신생아 마우스에서 기본 백색및 갈색 프레드포스세포의 격리 및 분화

Andrea Galmozzi; Bernard P. Kok; Enrique Saez

doi:10.3791/62005

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방법 논문

신생아 마우스에서 기본 백색및 갈색 프레드포스세포의 격리 및 분화

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DOI:

10.3791/62005

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2021년 1월 25일

Andrea Galmozzi¹^,² , Bernard P. Kok¹ , Enrique Saez¹

¹Department of Molecular Medicine, The Scripps Research Institute, La Jolla, CA, USA, ²Department of Medicine, University of Wisconsin-Madison, School of Medicine and Public Health, Madison, WI, USA

이 논문에서

요약

이 보고서는 신생아 마우스에서 1 차적인 갈색 및 백색 프레드포스세포의 동시 적인 격리를 위한 프로토콜을 기술합니다. 분리된 세포는 배양에서 재배되고 완전히 성숙한 백색과 갈색 지방세포로 분화하도록 유도될 수 있다. 이 방법은 배양시 1차 지방세포의 유전적, 분자 및 기능적 특성화를 가능하게 한다.

초록

삼각 세포 분화 및 기능의 근본적인 기계장치의 이해는 불멸의 백색 프레드포스세포 세포의 사용에서 크게 유익했습니다. 그러나 이러한 배양 된 세포주에는 한계가 있습니다. 그들은 지금 백색 지방 창고 안에 존재하는 것으로 알려져 있는 이질 성 지방 세포의 다양한 기능 스펙트럼을 완전히 포착하지 않습니다. 백색 지방 조직의 복잡성을 연구하기 위하여 보다 생리적으로 관련있는 모형을 제공하기 위하여는, 프로토콜은 신생아 마우스에서 1 차적인 백색과 갈색 선조의 동시 격리, 문화의 급속한 확장 및 시험관내의 분화를 성숙하고 완벽하게 기능성 있는 지방세포로 가능하게 하기 위하여 개발되고 최적화되었습니다. 신생아에서 1 차 세포를 분리의 주요 장점은, 오히려 성인 마우스보다, 지방 창고가 적극적으로 개발하고, 따라서, 확산 preadipocytes의 풍부한 소스입니다. 이 프로토콜을 사용하여 분리된 1차 전도체는 합류시 빠르게 분화되고 신생아 마우스에서 개발된 지방 패드의 외관을 정확하게 반영하는 시간적 창인 4-5일 후에 완전히 성숙해진다. 이 전략을 사용하여 준비된 1차 배양은 높은 재현성으로 확장및 연구될 수 있으며, 유전적 및 표현성 스크린에 적합하게 만들고 유전 마우스 모델의 세포 자율 적 인 세포 세포 표현형의 연구를 가능하게합니다. 이 프로토콜은 시험관 내 지방 조직의 복잡성을 연구하기 위해 간단하고 빠르며 저렴한 접근 방식을 제공합니다.

서론

비만은 에너지 섭취와 에너지 지출 사이 만성 불균형에서 유래합니다. 비만이 발전함에 따라, 백색 지방세포는 마이크로 환경, 세포 사멸, 염증 및 인슐린 저항^{성 1에서}저산소증을 초래하는 세포 크기에서 대규모 확장을 겪습니다. 기능 장애, 비대 증분 세포제대로 과잉 지질을 저장할 수 없습니다., 그들은 인슐린 행동을 약화 하는 다른 조직에 대신 축적^2,^3. 조직 간의 정상적인 지질 분할을 개선하고 복원하는 제제는 제2형 당뇨병과 같은 인슐린 저항성을 특징으로 하는 비만 관련 조건의 치료에 도움이 될 것으로 예상된다. 3T3-L1, F442A 및 10T 1/2와 같은 불멸의 세포주를 이용한 포피세포내의 표형 스크린은 아디포발생을 조절하고 항당뇨병^특성4,^5,^6,^7로프로 아디포겐 성 분자를 분리하는 유전적 요인을 식별하는 데 유용하다는 것이 입증되었습니다. 그러나 이러한 세포주들은 백색, 갈색, 베이지 및 독특한 특성을 가진 다....