이 프로토콜은 심낭과 그 내용물을 보존하면서 마우스에서 심근 경색을 유도하는 단계를 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
이 프로토콜은 심낭과 그 내용물이 허혈성 설치류 모델 (심근 손상을 유도하는 관상 동맥 결찰)에서 필수적인 항 섬유화 역할을한다는 것을 보여주었습니다. 전임상 심근 경색 모델의 대부분은 항상성 세포 환경의 손실과 함께 심낭 완전성의 파괴를 필요로합니다. 그러나 최근에는 심낭 손상을 최소화하고 심장의 상주 면역 세포 집단을 유지하는 심근 경색을 유도하는 방법론이 개발되었습니다. 관상 동맥 결찰 후 손상되지 않은 심낭 공간을 가진 마우스에서 개선 된 심장 기능 회복이 관찰되었습니다. 이 방법은 심근 경색 후 심낭 공간에서 염증 반응을 연구 할 수있는 기회를 제공합니다. 라벨링 기술의 추가 개발은이 모델과 결합하여 섬유증을 포함하여 심장에서 리모델링을 유도하는 염증 메커니즘을 조절하는 심낭 면역 세포의 운명과 기능을 이해할 수 있습니다.
서론
오늘날까지 심혈관 질환(CVD)은 전 세계적으로 주요 사망 원인으로 인식되어 상당한 재정적 부담과환자의 삶의 질 저하를 초래합니다1. 관상 동맥 질환 (CAD)은 CVD의 하위 유형이며 사망률의 주요 원인 인 심근 경색 (MI)의 발병에 필수적인 역할을합니다. 정의에 따르면, MI는 허혈 및 저산소증의 장기간의 상태로 인한 심근 조직의 돌이킬 수없는 손상으로 인해 발생합니다. 심근 조직은 재생 능력이 부족하므로 부상은 영구적이며 처음에는 보호 할 수 있지만 궁극적으로 불리한 심장 리모델링 및 궁극적 인 심부전2에 기여하는 섬유 성 흉터로 심장 근육을 대체합니다.
CAD 환자의 관리가 지난 수십 년 동안 극적으로 개선되었지만 허혈에 이차적인 만성 심부전(CHF)은 전 세계적으로 많은 환자에게 영향을 미칩니다. 이 전염병을 예방하고 관리하기 위해서는 기본 메커니즘을보다 광범위하게 이해하고 새로운 치료법을 개발해야합니다. 또한 과거의 연구 결과는 전신 요법의 한계와 정확한 대안 개발의 필요성을 강조합니다. 인간에서 MI의 분자 후유증을 조사하는 것은 경색 조직에 접근하는 능력에 의해 영향을 받는다는 점을 감안할 때, CVD와 관련된 인간 MI 및 CHF의 특성 및....
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프로토콜
8-14주령의 수컷 및 암컷 C57BL/6J 마우스를 이들 실험에 사용하였다. 이 프로토콜은 캘거리 대학의 동물 관리위원회로부터 윤리적 승인을 받았으며 모든 동물 관리 지침을 따릅니다.
1. 마우스 준비 및 수술
- 수술 도구를 소독합니다(비드 멸균기 또는 오토클레이브를 통해).
- 수술 전 체중과 진통제 용량에 대해 마우스의 무게를 잰다.
- 마우스를 4% 이소플루란과 800mL/분의 산소가 포함된 유도 상자에 넣습니다. 발가락을 꼬집고 반사가 부족한 동물을 관찰하여 마취면을 확인하십시오.
- 진통제를 피하 주사 (부 프레 노르 핀 0.1mg / kg) ( 재료 표 참조).
- 수술 중 가열된 수술 패드에 마우스를 놓고 코뿔을 통해 전달되는 3% 이소플루란으로 마취를 유지합니다. 각 눈에 건조한 눈을 피하기 위해 안과 연고를 바르십시오.
- 가슴과 목 수술 부위에서 머리카락을 면도하십시오.
- 마우스의 발을 제지하고 수술대 위에 놓습니다.
- 끝이 부드러운 23G 카테터를 입과 인두를 통해 기관에 삽입하여 마우스를 삽관합니다.
- 삽관 후 110회 호흡/분의 속도, 250μL의 일회 호흡량....
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결과
이 수정된 관상동맥 결찰 모델은 재현성과 동물 생존을 달성하도록 최적화되었습니다. 그러나 심장에 유발 된 심각한 손상으로 인해 일부 예상 수술 중 및 수술 후 사망률이 절차와 관련이 있습니다. 표준 사망률은 일반적으로 여성 (~ 10-15 %)보다 남성 (~ 25-35 %)에서 더 높습니다.
수정 된 관상 동맥 결찰로 MI를 성공적으로 유도하는 것은 심장의 기능적 매개 변수 및 구조적 특징의 변화에 의해 분명해야합니다. 기능의 경우, 심 초음파로 평가 된 좌심실 (LV) 박출률과 같은 매개 변수의 감소는 MI 후 3-4 주 이내에 눈에 띄게됩니다 (그림 1A). 이러한 기능적 변화는 피크로시리우스 레드(PR)와 같은 조직학적 염색에 의해 평가된 바와 같이 LV의 자유벽의 현저한 섬유증을 동반해야 한다(도 1B). 이 분석을 위해, 경색을 통한 세로 단면의 사용은 경색 된 영.......
