바이오 제어 제품의 휘발성 및 비휘발성 항진균 활성 측정

요약

식물 유래 제품의 항진균 효과를 정량화하도록 설계된 수정된 한천 기반 방법을 설명합니다. 항진균 활성에 대한 휘발성 및 비휘발성 기여는 모두 이 프로토콜을 통해 평가될 수 있다. 또한, 곰팡이에 대한 효능은 단일 실험 설정에서 주요 발달 단계에서 측정될 수 있다.

초록

설명된 프로토콜은 미생물 수량 및 발달 단계를 정확하게 판단할 수 있는 플러그 전달 기술을 기반으로 합니다. 지정된 수의 포자가 한천 판에 퍼져 있습니다. 이 한천판은 배양이 필요하지 않은 포자를 제외한 곰팡이가 예상되는 발달 단계에 도달할 수 있도록 정의된 기간 동안 배양됩니다. 포자, 최면 또는 균사체로 덮인 한천 플러그는 다음 철회하고 항진균 화합물을 함유한 천매체로 이송되어 곰팡이로부터 멀리 또는 접촉하여 테스트할 수 있습니다. 이 방법은 액체 추출물과 고체 샘플(분말)을 모두 테스트하는 데 적용됩니다. 특히 포자, 조기 최면 및 균사체에 대한 휘발성 및 비휘발성 제제의 상대적 기여를 정량화하고 그 효과를 결정하는 데 특히 적합합니다.

이 방법은 바이오 제어 제품, 특히 식물 유래 제품의 항진균 활성의 특성화와 매우 관련이 있습니다. 실제로, 식물 처리를 위해, 결과는 응용 프로그램의 모드의 선택을 안내하고 트리거 임계 값을 설정하는 데 사용할 수 있습니다.

서론

과일과 채소의 글로벌 손실은 생산^1의 50 %까지 도달 할 수 있으며 주로 20^세기중반 부터 합성 살균제의 광범위한 고용에도 불구하고, 필드 또는 수확 후 저장^2,3동안 곰팡이 부패로 인한 식품 부패로 인해 발생할 수 있습니다. 이 물질의 사용은 심각한 환경 및 건강 위험을 나타내기 때문에 재검토되고있다. 이들의 유해한 결과가 생태계 전반에 걸쳐 나타나고 잠재적 건강 영향의증거가 축적됨에 따라^5,6,수확 후 치료 전 및 후 예방 전략에 대한 새로운 대안이 개발되고 있다^7,8,9. 따라서 우리가 직면하는 도전은 두 배입니다. 새로운 살균 전략은 첫째, 식물 병원균에 대한 식품 보호의 효능 수준을 유지하고 두 번째로 농업 관행의 환경 발자국을 획기적으로 줄이는 데 기여해야합니다. 이 야심찬 목표를 달성하기 위해 식물에서 진화한 자연 방어에....

프로토콜

1화 이노쿨라 준비

1. 실험 에 앞서 트리코데르마 스프의 5 μL을 놓습니다. SBT10-2018 포자는 감자 덱스트로스 천 배지(PDA)에 4°C에 저장되고 코니아^형성을 촉진하기 위해 정기적인 광 노출로 30°C에서 4일 동안 배양한다(도1,패널 A).
   참고 : 트리코데르마 sPP. SBT10-2018은 나무에서 분리되어 있으며, 빠르게 성장하고 포자 회복의 용이성을 위해 이 연구의 모델로 사용됩니다. 이 균주는 우리의 실험실에 의해 보존됩니다.
2. 코니디아 복구(그림 1,패널 A)
   1. 트리코데르마 균셀륨에 0.05% Tween-20의 3mL를 놓습니다.
   2. 갈퀴를 사용하여 conidiophores에서 코니디아를 방출; 최해가 찢어지는 것을 방지하기 위해 균사체를 누르지 마십시오.
   3. 마이크로피펫으로 용액을 빠르게 회수하여 한천 배지에 흡수되는 것을 피하고 15mL 튜브로 이송합니다.
   4. 혈류계를 사용하여 총 포자 수를 계산하고 3 x 10⁶ 포자 /mL을 포함하는 솔루션을 준비하십시....

