보완 응고 특성화를 위한 탁도 및 혈전 성형술 활용

요약

피브린은 혈전증과 혈전증 중 응고 형성에 책임이 있습니다. 탁도 검사 및 혈전(TEG)은 응고의 보완적인 평가를 제공하는 시너지 도구로 활용할 수 있다. 이 두 가지 기술은 응고 조건이 피브린 응고 형성에 미치는 영향에 대한 더 많은 통찰력을 줄 수 있습니다.

초록

혈전증은 전 세계적으로 주요 사망 원인입니다. 피브린(ogen)은 혈전 형성 또는 혈전증을 주로 담당하는 단백질입니다. 따라서, 피브린 응고 형성을 특성화하는 것은 혈전증의 연구에 유익하다. 탁도 및 혈전 세포법(TEG)은 모두 혈전 형성을 모니터링하기 위한 시험관 내 실험에서 널리 활용된다. 탁도는 분광계를 통해 피브린 응고 구조를 통해 광 투과를 동적으로 측정하며 종종 연구 실험실에서 사용됩니다. TEG는 혈전 강도를 직접 측정하고 주로 환자의 hemostasis를 평가하기 위해 임상 설정에서 활용되는 전문 점탄성 기술입니다. 이 두 가지 도구의 도움으로, 이 연구는 단순화 된 피브리노겐 / 트롬빈 응고 모델을 사용하여 체외 피브린 응고를 특성화하는 방법을 설명합니다. 두 기술의 데이터 추세는 다양한 응고 조건에서 비교되었습니다. 인간과 소 피브린 혈전은 소 응고 요인이 종종 임상 및 연구 설정에 있는 인간 응고 요인에 대용품으로 이용되기 때문에 이 연구에서 나란히 형성되었습니다. 결과는 TEG와 탁도트랙 응고형성이 두 가지 방법을 통해, 함께 활용될 때 다양한 응고 조건에 걸쳐 보완적인 응고 강도와 섬유 구조 정보를 제공한다는 것을 보여줍니다.

서론

혈전증은 전 세계적으로 높은 이환율과 사망률로 이어지는 혈액 순환을 차단하는 신체의 혈전의 병리학적 형성입니다. 정맥 혈전 색전증의 1-2 케이스 및 1000명 당 혈전증 유도 혈관 질환의 2 ~3 의 경우 매년^1,,2가있습니다. 여기에 제시된 혈전 성형술(TEG) 및 탁도를 활용하여 다양한 응고 조건하에서 응고 형성을 모니터링하는 방법이 있다. 피브린 (ogen)은 신체의 혈전 형성을 담당하는 1 차 단백질입니다. 응고 폭포의 마지막 단계에서, 혈전이 진행됨에 따라 불용성 피브린 단량제의 중합화를 시화하는 혈전에 의해 피브리노펩티드는 피브리노겐으로부터 갈라지며^3,,4. 병리학 적 혈전증의 혈전 형성을 이해하려면 다양한 응고 상황에서 피브린 형성을 특성화해야합니다. 여러 응고 모니터링 실험체는 시험관내에서 피브린 응고 형성을 연구하기 위해 활용되었습니다. 프로트롬빈 시간 (PT/INR) 및 활성화 된 부분 혈소 세포 세포 세포 (aPTT)는 특정 응고 경로의 무결성을 측정하는 두 가지 일반적인 임상 적 소이다. 그러나 시간을 물리적 응고 속성^5의

프로토콜

1. 인산염 완충식염식염수(PBS) 제제

참고: PBS는 칼슘의 첨가를 요구하지 않았던 기술된 분석으로 이 연구 전반에 걸쳐 사용되었습니다. 칼슘을 첨가할 때, 종종 석회화 성혈액 제품을 재석량에 사용하는 경우, 칼슘이 인산염 완충액에 침전되는 것으로 알려져 있기 때문에 PBS를 피해야 합니다.

1. 0.01M, pH 7.4 PBS 완충제를 137m 염화나트륨, 1.8mm 칼륨 인산염 모노베이직, 10mMM 나트륨 인산염 디베이직, 2.7mM의 염화칼륨을 DI 워터에 혼합하여 만듭니다.
2. pH 프로브를 사용하여 완충pH를 확인하고 필요에 따라 수산화 나트륨 또는 염산나트륨을 사용하여 pH를 조정합니다.
3. 피브리노겐 및 응고 용 색채 의 준비를 위해이 PBS를 사용합니다 (달리 명시되지 않는 한).
   참고: 완충은 DI 수에서 수화하면 37°C에서도 피브리노겐 강수량을 초래할 수 있기 때문에 피브리노겐 분말을 재구성하는 것이 좋습니다.

