가혹한 급성 췌장염을 위한 동물 모형은 염증성 사건의 진화의 관측을 용이하게 하는 초기 단계에서 병리학적 변화의 연구를 가능하게 합니다. 여기서 우리는 마취 C57BL/6 마우스의 췌장 덕트에 타우로콜린산 나트륨의 역그레이드 주입에 의하여 가혹한 급성 담즙 췌장염의 유도를 위한 프로토콜을 제공합니다.
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방법 논문
C57BL/6 마우스에서 타우로콜레이트 나트륨 유도 심한 급성 췌장염
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
타우로콜린성 주입에 의한 담즙 급성 췌장염 유도는 임상 담즙 췌장염의 발병에 대응하는 염증 성 사건의 인간 임상 상태 및 재생의 표현으로 인해 과학 계에 의해 널리 사용되고 있다. 췌장 손상의 심각도는 주입된 담즙산의 농도, 속도 및 부피를 측정하여 평가될 수 있다. 이 연구는 프로토콜 재생에 사용되는 재료 및 방법의 업데이트 된 체크리스트를 제공하고이 급성 췌장염 (AP) 모델의 주요 결과를 보여줍니다. 이전 출판물의 대부분은 쥐에서이 모델을 재현하는 자신을 제한했다. 우리는 연구 결과와 관련있을 수 있는 추가이 (즉, 마우스의 유전자 변형 된 균주와 함께 작동의 가능성과 함께 이 동물을 위한 시약 및 항체의 무기고의 가용성)를 제공하는 마우스에 이 방법을 적용했습니다. 마우스의 급성 췌장염 유도의 경우, C57BL/6 마우스에서 3분 동안 주입 속도 10 μL/min에서 2.5%의 나트륨 타우로콜레이트의 정의된 투여량을 가진 체계적인 프로토콜을 제시하며, 이는 유도의 12시간 이내에 최대 정도의 심각도에 도달하고 그 결과를 강조하는 방법을 검증하는 결과를 강조한다. 연습과 기술로 마취 유도부터 주입 완료까지 총 예상 시간은 동물 당 25 분입니다.
서론
인간에서, 담석의 존재는 담석의 말단 부분의 방해로 인한 췌장염의 가장 흔한 원인이며, 췌장 분비물의 흐름을 방해하고 췌장에 있는 강렬한 염증 과정을 일으키는 원인이 되며, 혈청 및 염증 성 중재자에서 소화 효소의 농도가 증가한다1,2.
급성 췌장염의 발달을 설명하기 위해 두 가지 다른 이론이 제안되었습니다 (AP). "일반적인 채널" 이론은 담낭에 존재하는 돌이 담즙 분비가 췌장 덕트로 역행하는 것을 허용하는 말단 일반적인 담관 시스템을 방해한다는 것을 건의합니다. 두 번째 이론 ("덕트 방해" 이론)은 과잉 담석에 의한 췌장 덕트의 방해가 십이지장 분비의 흐름에 막힘을 일으켜 덕덕 고혈압을 유발한다는 것을 시사합니다. 급성 담즙 췌장염으로 이끌어 내는 기계장치는 완전히 이해되지 않더라도, 결과는 강렬한 선동적인 프로세스입니다. 소화효소 분화와 췌장자가 소화는 조직병리학적 변화, 염증성 사이토카인(IL-1β, IL-6, TNF-α)의 증가, 급성상 단백질4,5,6
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프로토콜
이 프로토콜은 USP 의과 대학의 동물 사용에 대한 윤리위원회에 의해 승인되었다, Num. 프로젝트: 1343/2019-CEUA: FMUSP. 이 프로토콜을 위해, C57BL/6 마우스는 6주, 20± 2g의 무게가 사용되었다(n = 9/그룹).
1. 라파로토미
- 자일라진(10 mg/kg)과 케타민 용액(80 mg/kg)으로 동물을 마취시키고, 1mL 주사기와 13x0.45mm 바늘 26G 1/2를 사용하여 피하(0.1 mL/10g의 체중)를 피하한다. 발가락을 꼬집어 충분한 마취 깊이를 확인하십시오. 가열 된 패드를 사용하여 체온을 제어 할 수 있습니다. 모든 수술 재료가 멸균되었는지 확인하십시오.
- 5% 포비도요오드 용액으로 복부 부위를 청소하고 트리머를 사용하여 가슴과 하복부(약 2cm2) 사이의 모발을 제거합니다. 70 %의 알코올로 수술 영역을 청소하십시오.
