담즙 덕트 TNBS 주입을 통한 만성 췌장염을 위한 마우스 모델

요약

만성 췌장염 (CP)은 췌장의 염증과 섬유증을 특징으로하는 질병이며 종종 난치성 복통과 관련이 있습니다. 이 문서는 2,4,6 -trinitrobenzene 설포닉 산 (TNBS)로 담관 주입을 통해 CP의 마우스 모델을 생성하는 기술을 정제에 초점을 맞추고 있습니다.

초록

만성 췌장염 (CP)은 췌장 염증 및 섬유증, 선 위축, 복통 및 기타 증상을 포함하는 복잡한 질병입니다. 몇몇 설치류 모형은 담즙 덕트 2,4,6 -trinitrobenzene 설포닉산 (TNBS) 주입 모형이 CP에서 보인 신경병성 고통의 특징을 복제하는 CP를 공부하기 위하여 개발되었습니다. 그러나, 마우스에 담관 약물 주입기술적으로 도전. 이 프로토콜은 CP 마우스 모델의 생성을 위한 담관 TNBS 주입의 절차를 보여줍니다. TNBS는 십이지장에서 바터의 암풀라를 통해 췌장에 주입되었다. 이 프로토콜은 수술 중 약물 볼륨, 수술 기술 및 약물 처리를 최적화했습니다. TNBS 처리된 마우스는 체중 감소, 통증 관련 행동의 변화 및 비정상적인 췌장 형태에 의해 반영된 CP의 특징을 보여주었습니다. 이러한 개선으로, TNBS 주입과 관련 된 사망률은 최소한의. 이 절차는 췌장 질병 모형을 생성에 있는 중요할 뿐 아니라 현지 췌장 약 납품에 또한 유용합니다.

서론

만성 췌장염(CP)은 췌장, 섬유증, 복통, 및 외신 및 내분비 기능 모두의 최종 상실을 특징으로 하는 만성 염증성^{질환이다.} 현재 의학적 및 외과 적 치료는 치료되지 않지만 질병의 결과인 증상을 완화하기 위해 수행됩니다 : 내화복통증, 내분비 및 외신 기능 장애. 따라서 보다 효과적인 치료가 절실히 필요하며^2. 동물 모델은 질병의 더 나은 이해를 개발하고 잠재적 인 치료 3을 조사하기위한 필수 도구를^{제공합니다.} CP를 위한 여러 마우스 모델이 개발되었으며, 그 중 세룰린 및/또는 알코올 모델이 일반적으로 사용됩니다. 세룰린, 췌장 분비 자극 올리고펩타이드, 췌장 위축, 섬유증, 그 외^4를특징으로 하는 CP 모델을 재보적으로 유도하는 것으로 나타났다. 또 다른 일반적인 모델은 L-아르기닌의 연쇄 주사를 사용 하 여, 인간 환자에서 관찰 하는 것과 유사한 외크리인 부족을 생산^{하는 5.} CP는 또한 췌장 덕트 결찰뿐만 아니라 전체 또는 부분 췌장 덕트 결찰에 의해 유도될 수 있을 뿐만 아니라^췌장덕트 고혈압^6,

프로토콜

모든 절차는 사우스 캐롤라이나 의과 대학과 랄프 H. 존슨 의료 센터에서 기관 동물 관리 및 사용위원회의 승인으로 실시되었다. C57BL/6J 남성 마우스 사이 8-10 나이의 주 이 연구에서 사용 되었다. 마우스는 음식과 물에 대한 광고 리비툼액세스를 통해 표준 12 빛 / 12 어두운 주기 아래에 보관되었다.

1. 주입을위한 TNBS 솔루션의 준비

1. 0.9% 식염수에 10% 에탄올을 준비합니다. 10%의에탄올에 7.5 μL의 TNBS를 추가하여 최종 농도7.5mMM에 10%에 10%에 이탄올에 10%에 스탁 스톡 TNBS(재료표 참조)를 용해한다.
   주의: TNBS는 화학적 위험을 초래합니다. 연기 후드 내부의 솔루션을 준비하고 장갑, 고글 및 실험실 코트와 같은 개인 보호 장비를 사용하여 TNBS와의 직접적인 접촉을 방지하십시오.
2. 31 게이지 바늘을 가진 인슐린 주사기에 0.75% TNBS 용액의 50 μL을 적재합니다. 식염수에 10% 에탄올의 50 μL을 차량 제어와 동일한 크기의 주사기에 적재합니다. 주사기를 얼음 위에 놓고 필요할 때까지 빛으로부터 보호하십시오.