결과

항진균 화합물의 다른 유형의 작용 모드를 구별하는 정량적 방법의 능력을 평가하기 위해, 우리는 잘 알려진 3개의 항진균제의 효능을 비교했습니다. Carbendazim은^{식물 39,40에서}곰팡이 질병의 넓은 범위를 제어하기 위해 널리 사용되어 온 비 휘발성 합성 살균제입니다. Thymus vulgaris 에센셜 오일은 주로 항균 및 항진균 활성에 대해 설명되어 있으며 천연 식품 방부제 제^(41)로사용됩니다. 마늘 분말은 식물 유래 바이오 제품의 모델로 선택되었습니다. 그것은 전통적으로 크게 휘발성 유기 황 화합물의 존재뿐만 아니라 비 휘발성 사포닌과 페놀 화합물의 존재에 기인한 항균 활동을 가진 자연 요법으로 사용되었습니다^26,이 모델에 이 연구에서 관련 있는 복잡성을 주는.

이.......

토론

여기에 제시 된 접근 방식은 최소 가공 식물 유래 제품의 항진균 특성의 평가를 허용합니다. 이 프로토콜에서는 2mm 유리 구슬을 사용하여 천 표면에 포자의 균일한 분포가 달성된다. 이 단계는 제대로 구슬을 배포하고 재현 가능한 결과를 얻기 위해 처리 기술을 필요로, 궁극적으로 곰팡이 성장의 다른 단계에서 항진균 효과의 비교를 허용. 우리는 확산 하는 동안 균질화 하는 동안 5 mm 유리 구슬 또는 과도 한 회전 변수 성장 직경을 일으킬 수 있습니다 발견. 따라서 실험 전에 포자 분포를 마스터하는 교육을 권장합니다. 또한 식물 분말을 테스트해야 하는 경우 제품의 균일한 분산을 한천 매체로 분산시켜야 합니다. 분말이 플레이트 의 바닥에 침전되는 것을 방지하기 위해 용융 된 매체의 온도가 45 °C에 도달하면 제품을 한천 매체로 혼합해야합니다 (실온이 24 °C인 경우). 이 온도는 침전을 피하기 위해 지역 실온에 따라 조정되어야 합니다.

여기서 설명하는 방법은 귀중한 통찰력을 제공할.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
오토클레이브-바쿠클라브 24B+	Melag
Carbendazim	시그마	378674-100G
증류수
Eppendorf 튜브	Sarstedt	72.706	1.5 mL
Falcons 튜브	Sarstedt	547254	50 mL
직경 5mm 스테인레스 스틸 튜브	소매점		/
식품 탈수기	Sancusto		6 트레이
마늘 가루	유기농 상점
유리 구슬	CLOUP	65020	2 mm
혈구계 계수 셀	Jeulin		713442/
Incubator	Memmert	UM400	30 > C
나이프 밀	Bosch	TSM6A013B
수동 셀 카운터	Labbox	HCNT-001-001	/
측정 눈금	소매점
미생물 안전 캐비닛	FASTER		FASTER BHA36, TYPE II, Cat 2
Micropipette	Mettler-Toledo		17014407 100 - 1000 µ L
마이크로피펫	Mettler-Toledo	17014411	20 - 200 µ L
마이크로피펫	Mettler-Toledo	17014412	2 - 20 µ L
페트리 접시	Sarstedt	82-1194500	55mm
페트리 접시	Sarstedt	82-1473	90mm
피펫 컨트롤러-EASY 60	Labbox	EASY-P60-001	/
Potato Dextrose Agar	Sigma	70139-500G
정밀 스케일-RADWAG	그로세론	B126698	AS220. R2-ML 220g/0.1mg
Rake	Sarstedt	86-1569001	/
역현미경 AE31E 삼안	Grosseron	M097917	/
멸균 눈금 피펫	Sarstedt	1254001	10 mL
Thymus 에센셜 오일	Drugstore		에센셜 오일 100%
Tips 1000 µ 엘	Sarstedt	70.762010
팁 20 &마이크로; 엘	Sarstedt	70.760012
팁 200 &마이크로; L	Sarstedt	70.760002
이봉	소매점
Trichoderma spp 변형			LRPIA 실험실의 변형
Tween-20	시그마	P1379-250ML
트윈-80	시그마	P1754-1L
핀셋	Labbox	FORS-001-002	/

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