여기서, 전이 생물학의 전임상 조사에 사용될 수 있는 자발적인 폐 전이와 함께 골육종의 절단 절차를 따르는 회제 성 직소 이식이 기술되고 새로운 치료법의 개발이 설명된다.
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이 논문에서
요약
초록
골육종 (OS)의 치료에 가장 최근의 사전은 다중 에이전트 화학 요법이 수술 에 비해 전반적인 생존을 개선하는 것으로 나타났을 때 1980 년대에 발생했습니다. 이 문제를 해결하기 위해, 연구의 목적은 생존을 연장 포괄적 인 히스토마이트, 이미징, 생물학적, 이식 및 절단 수술 접근으로 쥐에서 OS의 덜 알려진 모델을 정제하는 것입니다. 우리는 면역 능력, 근친근 Sprague-Dawley (SD), 이식 UMR106 OS 세포주 (SD 쥐에서 유래)와 시너지 쥐 모델을 사용 (SD 쥐에서 유래) 3 주 된 남성과 여성 쥐에 3 주 된 남성과 여성 쥐 소아 OS를 모델링. 우리는 쥐가 재현 가능한 1 차및 전이성 폐 종양을 개발하고, 3 주 이식 후 이식 후 사지 절단이 폐 전이의 발생률을 현저히 감소시키고 예기치 않은 죽음을 방지하는 것을 발견했습니다. 조직학적으로, 쥐의 1차 및 전이성 OS는 인간 OS와 매우 유사하였다. 면역 조직 화학 방법을 사용하여, 연구 결과는 쥐 OS가 대식세포및 T 세포로 침투한다는 것을 보여줍니다. OS 세포의 단백질 발현 조사는 이 종양이 ErbB 가족 키나아제표현을 한다는 것을 밝힙니다. 이 키나아제는 또한 대부분의 인간 적인 OSs에서 높게 표현되기 때문에, 이 쥐 모형은 치료를 위한 ErbB 통로 억제제를 시험하기 위하여 이용될 수 있었습니다.
서론
골육종 (OS)은 어린이, 청소년 및 젊은 성인에서 가장 흔한 1 차 적인 뼈 종양입니다. OS의 치료에 가장 최근의 사전은 다중 에이전트 화학 요법이 수술 혼자 에 비해 전반적인 생존을 개선하는 것으로 나타났다 때 1980 년대에 발생1. OS는 빠른 뼈 성장 도중 발전합니다, 일반적으로 대퇴골과 같은 긴 관 뼈에서 생기는, 경골, 및 상완골. 그들은 골연성, 골세포, 또는 주목할만한 periosteal 반응2와혼합 된 외관을 특징으로한다. 화학요법과 외과 절제술은 환자의 65%를 위한 5년 생존을 가진 환자를 위한 결과를 향상할 수있습니다2,3. 불행히도, 전이성 질환을 가진 고급 OS 환자는 20 %의 생존을 가지고 있습니다. OS는 지역적으로 침략하고 폐 또는 그밖 뼈에 주로 전이하고 남성에서 더 널리 퍼집니다. 이 젊은 환자를 위한 가장 강력한 필요는 먼 전이의 생존을 방지하고 제거하는 새로운 치료입니다.
OS 전임상 모델은4,5,<....
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프로토콜
쥐와 관련된 모든 절차와 실험은 존스 홉킨스 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인 된 프로토콜에 따라 수행되었다.
1. SD 쥐 OS 세포주 UMR-106 세포 배양 프로토콜
- DMEM에서 세포를 성장, 10% (v/v) FBS, 페니실린 (10 U/mL)-연쇄 절제술 (10 U/mL) 37°C에서 가습 5% CO2 대기. 2-812의구절을 가진 세포를 사용하여 실험을 수행합니다.
2. OS 셀 프로토콜의 내적 주입
참고: 시간 제고 임신 한 SD 쥐는 동물 시설에서 출산하고 3 주에, 쓰레기가 사용됩니다 (UMR 106 세포주는 SD 쥐에 합성되기 때문에, 조사가 필요하지 않습니다).
- 유도
- 중간 크기의 유도 챔버에 쥐를 놓고 2 %-3 %의 이소플루란으로 마취를 유도합니다. 발가락 핀치, 호흡 속도 및 문자에 반사하여 마취의 깊이를 지속적으로 모니터링합니다.
- 코를 노세콘에 삽입합니다. 필요한 경우 테이프로 고정하십시오.
- 오른쪽 다리의 머리카락을 복부까지 제거하고 등쪽 하복부를 클리퍼로....