2. 마우스 준비 및 수술

결과

담관 주입 절차는 이^{절차(10)와}관련된 마우스 사망률을 감소시키기 위해 최적화되었다. TNBS는 35 μL 또는 50 μL의 총 부피로 처음 주어졌다. 50 μL의 부피에서 TNBS의 주사는 전체 췌장에 도달하고 보다 균일한 질병 표현형(도 1B)을유도할 수 있었다. 또한, 31G 바늘을 가진 인슐린 주사기를 사용하여 TNBS의 주입은 일반 주사기 및 바늘 크기에 비해 주입 속도를 더 잘 제어할 수 있었습니다. 얼음에 저장되고 약물 준비 후 1시간 이내에 사용된 갓 준비된 TNBS는 1시간 이상 제조된 TNBS에 비해 더 나은 결과를 산출했습니다. 이러한 개선으로, 수령인의 사망률은 통제되고 10% 미만으로 남아 있었습니다.

체중 감량은 수술 후 처음 3일 동안 원래 체중의 약 6%를 잃은 대조군에서 CP.Mice의 특성 중 하나이며, 그 후 점차 회복(21일째 104.6%)(도

토론

만성 췌장염을 유도하기 위해 TNBS의 담관 주입은 마우스에서 기술적으로 도전적이며, 마우스의 최대 22.5 %는 약물 주입^10의3-4 일 이내에 죽을 수 있습니다. 여기서, 이 보고는 이전 연구 결과에 근거를 둔 절차를 정제하고 <10%로 초기 마우스 사망률을 감소시켰습니다. 예를 들어, 약물 부피 증가(35 μL에서 50μL로) 약물이 전체 췌장에 도달하도록 보장할 수 있다. 인슐린 주사기와 작은 바늘 크기 (31G)를 사용하여 췌장 덕트에 잠재적 인 손상을 감소시키고 담낭이나 복부에 담즙이 누출되어 수술 후 처음 며칠 이내에 마우스 사망을 일으킬 가능성이 큽니다. 담관의 양쪽 끝을 클램핑하면 TNBS가 담낭과 내장으로 누출되는 것을 방지할 수 있으며, 이는 사망을 유발할 수 있습니다. 혈모 클립은 주입 된 췌장 내에서 TNBS를 억제하여 다른 조직에 대한 손상을 줄이면서 효능을 향상시킵니다. 또한 TNBS는 0°C 이상의 온도에서 안정적이지 않습니다. 따라서, 갓 준비된 TNBS.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
10% 중성 완충 포르말린 v/v	Fisher Scientific	23426796
알코올 준비 패드, 멸균	Fisher Scientific	22-363-750
동물 마취 시스템	VetEquip, Inc.
부프레노르핀 염산염, 주입	Par Sterile Products, LLC	NDC 42023-179-05
원심분리기 튜브, 15mL	Fisher Scientific	0553859A
에탄올, 절대(200 proof), 분자 생물학 등급	Fisher Scientific	BP2818500
Extra fine Micro Dissecting Scissors 4" 스트레이트 샤프	Roboz Surgical 악기 (주)	RS-5882
그레이프 집게 4" 엑스트라 델리	케이트 팁 Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5136
가열 패드	Amazon	B07HMKMBKM
Hegar-Baumgartner 바늘 홀더 5.25"	Roboz 수술 기구 Co.	RS-7850
인슐린 주사기, 31게이지 바늘	BD	324909
요오드 준비 패드	Fisher Scientific	19-027048
Isoflurane	Piramal Critical Care	NDC 66794-017-25
마이크로 클립 적용 겸자 5.5"	Roboz 수술 기구 Co.	RS-5410
마이크로 클립, 스트레이트 강한 곡선 1x6mm	Roboz 수술 기구 Co.	RS-5433
마이크로 클립, 스트레이트, 0.75mm 클립 너비	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5420
피크릴설폰산 용액, TNBS, H2O	Millipore Sigma	92822-1ML
폴리프로필렌 봉합사 4-0	Med-Vet International	MV-8683
폴리프로필렌 봉합사 5-0	Med-Vet International	MV-8661
염화나트륨, 0.9% 정맥 주사 용액	VWR	2B1322Q
외과용 드레이프, 멸균	Med-Vet International	DR1826
조직 카세트	피셔 사이언티픽	22-272416
폰 프레이 필라멘트	Bioseb	EB2-VFF

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