성인 인간 뇌 조직에서 인간 마이크로글리아 획득

요약

이 프로토콜은 살아있는, 성인, 인간의 뇌 조직에서 기본 microglia를 격리하는 효율적이고 비용 효율적이며 강력한 방법입니다. 고립 된 1 차적인 인간 microglia는 항상성 및 질병에 있는 세포 프로세스를 공부하기 위한 공구역할을 할 수 있습니다.

초록

Microglia는 중추 신경계 (CNS)의 거주자 타고난 면역 세포입니다. Microglia는 개발 중, 항상성을 유지 하며 감염 또는 부상 중에 중요한 역할을 합니다. 몇몇 독립적인 연구 단은 microglia가 자기 면역 질병, 자가 염증성 증후군 및 암에서 재생하는 중앙 역할을 강조했습니다. 몇몇 신경학상 질병에 있는 microglia의 활성화는 병원성 프로세스에 직접 참여할 수 있습니다. 1 차적인 microglia는 두뇌에 있는 면역 반응을 이해하는 강력한 공구입니다, 세포 세포 상호 작용 및 질병에 있는 dysregulated microglia 표현형. 1 차적인 microglia는 불멸한 microglial 세포주 보다는 더 나은 생체 내 microglial 속성에서 모방합니다. 인간 성인 microglia 인간의 태아와 설치류 microglia에 비해 뚜렷한 속성을 전시. 이 프로토콜은 성인 인간의 뇌에서 기본 마이크로 글리아의 격리를위한 효율적인 방법을 제공합니다. 이러한 microglia를 연구 하는 microglia와 CNS에 있는 다른 상주 세포 인구 사이 세포 세포 상호 작용에 중요 한 통찰력을 제공할 수 있습니다., oligodendrocytes, 뉴런 및 성상 세포. 또한, 다른 인간의 두뇌에서 microglia 개인화 된 약및 치료 응용 프로그램의 무수한에 대 한 독특한 면역 반응의 특성화를 위해 배양 될 수 있습니다.

서론

중추 신경계(CNS)는 뉴런 과 신경교 세포^1의복잡한 네트워크로 구성된다. 신경교 세포 중, 마이크로글리아는 CNS^2,,3의타고난 면역 세포로서 기능한다. Microglia는 건강한 CNS^4에서항상성을 유지하는 데 책임이 있습니다. Microglia는 또한 시냅스^2를가지치기하여 신경 발달에 중요한 역할을합니다. Microglia는 여러 신경 질환의 병리생리학의 중심이지만 제한되지 는 않습니다. 알츠하이머병^5,파킨슨병^6,뇌졸중^7,다발성 경화증^8,외상성 뇌손상^9,신경병성 통증^10,척수 손상^11, 진모(12) 등의 뇌종양이 있다.¹²

CNS 항상성 및 질병과 관련된 연구는 비용 효....

프로토콜

모든 조직은 인도 공과 대학 조드푸르와 모든 인도 의학 연구소 (AIIMS) Jodhpur의 연구소 윤리위원회에서 윤리적 허가 후 인수되었다.

1.조직 취득 및 처리(0일차)

1. 얼음차가운 인공 뇌척수액(aCSF) 10mL(aCSF) (2mM CaCl_2∙2H2O,10mM포도당, 3mM KCl, 26m MM NaHCO_3,2.5mM NaHCO 3, 2.5mM NaHCO 3, 2.5mM MM MgCl₂+6H_42,202m)를 함유한^50mL튜브에서 조직을 수집하십시오.₂ 조직을 다른 위치로 옮겨야 하는 경우 튜브를 얼음 위에 보관해야 합니다.
   참고: 자동화된 증류수에서 aCSF를 준비합니다. 라미나르 후드에 0.22 μm 주사기 필터로 필터링합니다. 이것은 4 °C에서 1 개월 동안 저장할 수 있습니다.
2. 수집 튜브를 70% 알코올로 조심스럽게 닦고 무균 라미나르 공기 흐름 챔버로 옮겨보세요.
3. aCSF를 신중하게 폐기하고 무균 상태에서 조직을 계량하십시오. 조직 무게는 후속 단계에 필요한 트립신-EDTA의 부피를 계산하는....

결과

위에서 언급한 프로토콜(도1)을사용하여, 우리는 1차 인간 마이크로글리아를 외과적으로 절제된 뇌 조직으로부터 분리할 수 있었다. 배양된 세포는 미세글리아(green)에 대한 리시누스 공동체 agglutin-1(RCA-1) 렉틴과 성상세포(red)(도 2)를 위해 염색하였다(도2)이전에 설명된 바와 같이^{22,,23,,24,,25,,26.} 4′,6-디아미드노-2-페닐린돌(DAPI)은 핵(blue)을 염색하는 데 사용되었다. 실험 시작후 6일째에 세포는 추가 실험을 .......

토론

Microglia는 정상적인 뇌의 항상성을 보장하고 다양한 신경 질환4의 병리⁴생리학에서 중심적인 역할을한다. Microglia는 신경 발달과 시냅스^2의형성의 중심입니다. Microglial 연구는 다양한 신경^질환4의발달과 진행을 이해하는 데 중추적 인 것으로 입증되었습니다. 설치류 microglia는 1 차적인 microglial 연구 결과를 위한 선택의 널리 퍼진 모형입니다, 비록, 설치류 microglia는 주요 양상에 있는 1 차적인 인간 microglia와 다릅니다^13. 비용 효율적인, 높은 항복, 기본 인간 microglia의 격리를 위한 프로토콜의 개발이 격차를 해소하는 데 도움이 될 수 있습니다. 우리는 살아있는에서 1 차적인 인간 microglia의 격리를 위한 프로토콜을 개발했습니다, 외과적으로 절제된, 성인, 인간 적인 두뇌 조직. 우리는 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
항생제-항진균 용액	Himedia	A002
염화칼슘	시그마	223506
원심분리기 (4 ° C)	시그마	146532
원심분리기 튜브	Abdos	P10203
CO2 인큐베이터	New Brunswik	Galaxy 170 S
D-Glucose	Himedia	GRM077
DMEM medium with glutamine	Himedia	AL007S
Fetal bovine serum	Himedia	RM9955
Flacon 튜브 (50 ml)	Thermo Fsiher Scientific	50CD1058
Fluorescein Ricinus communis agglutinin-1	Vector	FL-1081
형광 현미경	Leica	DM2000LED
Fluoroshield with DAPI	Sigma	F6057
GFAP 항체	GA5	3670S
인큐베이터 쉐이커	New Brunswik Scientific	Innova 42
L929 세포주	ATCC	NCTC 클론 929 [L 세포, L-929, 균주 L의 유도체] (ATCC  CCL-1)
층	Thermo Fsiher Scientific	1386
염화마그네슘	Himedia	MB040
인산일나트륨	Merck	567545
영양 혼합물 F-12 햄 매체	Himedia	Al106S
페트리 접시	Duran Group	237554805
인산염 완충 식염수	Himedia	ML023
염화	칼륨Himedia	MB043
혈청 피펫	Labware	LW-SP1010
중탄산 나트륨	Himedia	MB045
설탕	Himedia	MB025
주사기 필터 (0.2μ;, 직경 25mm)		적합한 Axiva
T-25 조직 배양 플라스크.	Himedia	TCG4-20X10NO
트립신-EDTA (0.25%)	Gibco	제25200-056

류 부착 세포 배양에 SFPV25R 호