2. 단백질의 준비 및 저장

참고: 프로토콜 전반에 걸쳐 단백질 재고 농도는 최종 응고 용액에서 염, DI 물, PBS 및 기타 잔류 인자의 일관된 비율을 허....

결과

도 1에 나타난 실험은 서로 다른 피브리노겐 수준에서 인간과 소 피브린 혈전의 대표적인 탁도 추적 곡선이다. 상이한 피브리노겐 수준에서 피브린 응고 형성을 위한 대표적인 TEG 추적 곡선이 도 2에도시된다. 두 추적 곡선 모두 응고 개시 후 지연 기간 이후에 응고 편도 또는 응고 진폭이 혈전 형성의 끝에 시간과 레벨이 증가한다는 것을 보여줍니다. 최대 응고 형성의 끝점 값과 각 분석에서 최대 응고 형성에 시간이 사용되어 완전히 형성된 응고및 전체 응고 공정의 특징을 평가합니다. 최대 탁도(Turb^Max)및 최대 탁도(Turb^{Time)까지의}시간은 탁도로부터 파생된 두 개의 파라미터이며 최대 진폭(TEG^Max)및 최대 진폭(TEG^{Time)까지의}시간은 TEG로부터 파생된다.

또한 Turb^Max.......

토론

이 프로토콜은 시판되는 부품을 사용하여 간소화된 피브리노겐/트롬빈 응고 모델을 테스트하는 두 개의 서로 다른 응고 특성화 도구의 활용을 보여줍니다. TEG와 탁도 세약 모두 수행하기 쉽습니다. 최대 응고 형성(Turb^Max 및 TEG^Max)및 응고 형성 시간(Turb^Time 및 TEG^Time)과같은 엔드 포인트 응고 검사를 제공할 뿐만 아니라 동적 응고 형성 공정을 평가합니다. 이로 인해 TEG 및 탁도 는 복잡한 실험 절차를 갖거나 단일 응고 측면 테스트에만 집중할 수 있는 SEM, PT, aPTT 또는 응고 유경학과 같은 대체 방법에 추가하기 위해 응고 특성화를 위한 유용한 도구입니다. 탁도 및 TEG 결과는 응고 가변이 응고 특성에 미치는 영향에 대한 보다 완벽한 프로파일을 제공합니다.

이 프로토콜에 자세히 설명된 응고 변수 외에도 이러한 기술을 활용하는 다른 많은 변수가 있습니다. 이 프로토콜은.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
96-웰 클리어 플랫 바텀 UV-투명 마이크로플레이트	Corning	3635	비처리 아크릴 공중합체,
인간 혈청	Millipore Sigma	A1653	; 96%, 동결건조 분말
Arium Mini Plus 초순수 시스템	Sartorius	NA	DI 수원
소 혈청 알부민	Millipore Sigma	A2153	≥ 96%,
TEG 5000 (Clear)	Haemonetics	REF 6211
Fibrinogen, Bovine Plasma	Millipore Sigma	341573	95% 이상의 응고 가능한 단백질
Fibrinogen, Plasmingogen-Depleted, Human Plasma	Millipore Sigma	341578	95% 이상의 응고 가능한 단백질을 포함합니다.
인산염 완충 식염수	Millipore Sigma	P3813	분말, pH 7.4, 1 L 용액 제조용
염화	Millipore Sigma	60130	≥ 99.5% 순도
인산칼륨 단일염기성	Millipore Sigma	P9791	≥ 98% 순도
SevenEasy pH 미터	Mettler Toledo	S20
염화나트륨	Millipore Sigma	71378	≥ 99.5% 순도
소듐 인산염 이염기성	Millipore 시그마	71636	≥ 99.5% 순도
SpectraMax M5 다중 검출 마이크로플레이트 리더 시스템	분자 장치	M5
TEG 5000 혈전탄성 그래프 지혈 분석기 시스템	Haemonetics	07-022
Thrombin, Bovine	Millipore Sigma	605157
Thrombin, Human Plasma, High Activity	Millipore Sigma	605195

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