우리는 살아있는 유기체의 합병증 없이 모계 염증에 태아 노출을 시뮬레이션하기 위하여 chorioamnionitis의 모형을 개발했습니다 자손의 창자 발달에 FEMI의 효력을 검토합니다. 이것은 chorioamnionitis 다음 장 상해의 발달을 위한 기계론적인 원인의 연구를 허용합니다.
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방법 논문
신생아 장 발달에 급성 chorioamnionitis의 효력을 연구하기 위하여 모성 염증에 태아 노출의 Murine 모형
이 논문에서
요약
초록
Chorioamnionitis는 조산의 일반적인 침전물이고 괴사 장염 (NEC)을 포함하여 미숙아의 이환의 많은 것과 연관됩니다. 그러나, 이 두 조건 사이 기계적인 링크는 아직 발견되지 않았습니다. 우리는 모성 염증 (FEMI)에 리포 폴리삭차라이드 (LPS)유도 태아 노출을 포함하는 chorioamnionitis의 뮤린 모델을 채택했습니다. FEMI의 이 모형은 또한 임상 chorioamnionitis의 많은 경우에 존재하는 멸균 모계, 태반 및 태아 선동적인 폭포를 유도합니다. 살아있는 박테리아를 이용하고 더 정확하게 chorioamnionitis의 결과로 상승 감염의 병리 생리학을 모방하는 모형이 존재하더라도, 이 방법은 미숙한 창자 및 관련 개발 microbiome의 발달에 간접적인 효력을 일으키는 원인이 될 수 있습니다. 이 프로토콜을 사용하여, 우리는 LPS 유도 FEMI가 임신 손실및 조산에 있는 복용량 의존적인 증가, 뿐만 아니라 자손에 있는 일반적인 장 발달의 중단에 초래한다는 것을 보여주었습니다. 또한, 우리는 FEMI가 자손에 있는 장 상해 및 혈청 사이토카인을 현저하게 증가시키는 것을 보여주었습니다, 동시에 진보와 Paneth 세포를 감소시키면서, 둘 다 장 염증에 대하여 선천적인 면역의 첫번째 줄을 제공하는. LPS 유도 FEMI의 유사한 모형은 chorioamnionitis와 중추 신경계의 후속 이상 사이 협회를 모델링하기 위하여 이용되었지만, 우리의 지식에, 이 프로토콜은 chorioamnionitis와 NEC 사이 잠재적인 링크로 chorioamnionitis 및 NEC 사이 기계적인 링크를 해명하기 위하여 시도하는 첫번째입니다.
서론
융경막은 포유류 임신에 필수적인 역할을 합니다. 그들은 여러 기능을 제공하는 초리온과 양상을 포함한다. 그들은 태아를 둘러싸고 보호하고, 모계와 태아 구획1사이의 파라크리니 신호를 용이하게하고, 파리오닉 멤브레인 내에서 로컬 피드백 루프를 생성하여 parturition1을시동하는 데 관여할 수 있다. 멤브레인의 현재 이해는 양막이 구조적 장벽 기능을 제공한다는 것을 나타내며, 초리온은 주로 모계 면역 계통2로부터발전하는 태아를 보호하기 위해 면역학적 완충제를 제공한다. 이 막의 염증은 chorioamnionitis로 알려져 있습니다. 역사적으로, 임상 초리오암니온염의 진단은 모계 열플러스 하나 이상의 태아 또는 모계 임상발견의존재에 따라 만들어졌으며3,4. 그러나, 이 정의는 임상적으로 유용하지만, 정밀도의 부족은 chorioamnionitis 연구를 도전하게 했습니다. 2015년, 진단을 명확히 하기 위해 유니스 케네디 슈리버 국립아동보건연구원의 전문가 패널 워크숍은 충야염염을 자궁내 염증 또는 감염 또는 둘 다(트리플 I)3로....
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프로토콜
모든 동물 절차는 아이오와 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (프로토콜 #8041401)에 의해 승인되었다. 모든 동물은 아이오와 대학에서 승인 된 실험실 동물 관리 (AALAC)의 평가 및 인증 협회에 보관되었습니다. 모든 마우스는 야생 형 균주 C57Bl/6J였다.