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결과
면역 능력 SD 근친쥐는 이러한 OS 연구에 사용되며, 이는 그대로 면역 체계를 가진 동물 모델을 제공합니다. 우리는 ATCC에서 UMR106 세포줄을 사용했습니다, SD 쥐에서 처음에 OS에서 격리된 세포에서 개발된. 우리는 SD 쥐에 세포를 이식, 따라서 OS에 대한 동기화 모델을 제공. UMR106 세포는 소아 OS 모델을 시뮬레이션, 3 주 된 남성과 여성 SD 쥐의 경골에 이식된다. 더욱이, 경골 대사/설사로 직접 UMR106 세포의 직교 이식은 관련 종양 미세환경을 제공한다.
종양 세포를 이식할 때, 바늘은 골의 중앙 캐비티로 약 10mm를 연장하는 올바른 각도(뼈 샤프트와 평행)에서 티비알 고원을 통해 올바르게 삽입되어야 한다. 이 절차로, 쥐의 95% (52/55) 무릎에 티바이어스 성향에 종양을 개발. 티비알 주사 경험으로, 쥐의 100%는 종양을 개발했습니다. 절단되지 않은 쥐의.......
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토론
OS 티비알 임플란트를 가진 쥐는 이식 후 3 주까지 측정 가능한 종양을 개발합니다. 종양을 가진 사지가 이식 후 3 주 절단되는 경우에, 폐 전이의 부각은 현저하게 감소됩니다. OS는 골연및 골세포학 둘 다입니다. 절단이 없는 쥐는 방사선 촬영또는 부검시 7주 까지 여러 가지 와 가변크기인 폐 전이를 개발합니다. EGFR, ErbB2 및 ErbB4는 인간OS16,17,18과유사한 쥐 UMR106 OS로 표현된다. CD3 T 세포 및 대식세포는 면역히스토화학 방법에 의해 OS에서 쉽게 검출된다. 경정맥 주사는 OS 환자에게 주어지는 약물인 화학요법 독소루비신의 전달을 위해 정맥을 꼬리에 담는 것을 선호한다. 여기에 설명된 방법은 완전한 콕소페모랄 절단입니다. 이 절차는 정제이며 뼈가 절단되어 환자를 위한 그루터기를 떠나는 수술 방법 (대퇴 골 절제술)을 제거하는 .......
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공개 사항
선언할 공개가 없습니다.
감사의 글
국립 암 연구소를 통해 NIH 자금 지원, 보조금 # CA228582. 이시야마 순은 현재 도레이 메디컬(주)으로부터 보조금을 받고 있습니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| AKT | 세포 신호 전달 기술 | 4685S | |
| 흡수성 봉합사 | Ethicon | J214H | |
| β-actin | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-47778 | |
| β 2-AR 항체 | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-569 | 는 &beta로 대체되었습니다. 2-AR (E-3): sc-271322 |
| 비스대시; Tris gels | Thermo Fisher | NP0321PK2 | |
| 부프레노르핀 SR Lab | ZooPharm | IZ-70000-201908 | |
| CD3 항체 | Dako | #A0452 | |
| CD68 항체 | eBioscience | #14-0688-82 | |
| Chemiluminescent substrate | cytiva | RPN2232 | |
| CL-Xposure film | Thermo Fisher | 34089 | |
| 완전한 마취 시스템 | EVETEQUIP | 922120 | |
| 디아미노벤지딘 | VECTOR LABORATORIES | SK-4100 | |
| 독소루비신 | Actavis | NDC 45963-733-60 | |
| EGFR 항체 | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-03 | EGFR (A-10)로 대체: sc-373746 |
| ERBB2 항체 | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-284 | Neu (3B5)로 대체: sc-33684 |
| ERBB4 항체 | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-283 | ErbB4 (C-7)로 대체: sc-8050 |
| ERK 항체 | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-514302 | |
| eye lubricant | PHARMADERM | NDC 0462-0211-38 | |
| Hamilton syringe (100 µ L) | Hamilton | Model 1710 SN SYR | |
| 서양고추냉이 과산화효소 연계 2차 항체 | cytiva | NA934 | |
| HRP 폴리머 검출 키트 | VECTOR LABORATORIES | MP-7401 | |
| HRP 폴리머 검출 키트 | VECTOR LABORATORIES | MP-7402 | |
| 이소플루란 | BUTLER SCHEIN | NDC 11695-6776-2 | |
| 이소플루란 기화기 | EVETEQUIP | 911103 | |
| UMR-106 셀 | ATCC | CRL-1661 | |
| X선 | Faxitron | UltraFocus | |
| X선 프로세서 | Hope X-Ray Peoducts Inc | MicroMax X-ray 프로세서 | Hope 프로세서는 더 이상 미국에서 사용할 수 없습니다 |
| 상처 클립 | BECTON DICKINSON | 427631 |
참고문헌
- Link, M. P., et al. The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity. New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).
- Bielack, S. S., et al.
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재인쇄 및 허가
