이 프로토콜은 해수 및 생물학적 표본에서 지질의 결정을 위한 것입니다. 여과류의 지질은 고체의 경우 클로로폼 또는 클로로폼및 메탄올혼합물로 추출됩니다. 지질 클래스는 화염 이온화 감지와 막대 얇은 층 크로마토그래피에 의해 측정되고 그들의 합계는 총 지질 함량을 제공합니다.
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이 논문에서
요약
초록
지질은 주로 탄소와 수소로 구성되어 있으며, 따라서 바다에서 다른 유기 거대 분자보다 더 큰 특정 에너지를 제공합니다. 탄소와 수소가 풍부하기 때문에 소수성이며 유기 오염 물질용 용매 및 흡수 담체 역할을 할 수 있으므로 해양 생태계에서 오염 물질 바이오 축적의 원동력이 될 수 있습니다. 그들의 소수성 특성은 해수 또는 생물학적 표본에서 그들의 격리를 용이하게 합니다: 해양 지질 분석은 수생 매트릭스에 있는 그밖 물질에서 그들의 분리를 위한 편리한 방법을 제공하는 비 극성 유기 용매에 있는 샘플링 그리고 그 때 추출으로 시작됩니다.
해수를 샘플링한 경우, 첫 번째 단계는 일반적으로 여과에 의한 운영 정의된 '용해'와 '미립자' 진영으로 분리하는 것을 포함합니다. 시료는 진정으로 용존된 물질과 콜로이드를 위해 일반적으로 클로로폼을 사용하여 시료 매트릭스로부터 분리된 지질을 수집하고, 고체 및 생물학적 표본을 위한 클로로폼과 메탄올의 혼합물을 포함한다. 이러한 추출 물 생물 발생 및 인위적 소스에서 여러 클래스를 포함 할 수 있습니다. 이때, 총 지질 및 지질 클래스가 결정될 수 있다. 총 지질은 관례적으로 구분된 개별적으로 결정된 지질 클래스를 합산하여 측정할 수 있습니다. 화염 이온화 검출(FID)을 가진 얇은 층 크로마토그래피(TLC)는 해양 샘플에서 지질의 정량적 분석에 정기적으로 사용됩니다. TLC-FID는 시놉틱 지질 클래스 정보를 제공하며, 클래스를 합산하여 총 지질 측정을 제공합니다.
지질 등급 정보는 지질 추출물에서 방출된 후 지방산 및/또는 스테롤과 같은 개별 성분의 측정과 결합될 때 특히 유용합니다. 지질 구조와 기능의 다양한 그들은 생태계 건강과 인류학적 영향에 의해 영향의 정도를 평가 생태 및 생물 지질 연구에 광범위하게 사용 된다는 것을 의미한다. 그들은 해양 동물군 (예 : 아쿠아 피드 및 / 또는 먹이)에 식이 값의 물질을 측정하고 수질 (예 : 탄화수소)의 지표로 사용되었습니다.
서론
여기에 설명 된 방법은 해양 지질으로 작동적으로 정의 되는 물질에 관한. 이 정의는 비극성 유기 용매에서 액체 액체 추출에 대한 그들의 편의성을 기반으로하며 수중 매트릭스에서 다른 물질과 분리하는 편리한 방법을 제공합니다. 그들의 소수성 성질은 바닷물 또는 생물학 견본에서 그들의 격리를, 그들의 농축, 소금과 단백질의 제거를 촉진합니다.
지질 함량의 측정과 해양 생물의 구성은 수십 년 동안 식품 웹 생태학, 양식 영양 및 식품 과학에 큰 관심을 가지고 있습니다. 지질은 살아있는 유기체에 있는 보편적인 분대입니다, 세포막에 있는 필수적인 분자로 작동합니다, 생체 이용 가능한 에너지의 주요 근원으로, 단열 및 부력을 제공하고, 신호 분자로 봉사합니다. 다른 분야에서 지질 측정을 위한 절차가 잘 설명되었지만, 해양 샘플과의 사용은 일반적으로1형뿐만 아니라 현장 조건에 적응하기 위해 수정이 필요하다.