1. 임신 한 쥐에 FEMI의 설립
- LPS 준비
- 에샤리치아 대장균 O55:B5(재고 농도 2 mg/mL)에서 파생된 LPS를 사용하십시오.
- 20 μg/mL의 작동 농도에 대한 멸균 식염수로 LPS 재고 농도 1:100을 희석합니다.
- 모계 LPS 주입
- 임신 일 e15에 임신 한 댐을 주입하십시오. 이 시점은 뮤린 임신을 통해 약 75%이며, 이 모델은 초리암니온염으로 인한 조산의 대부분이 발생하는 인간 임신의 초기 세 번째 삼보격과 발달적으로 유사합니다.
- 적절한 LPS 주입을 결정하기 위해 주사 직전에 임신 한 마우스를 무게.
- 다음 공식을 사용하여 작업 농도의 용량을 계산합니다: 5 μL x 그램 체중(gbw), 100 μg/kg의 LPS의 총 용량. 제어 동물의 경우, 주사에 대한 일반 식염수의 동등한 볼륨을 사용합....
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결과
배아 일째에 FEMI에 노출15 임신의 용량 의존손실과 조산 노동의 투여 의존율로 이어집니다(그림 1)42. 실험을 위해, 우리는 중요한 선동적인 모욕에 태아를 드러내면서 임신 손실 및 미숙아 (미숙아와 자궁 내 태아 죽음 둘 다 사이 50% 손실)를 극소화하기 위하여 100 μg/kg의 LPS 복용량을 사용하기로 결정했습니다.
이 방법을 사용하여, 우리는 다음 자손의 후속 상해에 FEMI의 효력을 검토했습니다. 일반화 된 장 상해를 측정하기 위해 3 점 조직학적 척도를 사용하여 출생 시 (P0) 및 성인기 (P56 또는 8 주)(그림 2)에서상당한 부상을 발견했습니다. 이 부상은 FEMI 이외의 동물에 대한 추가 자극이없는 경우 발생한다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 마우스는 생활의 첫번째 4 주 동안 계속 하는 상대적으로 미.......
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토론
Chorioamnionitis 영향 2\u20124% 기간의 및 25\u201230% preterm 납품의8,9. 그러나, 초리오암니온염의 영향은 태아와신생아10,11,12,13,14,15,16에중요한 영향을 미치는 것으로 나타났기 때문에 오래 전해질 수 있다. 중요한 것은, chorioamnionitis는 NEC15,1.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작품은 건강의 국립 연구소 (DK097335 및 T32AI007260)와 아이오와 스테드 소아과의 대학을 통해 부분적으로 지원되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 10% 중성 완충 포르말린 | 시그마 | HT501128 | |
| 알시안 블루 염색 | 신규 공급 | 1003A | |
| C57Bl6/J 마우스 | Jackson Laboratories | 664 | |
| 에탄올 | Decon 연구소 | 2701 | |
| HCl | Sigma | H1758 | |
| Hematoxylin 염색 | Leica | 381562 | |
| LPS | Sigma | L2880 | |
| NaHCO3 | Sigma | S6014 | |
| Nikon Eclipse Ni-U 현미경 | Nikon | 2CE-MQVJ-1 | |
| 주기적 산 | ACROS | H5106 | CAS# 10450-59-9 |
| RNAlater | Thermofisher | Am7021 | |
| Schiff의 시약 | Sigma | S5133 | |
| Secor 이미저 2400 | 메소 스케일 디스커버리(MSD) | ||
| V-Plex 어세이 | 메소 스케일 디스커버리(MSD) | ||
| 크실렌 | 시그마 | 534056 |
참고문헌
- Myatt, L., Sun, K. Role of fetal membranes in signaling of fetal maturation and parturition. International Journal of Developmental Biology. 54 (2-3), 545-553 (2010).
- Verbruggen, S. W., Oyen, M. L., Phillips, A. T., Nowlan, N. C.
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재인쇄 및 허가
