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방법 논문

성인 얼룩말 피시의 무딘 힘 부상의 효과를 연구하는 확장 가능한 모델

3K 조회수

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DOI:

10.3791/62709

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2021년 5월 31일

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이 논문에서

요약

우리는 무딘 힘 외상성 뇌 손상 (TBI) 및 후속 신경 재생의 기초 메커니즘에 따라 병리학의 폭을 검사하기 위해 성인 얼룩말 물고기에 대한 Marmarou 체중 드롭 모델을 수정했습니다. 이 무딘 힘 TBI 모델은 확장 가능, 온화한 유도, 보통, 또는 심한 TBI, 인간의 TBI에서 관찰 부상 이질성을 다시 수상.

초록

무딘 힘 외상성 뇌 손상 (TBI) 머리 외상의 가장 일반적인 형태, 이는 단절의 범위에 걸쳐 복잡 하 고 이종이 불 쌍이 이차 효과 결과. 인간에서 TBI다음 잃어버린 뉴런을 대체하거나 재생하는 메커니즘은 없지만, 제브라피쉬는 뇌를 포함하여 몸 전체에 뉴런을 재생하는 능력을 가지고 있습니다. 무딘 힘 TBI다음 얼룩말 피시에 전시 된 병리학의 폭을 검사하고 후속 뉴런 재생 반응의 기초 메커니즘을 연구하기 위해, 우리는 성인 얼룩말 피시에 사용하기 위해 일반적으로 사용되는 설치류 Marmarou 체중 방울을 수정했습니다. 우리의 간단한 무딘 힘 TBI 모델은 확장 가능, 온화한 유도, 보통, 또는 심한 TBI, 그리고 접촉 과 외상 후 발작, 부종, 경막 및 추적 혈종 혈종, 인지 장애등 인간의 TBI 다음 관찰 표현형의 많은 재구성, 각각 부상 심각도 의존적 인 방식으로 표시. 부상 후 몇 분 이내에 나타나기 시작하는 TBI 후유한은 부상 후 7 일 이내에 거의 손상되지 않은 제어 수준으로 돌아갑니다. 재생 과정은 부상 후 48시간(hpi)부터 시작하며, 최고 세포 증식은 60마치에 의해 관찰됩니다. 따라서, 우리의 zebrafish 무딘 힘 TBI 모형은 제브라피시에 유일하게 신경 재생의 기계장치와 더불어 질병 개시 및 진행을 조사할 수 있는 인간 TBI와 유사한 특징적인 1 차 및 이차 상해 TBI 병리를 생성합니다.

서론

외상성 뇌 손상 (TbIs)은 글로벌 건강 위기와 사망과 장애의 주요 원인입니다. 미국에서는 매년 약 290만 명이 TBI를 경험하고, 2006-2014년 사이에 TBI 또는 TBI 후유로 인한 사망률은 50%1 이상 증가했습니다. 그러나, 결핵은 그들의 병인학, 병리학 및 임상 프리젠 테이션에서 주로 상해의 기계장치에 부분적으로 기인합니다 (MOI), 이는 또한 처리 전략 및 예측 예후2에 영향을 미칩니다. 비록 결핵은 다양 한 MOI에서 발생할 수 있습니다., 그들은 주로 관통 또는 무딘 힘 외상의 결과. 관통 외상은 결핵의 작은 비율을 나타내고 즉각적이고 주변 찔린 뇌 부위에 국한되는 심각하고 초점 상해를 생성3. 대조적으로, 무딘 힘 TBI는 일반 인구에서 일반적입니다, 단절의 범위에 걸쳐 (온화한, 보통, 심한), 여러 뇌 영역에 영향을 미치는 확산, 이질성, 글로벌 상해를 생산1,4,5.

Zebrafish (Danio rerio)

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프로토콜

브라위피쉬는 프레이만 생명과학 센터의 노틀담 제브라피시 시설에서 자랐으며 유지되었습니다. 이 원고에 설명 된 방법은 노틀담 동물 관리 및 사용위원회의 대학에 의해 승인되었다.