- 수술 용 테이프를 사용하여 수술 판에 동물을 고정. 가위를 사용하여 피부의 5mm를 수평으로 자르고 복부 의 상부에, xiphoid 과정보다 1cm 낮습니다. 회음에 컷을 반복합니다. 이것은 구멍의 최소한의 노출로 복강경을 초래할 것입니다.
2. 췌장 찾....
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결과
췌장염 중증도는 부재에 해당하는 슈미트의 scale21 에 따라 0-3 사이에서 득점되었으며, 1은 경미한 존재(<25%)에 해당하며, 2는 중등도(25~50%)에 해당하며 3은 강렬한 존재감(> 50%)에 해당한다. 수행된 측정은 혈장 아밀라제 활성, 췌장 부종, 아시나르 세포, 부상/괴사, 췌장 염증(H&E 염색 섹션의 히스토로지 분석에 의한) 및 혈청 및 PerC 유체의 IL-6 사이토카인 농도였다. 12h의 심한 AP 후, APTA 그룹은 혈청 아밀라제 농도(6194 ± 336.7 U/dL)의 증가를 보였으며, 이는 샴그룹(3845 ± 135.7 U/dL)에 비해 증가했다. 동시에, APTA 군은 혈청 및 PerC 유체에서 IL-6 사이토카인 농도가 증가하는 것으로 나타났다(도 2).......
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토론
타우로콜레이트 나트륨 주입에 의한 급성 췌장염을 유도하는 방법은 이미 랫트22,23,24에서 나타났다. 2008년, 2010년, 2015년에 출판된 세 개의 유사한 작품은 프로토콜3,14,15에 대한 참조역할을 했습니다. 이 작업에서는 C57BL/6 마우스에서 이 방법을 재현하기 위한 모든 중요한 단계와 유효성을 검사할 수 있는 몇 가지 가능성을 나열합니다.
이 시험에서 중요한 단계는 간으로 나트륨 taurocholate 역류를 피하기 위해 마이크로 혈관 클립 (단계 3.1)으로 힐럼의 수준에서 담관을 차단하는 것입니다. 포털 정맥이 덕
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
저자는 상파울루 대학의 의학 클리닉에서 포스트 졸업 프로그램 덕분에; 코르데나카오 데 아페르페이소아멘토 데 페소알 드 니벨 슈페리어(CAPES) 및 상파울루 의과대학(FMUSP).
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 0.4mm 바늘 | INTRAG MEDICAL TECH | 90183210 30G | |
| 0.54 mm 폴리에틸렌 튜브 | Tygon | 730010 | - |
| 스티로폼 블록 | - | - | |
| Missner | 1236 | - | 를 장착하기 위한 마스킹 테이프 |
| 는 10µ로 예정되어 있습니다; L / 분. | Havard aparatus-연동 펌프 시리즈 | MA1 55-7766 | 모델 66 소형 연동 |
| 가위 및 겸자 | |||
| 방부제 프로비딘 요오드 | 화이자 | 12086OR | 방부제 |
| 70% 에탄올 | SIGMA | 459836 | 700mL 100% 에탄올과 300mL dH2O |
| 면도날 | Lord | bdk9a1ghk6 | 삼분절개술 |
| 타우로콜레이트 나트륨 | 시그마-알드리치 | 86339- 1G | CAS 번호- 345909-26-4 |
| 마이크로 혈관 클립 | Medicon Surgical | 56.87.35 | 분석기, 개방 4.0mm, 폐쇄 압력 30 - 40 g |
| 6-0 prolene | Bioline | 5162 | 봉합 |
| 라인 Ketamin NP (cloridrato de dextrocetamina) 50mg/mL | Cristá | ||
| Xilazine 2% | Syntec | ||
| 멸균 식염수 (0.9% (wt/vol) 식염수) | Farmace | 105851 | |
| Methyl Blue | Sigma-Aldrich Chemicals | M5528 | |
| MILLIPLEX 지도 마우스 사이토카인/케모카인 마그네틱 비드 패널 - 면역학 멀티플렉스 어세이 | MERCK | MCYTOMAG-70K | 마우스 혈청, 혈장 및 세포 배양 샘플에서 Luminex 기술을 사용하는 비드 기반 멀티플렉스 어세이로 여러 사이토카인 및 케모카인 바이오마커를 동시에 분석합니다. |
| 아밀라제 분석 | Labtest | 11 | |
| Desmarres 견인기 13-mm 폭 | ROBOZ | RS-6672 |
참고문헌
- Li, X., et al. Significantly different clinical features between hypertriglyceridemia and biliary acute pancreatitis: A retrospective study of 730 patients from a tertiary center. BMC Gastroenterology. 18 (1), 1-8 (2018).
- Rechreche, H., Abbes, A., Iovanna, J. L.
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재인쇄 및 허가
