방법 논문

Murine 피부 이식

DOI:

10.3791/634

⸱

2008년 1월 16일

 , 
1Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)

이 논문에서

요약

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Allogeneic 피부 이식은 MHC - 서로 다른 기증자 항원을 분석 호스트 T 세포 응답에 대한 표준 모델입니다. 이 비디오 문서 BALB/c--> C57BL / 6 피부 이식을 수행에 관련된 각 단계의 영상 자습서를 제공합니다.

초록

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가장 엄격한 최소 기술적으로 도전적인 모델 중 하나로서, 피부 이식은 MHC - 서로 다른 기증자 항원을 분석 호스트 T 세포 응답에 대한 표준 방법입니다. 이 비디오 문서의 목적은 마우스 모델을 사용 피부 이식의 단계별 영상 데모로 뷰어를 제공하는 것입니다. 2) 이식에 대한 수신자를 준비, 3) 피부 이식, 4) 붕대 제거 및 모니터링 이식 거부, 5) 유용한 힌트 1) 수확 기증자 피부 : 프로토콜은 5 주요 구성 요소로 나누어져 있습니다. 일단 실력, 절차 자체가 수행하는 <10 분 정도 소요됩니다.

프로토콜

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이전 실험 개시하기 :

  • IACUC 승인을 받아야
  • 수술기구 및 Q - 도움말을 소독

I. 하베스트 기증자 조직

  1. (기관의 SOP에 따라) 기증자 마우스를 안락사
  2. 알코올 (内耳)의 기지에서 젖은 머리 뒤로
  3. 기지에서 귀를 잘라 수확하여 기증자 피부
  4. 얼음 접시에 넣어 조직
  5. 분할 이어 : 쥐 - 치아 포셉과 (内耳)의 기지로 조직 핀치 복부와 지느러미 양측, 부드럽게 조직을 분열 시키려고, 부동 등의 조직, 내부 표면 아래, PBS 얼음 속에서, collagenous 복부 플랩를 버리고

II. 이식받는 준비

  1. 마취 마우스 승인 절차를 사용
  2. 수술 통증 (예 : 0.05-0.1 MG / G Bupernex의 IP)에 대한 진통제 투여
  3. 가로 위치에 플레이스 마우스
  4. 동물 충분히 진정되도록 발끝 핀치를 수행
  5. 젖은 알코올로 머리와 흉부를 면도
  6. 알코올 면봉과 함께 깨끗한 지역을 닦아

III. 피부 이식

  1. 쥐 - 치아 포셉와 함께 텐트 피부 포셉 아래 ~ 0.25-0.5 cm 잘라 : ~ 1cm 절개를 확인
  2. PBS에서 기증자 피부 이식 침대 위에 자리 (그래프트 침대에 직면하고 귀 피부의 내부 표면)를 제거하고, 멸균 면봉을 넣었와 여분의 PBS를 제거
  3. 그 이식 (이식 가장자리가 아래에 모습을 드러냅니다하지 그 이식받는 사람의 트렁크 피부에 숙취가없는 것을 확인하고) 이식 침대 이내에 단호하게 자리잡고 있으므로 신중하게 거리를 초과 기증자의 피부를 트림
  4. 멸균 붕대로 감싸받는 사람 (피부 이식을 통해 위치가 아닌 접착 거즈 세그먼트 포함)
  5. 그 붕대이 (동물의 호흡을 평가) 너무 꽉되지 않도록하고 팔을 자유롭게 이동 아르
  6. 단일 2-0 실크 봉합사와 보안 붕대
  7. 깨끗한 새장에 플레이스 동물 (동물까지 가열 램프에 따라 충분히 마취로부터 복구되었습니다)
  8. 모니터받는 고통의 흔적을 1-2/day과 고통 구호를위한 필요에 따라 진통제 투여

IV. 붕대 제거 (6~7일 포스트 이식)

  1. 마취 마우스 승인 절차를 사용
  2. 실크 봉합사 컷 및 제거
  3. 신중하게 붕대 (그래프트를 방해하지 않도록 만들기)를 통해 컷 뭉툭한 끝 가위를 사용하여 부드럽게 제거
  4. 깨끗한 케이지 마우스로 돌아가기
  5. 폼 또는 수축의 흔적을 붕대 제거 후 이식 ~ 8 시간을 확인합니다. 있는 경우, 수술이 vascularize에 실패 할 수도 있습니다 및 기술 실패로 간주되어야합니다.
  6. 거절의 흔적 (보통 기증자의 조직 ~ 80 %의 괴사로 정의)에 대한 일일 모니터
  7. Allogeneic 피부 이식은 보통 D8 - 12 수술 사이 거부합니다

V. 유용한 힌트

  1. 가까이 귀에의 기본에 기증자의 조직을 것입니다 수확 : 1) 그래프트의 크기를 극대화하고, 2) 분할을 용이하게합니다 고르지 복부 오버행을 제공합니다
  2. 항상받는 조작에 대한 새 면도날을 사용하여
  3. 진통이 IP를 부여하는 경우 (그래프트을 방해의 가능성을 최소화) 수술 처리를 최소화하기 위해 절차를 이식하기 전에 관리
  4. 가능하다면, 붕대를 적용하기 전에 장갑을 제거합니다. 장갑은 붕대를 심어 응용 프로그램을 복잡하게하는 경향이
  5. 붕대 끝에 하나의 봉합사를 게재하면 조기 제거를 최소화합니다
  6. 꽉로 허용하고 봉합을 배치하기 전에 호흡을 평가로 바꿈 붕대. 붕대가 너무 꽉 경우, 동물은 호흡을 중지합니다. 붕대가 너무 느슨한 경우, 동물은 그것을 제거됩니다.

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토론

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본 동영상 문서에 시연, 피부 이식 모델 allogeneic T 세포 응답을 모니터링을위한 빠르고 쉬운 방법입니다. Allogeneic 피부 이식은 어플 리케이션의 광범하고 분석하는 immunosuppressive 대리인 및 내성 유도 프로토콜뿐만 아니라 조사를 위해 다양한 차단 항체의 생물 학적 효과의 다양한의 효율성을 활용하고 있습니다.

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공개 사항

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저자들은 공개할 사항이 없습니다.

감사의 글

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH 면역학 교육 그랜트 T32 AI 60,573 (KRG)와 NIH 부여 GM 41,514 (MDC)

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
미세해부 핀셋 (곡선형)Sigma-AldrichF4142
쥐 치아 핀셋 (1x2 치아, 직선형)Fine Science Tools11053-10n=2
사시 가위 (둔단)Fine Science Tools14074-11
아이리스 핀셋 (곡선형)Fine Science Tools11065-07
스프링 가위 (각진 형태)Fine Science Tools15006-09
Halsey 미세 지침기Fine Science Tools12500-12
10 cm 플레이트Corning430167
PBSCellgro21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride)Reckitt Benckiser517201
인슐린 주사기 (29 Ga)Monoject8881 600145
면봉Solon Manufacturing Company362
외날 면도날 (#9)Smith & Nephew Inc.67-0238
실크 봉합사 (2-0; PS-2)Ethicon Inc.583H

재인쇄 및 허가

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