1. 외상성 뇌 손상 패러다임

  1. 시스템 물 1L에 2-페녹시에탄올 1mL를 추가하십시오(1L의 탈온화 된 RO 물에 인스턴트 오션 60 mg).
  2. 실온에서 2L의 시스템 물을 포함하는 배수 복구 탱크를 준비합니다.
  3. 원하는 볼 베어링 무게와 강철/플라스틱 튜브의 원하는 길이 와 직경을 선택하고 에너지와 충격력을 결정합니다.
    참고: 튜브는 경로 나 이동 속도를 변경하지 않고 볼 베어링이 통과 할 수있는 내부 직경을 가져야합니다.
    1. 충격에 따라 운동 에너지를 결정합니다.
      figure-protocol-1
      여기서, KE = 운동 에너지, m = 질량(kg), g = 중력, h = 높이(m)가 드롭포인트에서 물고기까지.
      참고: J. J. 에서 운동 에너지를 1,000으로 곱하여 mJ를 결정합....

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결과

부상 유도 장비를 준비하면 성인 얼룩말물고기에 확장 가능한 무딘 힘 TBI를 제공하는 빠르고 단순한 수단을 사용할 수 있습니다. 부상 모델의 등급 심각도는 혈관 부상이 가장 쉽고 눈에 띄는 병리학 중 하나이지만 성공적인 부상의 몇 가지 쉽게 식별 할 수있는 메트릭을 제공합니다 (그림 3). 부상 중에 사용되는 물고기의 변형은이 지표를 쉽게 또는 식별하기 어렵게 만들 수 있습니다. 야생형 AB어(WTAB, 도 3A-D)를 사용하는 경우, 혈관 손상의 식별은 착색으로 인한 miTBI 또는 moTBI 및 손상되지 않은 대조군 물고기를 구별하기 어려울 수 있다(도 3A-C). 부상 후, miTBI 물고기는 .......

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토론

신경 외상 및 관련 후유증에 대한 조사는 오랫동안 기존의 비 재생 설치류 모델에 중점을 두어 왔습니다20. 최근에는 재생 모델에 다양한 형태의 CNS 손상을 적용한 연구9,11,13,14,21. 통찰력이 있지만, 이러한 모델은 인간 인구에서 흔히 볼 수 없는 부상 방법(관통 외상, 화학 절제, 폭발) 및/또는 부상이 확장가능하지 않으므로 인간 인구에서 관찰되는 심각도 의존병리학의 이질성을 완전히 해결하지 못하여 제한됩니다22,23,24,25

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없습니다.

감사의 글

저자는 그들의 사려 깊은 토론에 대한 하이드 실험실 구성원을 감사하고 싶습니다, 제브라피시 관리 및 축산에 대한 프레이만 생명 과학 센터 기술자, 그리고 악기와 서비스의 사용에 대한 노틀담 광학 현미경 코어 / NDIIF 의 대학. 이 작품은 노틀담 대학의 제브라피시 연구 센터, 노틀담 대학의 줄기 세포 및 재생 의학 센터, NIH R01-EY018417 (DRH), 국립 과학 재단 대학원 연구 펠로우십 프로그램 (JTH), 노트르 담 (JTH)의 LTC 닐 하이랜드 펠로우십의 국립 안과 연구소에서 보조금을 지원받았습니다. 자유 펠로우십(JTH)과 팻 틸만 장학금(JTH)의 센티넬.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
2-페녹시에탄올시그마 Alderich77699
#00 벅샷레밍턴RMS23770sTBI용 3.3g 무게
#3 벅샷레밍턴RMS23776miTBI/moTBI#5용 1.5g 무게
Dumont 집게WPI14098
5-에티닐-2'-데옥시우리딘Life TechnologiesA10044EdU
5ml 유리 바이알VWR66011-063
Click-iT EdU 세포 증식 키트Life TechnologiesC10340
CytoOne 12웰 플레이트USA ScientificCC7682-7512
인스턴트 오션인스턴트 오션SS15-10
슈퍼 프로스트 사후 충전 슬라이드VWR48311-703
Super PAP 펜 리퀴드 블로커Ted Pella22309
티슈 냉동 매체VWR15148-031

참고문헌

  1. Centers for Disease Control and Prevention. Surveillance Report of Traumatic Brain Injury-related Emergency Department Visits, Hospitalizations, and Deaths-United States, 2014. Centers for Disease Control and Prevention, U.S. Department of Health and Human Services. , (2019).
  2. Galgano, M., et al.

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재인쇄 및 허가

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