해수 샘플의 경우, 첫 번째 단계는 일반적으로 여과(프로토콜 단계 1)에 의해 작동적으로 정의된 '용해'와 '미립자' 분획으로 분리가 필요합니다. 미립자 분획은 필터에 의해 유지되는 것이며, 모공의 크기는 컷오프2를정의....
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프로토콜
참고: 지질 분석을 위한 유리제품, 기기 및 필터를 청소하려면 메탄올로 3회 세척한 다음 엽록소로 3개의 세척을 하거나 최소 8시간 동안 450°C로 가열하십시오.
1. 해수 용해 및 미립지질에 대한 여과 절차
참고: 특정 관심 분수는 여과 절차에 의해 운영적으로 정의됩니다. 이 경우 기공 크기는 1.2 μm입니다.
- 필터없이 여과 매니폴드를 설정하고 여과 된 바닷물로 설정을 헹구습니다.
- 깨끗한 집게를 사용하여 47mm 유리 섬유 (GF / C) 필터를 세척하여 깨끗한 여과 시스템에 넣습니다.
- 샘플을 가져 와서 부드럽게 소용돌이하여 수집 용기의 바닥에 정착 했을 수 있는 모든 재료를 다시 중단합니다. 이 경우 알려진 볼륨을 정확하게 측정하고 필터를 통해 이를 필터링합니다.
참고: 부피는 시료의 미립자 물질의 양에 따라 달라집니다: 일반적으로 계절과 위치에 따라 보통 250mL에서 5L 사이. - 시료를 측정하면 필터를 여과된 바닷물로 부드럽게 적시십시오. 전체 샘플을 여과 시스템에 천천히 추가하고 모든 입자가 필터에 추가되도록 여과된 바닷물로 졸업한 실린더를 헹구킵니다. 모든 입자가 필터에 헹....
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결과
가장 빠르게 성장하는 식품 생산 부문으로서 양식업은 변화하는 요구 사항을 충족하기 위해 기술 혁신과 적응 측면에서 진화하고 있습니다. 그 중 하나는 많은 양식 종에 대 한 사료 재료를 제공 하는 야생 공급 생선 밀및 생선 기름에 대 한 의존을 줄이기 위해. 육상식물유는 아쿠아피드에서 생선기름에 대한 지속가능하고 경제적인 대체품으로 조사되고 있으며, 간은지질대사의주요 부위이기 때문에 분석을 위한 표적 조직이다. 그림 2는 우리의 9 성분 표준에서 얻은 원시 TLC-FID 크로마토그램을 보여줍니다, 우리가 생선 기름으로 공식화 다이어트 7% 5%에서 유채 기름, 대서양 연어에서 간 조직 그 다이어트를 공급. 표 1은 다른 물고기의 식이 복제 및 샘플을 분석한 후 얻은 데이터를 보여줍니다. 이러한 데이터는 피크 심플 소프트웨어(버전 4.54)를 사용하여 추출물의 지질 클래스를 정량화하기 위해 스캐너 FID 응.......
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토론
TLC-FID 시스템이 작은 샘플에서 시놉틱 지질 클래스 정보를 제공하는 속도는 TLC-FID를 해양 샘플을 선별할 수 있는 도구로 만들어 더 많은 관련 분석 절차를 착수합니다. 이러한 분석은 일반적으로 지질 추출물에서 성분 화합물의 방출을 필요로하고 가스 크로마토그래피의 경우 변동성을 증가. TLC-FID와 GC-FID가 결합된 것은 해산물 추출물 및 기타 식품14의추출물을 위한 강력한 조합으로 밝혀졌습니다. 성공적인 해양 지질 분석을 위해 샘플은 전체적으로 분해 및 오염으로부터 보호되며 샘플을 로드에 적용하여 세심한 주의를 기울여야 합니다. 한 가지 접근법은 마이크로카세필라피펫터(15)를이용하여 전체 해양 샘플을 로드에 적용하는 것이며, 해양 샘플 유형의 혁신은 해수샘플(16)에해면 미세층 및 에어로졸 샘플을 추가하는 것입니다.