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토론
설치류의 닫힌 심낭에서 MI를 유도하는 것은 독특하며 잠재적으로 중요한 응용 프로그램을 가질 수 있습니다. 이 절차는 설치류 모델과 설치류 심장 해부학에 대한 외과 의사의 친숙함에 크게 의존합니다. 성공은 또한 늑간 근육 절개 및 갈비뼈 수축 (1.11-1.13 단계), 경색 생성 (1.17 단계) 및 동물 회복 (1.22-1.24 단계)의 세 가지 중요한 단계에서 제공되는 치료에 달려 있습니다.
개흉술은 심낭에 구멍을 뚫거나 찢어지지 않도록 부지런히 수행해야합니다. 이 프로토콜의 가장 중요한 단계는 경색을 유도하기 위해 LAD를 봉합하는 것입니다. 모든 LAD 결찰 모델의 경우와 마찬가지로, LAD에 결찰 봉합사의 적절한 배치가 중요합니다: 근위 결찰은 치명적인 MI를 초래할 수 있는 반면, 원위 결찰은 기능적으로 관련된 MI를 유발하지 않을 수 있습니다. 심장의 대략적인 중심에 LAD를 표시하면 이러한 문제를 피할 수 있습니다. LAD 결찰은 심장 박동과 함께 수행되므로 집게.......
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공개 사항
저자는 공개 할 충돌이 없습니다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Steri-350 비드 살균기 | Inotech | NC9449759 | |
| 10% 포르말린 | Millipore 시그마 | HT501128-4L | |
| 40 &마이크로; m 세포 여과기 | VWR | CA21008-949 | Falcon, 352340 |
| 70 µ m 세포 여과기 | VWR | CA21008-952 | Falcon, 352350 |
| ACK 용해 버퍼 | Thermo Fisher | A1049201 | |
| BD Insyte-W 카테터 바늘 24 g x 3/4" | CDMV Inc | 108778 | |
| 베타딘 (10% 포비돈-요오드 국소 용액) | CDMV Inc | 104826 | |
| 둔기 집게 | Fine Science Tools | FST 11000-12 | |
| BNP 안과 연고 | CDMV Inc | 17909 | |
| Castroviejo 바늘 드라이버 | 정밀 과학 도구 | FST 12061-01 | |
| 원심분리기 5810R | Eppendorf | 22625101 | |
| Collagenase I | Millipore Sigma | SCR103 | |
| Collagenase XI | Millipore Sigma | C7657 | |
| Covidien 5-0 Polysorb 봉합사 - CV-11 테이퍼 바늘 | Medtronic Canada | GL-890 | |
| Covidien 5-0 Polysorb 봉합사 - PC-13 절단 바늘 | Medtronic Canada | SL-1659 | |
| 곡선형 무딘 집게 | 파인 사이언스 도구 | FST 11009-13 | |
| Dako 마운팅 매체 | Agilen | CS70330-2 | |
| DNase I | Millipore Sigma | 11284932001 | |
| 에탄올, 100% | Millipore 시그마 | MFCD00003568 | |
| 에티콘 8-0 Ethilon 봉합사 - BV-130-4 테이퍼 바늘 | Johnson & 존슨 Inc. | 2815G | |
| 광섬유 라이트 | 니콘 | 2208502 | |
| 파인 펜치 | 파인 사이언스 툴 | FST 11150-10 | |
| 플루오레브라이트® YG 카르복실레이트 마이크로스피어 1.00 &마이크로; m | 폴리사이언스, Inc. | 15702 | |
| 가이거 열 소추 장치 | 세계 정밀 기기 | 501293 | 모델 150-ST |
| 히알루로니다제 | 밀리포어 시그마 | H4272 | |
| 이소플루오란 기화기 | 하버드 장치 | 75-0951 | |
| 이소플루란 USP, 250 mL | CDMV Inc | 108737 | |
| 자기 고정기 수축 시스템 | 정밀 과학 도구 | 18200-20 | |
| MX550D- 40MHz 프로브 | Fujifilm- Visual Sonics | ||
| 니들 드라이버 | 정밀 과학 도구 | FST 12002-12 | |
| PE-10 튜빙 | Braintree Scienctific, Inc. | PE10 50 FT | |
| 가위 | 미세 과학 도구 | FST 14184-09 | |
| SMZ-1B 스테레오 현미경 | Nikon | SMZ1-PS | |
| VentElite 소형 동물 인공 호흡기 | Harvard Apparatus | 55-7040 | |
| Vetergesic (10 mL, 0.3mg / mL buprenorphine)) | CDMV Inc | 124918 | 통제 약물 |
| Vevo 2100 소프트웨어 | Fujifilm-Visual 음향파 |
참고문헌
- Virani, S. S., et al. Heart disease and stroke statistics-2020 update: A report from the American Heart Association. Circulation. 141, 139(2020).
- Iismaa, S. E., et al. Comparative regenerative mechanisms across different m....
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재인쇄 및 허가
