 발견되는 과일과 채소의 22추출물은 에스트로겐 화합물의 존재를 위해 선별되었습니다. 완두콩 가족은 식물성 식물성 식품16의알려진 공급원뿐만 아니라 무화과, 날짜, 옥수수, 당근, 사과, 바나나, 딸기, 토마토, 케일 및 양배추와 같은 콩류를 포함한 다양한 식품을 분석했습니다. 내분비 방해 화합물은 일반적인 물질 (예를 들어, 플라스틱 및 살충제)에서 발견되며 일부는 ERs17을통해 생물학적으로 활성화됩니다. 가능하면 유기 및 비무기 재배 품목 모두 에스트로겐 활성을 가진 살충제가 결과에 영향을 줄 수 있는 가능성을 설명하기 위해 분석되었습니다.
각 식물 식품 품목은 삼중으로 도금되었고 광미계는 상대 조명 단위 (RLUS)에서 각 우물의 활동을보고했습니다. RLUs의 배경 수준은 표준 8, 제로 농도와 표준 곡선에서 결정되며 참조에 사용됩니다. 곡선의 0점에 대한 RLU 위.......
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토론
개별적으로 검사하는 의약품 제제에 개발된 ERβ 리포터 분석체는 ERβ를 통해 생물학적으로 활성된 식물성 에스트로겐을 위한 식물성 식품을 선별하는 데도 적합하다. 프로토콜에서 중요한 고려 사항은 식물 샘플을 신중하게 치료하는 것을 포함합니다 : 신선한 식물 재료는 성형 또는 기타 생물학적 저하를 방지하기 위해 신속하게 건조되어야하며 화합물(18)의광분해를 방지하기 위해 빛으로부터 멀리 보관해야합니다. 제조업체에서 제공하는 분석프로토콜(12)은 명확하며 스크리닝 을 위해 거의 수정이 필요합니다. 제조업체가 제안한 표준 곡선은 상부 및 하단 고원을 유지하면서곡선(그림 1)의지수 범위에 속하는 점수를 증가시키기 위해 이 프로토콜에서 수정되었습니다. 정량 분석을 위해이 분석을 사용할 수 있지만, 우리의 목적은 식물을 생물학적 효과, 음식 선택 및 동물을 소비하는 동물의 다른 행동에 높은 활성을 연결.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
저자는 영장류 식물 성 식품의 에스트로겐 활동을 결정하기 위해 일시적인 과실 작용 작용의 사용에 초기 교육에 대한 데일 라이트먼에 감사드립니다. 브래드포드 웨스트리치와 C. 에릭 존슨 덕분에 실험실 장비를 설치하고 학생들을 추출 방법으로 교육하는 데 도움을 주었습니다. 마지막으로, 이 연구에 자금을 지원해 주신 인디애나 대학교에 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 1000 &마이크로; L 피펫 | |||
| 20 µ L 피펫 | |||
| 200 µ L 피펫 | |||
| 37 ° 수조 | |||
| 37 °, 가습 5% CO2 인큐베이터 | |||
| 70% 에탄올 | |||
| 분석 저울 | |||
| 세포 배양 등급 층류 후드 | |||
| 디메틸 설폭사이드 | |||
| 일회용 매체 분지, 멸균 | |||
| 물방울 여과 시스템 | |||
| 삼각 플라스크 | 125 mL 및 250 mL | ||
| HPLC 등급 메탄올 | |||
| 인간 ER β Reporter Assay System, 1 x 96-well format assay | Indigo Biosciences | IB00411 | Assay kit - 24개의 시료와 표준 |
| 곡선 동결 건조기 | |||
| 다중 채널 피펫 | |||
| 오비탈 쉐이커 | |||
| 플레이트 판독 광도계 | 분석 ex. Bioteck Synergy HTX | ||
| rotory evaporator | |||
| 둥근 바닥 플라스크 | 50 mL 및 300 mL | ||
| 멸균 마이크로 원심분리기 튜브 또는 멸균 다중 채널 매체 세면대, | |||
| 멸균 팁 | 200 µ L 및 1000 & 마이크로; L | ||
| Whatman 등급 1 종이 | |||
| 소용돌이 팩 가방 | 멸균 폴리에틸렌 가방 |
참고문헌
- Wasserman, M. D., et al. Estrogenic plant consumption predicts red colobus monkey (Procolobus rufomitratus) hormonal state and behavior. Hormones and Behavior. 62 (5), 553-562 (2012).
- Wasserman, M. D., Milton, K., Chapman, C. A.
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