자동 스캐너의 FID.......
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공개 사항
저자는 경쟁 적인 재정적 이익이 없습니다.
감사의 글
이 연구는 캐나다 자연 과학 및 공학 연구 위원회 (NSERC)가 C.C. Parrish에 105379 수의 보조금을 지원받았습니다. 메모리얼 대학의 핵심 연구 장비 및 악기 교육 (CREAIT) 네트워크는이 출판물에 자금을 지원했다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 15ml 바이알 | VWR | 66009-560 | |
| 1-hexadecanol | Sigma | 258741-1G | |
| 1-Monopalmitoyl-rac-glycerol | Sigma | M1640-1g | |
| 2ml 바이알 | VWR | 46610-722 | |
| 25mm 유리 섬유 필터 | Fisher | 09 874 32A | |
| 2ml 피펫 전구 | VWR | 82024-554 | |
| 47mm 유리 섬유 필터 | Fisher | 09 874 32 | |
| 5 3/4" 피펫 | Fisher | 1367820A | |
| 9" 피펫 | Fisher | 1367820C | |
| 아세톤 | VWR | CAAX0116-1 | |
| 애질런트 GC-FID 6890 | 애질런트 | ||
| 염화칼슘 ANHS 500gm | VWR | CACX0160-1 | |
| 2ml 바이알용 캡 | VWR | 46610-712 | |
| 클로로포름 | VWR | CACX1054-1 | |
| 콜레스테릴 팔미테이 | 시그마 | C6072-1G | |
| 크로마로드 S5 | 쉘 USA | 3252 | |
| 디클로로메탄 | VWR | CADX0831-1 | |
| DL-a-포스파티딜콜린, 디팔모토일 | 시그마 | P5911-1g | |
| 에틸 에테르, ACS 등급 무수물 4L | VWR | CAEX0190-4 | |
| 글리세릴 트리팔미테이 | 시그마 | T5888-100MG | |
| 해밀턴 주사기 702SNR 25&마이크로; l | 시그마 | 58381 | |
| 헬륨 | 에어 리퀴드 | A0492781 | |
| 헥산 | VWR | CAHX0296-1 | |
| 수소 레귤레이터 | VWR | 55850-484 | |
| Iatroscan MK6 | 쉘 미국 | ||
| Kimwipes | 피셔 | 066662 | |
| 의료용 에어 | 에어 리퀴드 | A0464563 | |
| 중간 니트릴 장갑 | Fisher | 191301597C | |
| 니트릴 장갑 L | VWR | CA82013-782 | |
| 질소 | 공기 액체 | A0464775 | |
| 질소 조절기 | VWR | 55850-474 | |
| 노나데칸 | 시그마 | 74158-1G | |
| 팔미트산 | 시그마 | P0500-10G | |
| 반복 디스펜서 | Sigma | 20943 | |
| 중탄산나트륨 1kg | VWR | CA97062-460 | |
| 황산나트륨 Anhy ACS 500gr | VWR | CA71008-804 | |
| 황산 | VWR | CASX1244-5 | |
| 테프론 테이프 | Fisher | 14610120 | |
| tissue master 125 115V w/7mm 균질기 | OMNI International | TM125-115 | |
| TLC 개발 탱크 | Shell USA | 3201 | |
| UHP 수소 | 공기 액체 | A0492788 | |
| VWR 솔벤트 repippetter | VWR | 82017-766 | |
| VWR 타이머 깜박임 LED 2 채널 | VWR | 89140-196 | |
| Zebron ZB-Wax GC 컬럼 | Phenomenex | 7HM-G013-11 |
참고문헌
- Couturier, L. I. E., et al. State of art and best practices for fatty acid analysis in aquatic sciences. ICES Journal of Marine Science. , (2020).
- Parrish, C. C. Lipids in Marine Ecosystems. ISRN Oceanography. , 604045(2013).
- Folch, J., Lees, M., Stanley, G. H. S.
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재인쇄 및 허가
