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방법 논문

혈관 반응을 조사하기 위한 폐동맥 및 평활근 세포의 분리

4.7K 조회수

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DOI:

10.3791/63686

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2022년 6월 8일

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1Department of Physiology, Faculty of Medical Science and Center of Excellence for Innovation in Chemistry, Naresuan University, 2Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmacognosy, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Naresuan University, 3Cosmetics and Natural Products Research Center, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Naresuan University, 4Snyder Institute for Chronic Diseases, Airways Inflammation Research Group, Department of Physiology and Pharmacology, University of Calgary

이 논문에서

요약

동맥 폐 순환의 혈관 반응은 폐내 동맥 (IPA) 및 혈관 평활근 세포 (VSMC)를 사용하여 탐색 할 수 있습니다. 본 연구는 IPA의 분리와 생리적 자극에 대한 반응으로 혈관 이완을 조사하는 데 사용되는 프로토콜을 자세히 설명합니다.

초록

쥐 폐에서 분리 된 폐내 동맥 (IPA) 및 혈관 평활근 세포 (VSMC)는 혈관 수축 및 혈관 이완의 기본 메커니즘을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. IPA 및 VSMC를 분리 한 후 신경 신호, 호르몬, 사이토 카인 등과 같은 외인성 요인이없는 경우 생리 학적 및 병리학 적 조건에서 혈관 반응의 특성을 평가할 수 있습니다. 따라서 IPA 및 VSMC는 약리학 적 약제에 의한 조절, 패치 클램프 전기 생리 학적 분석, 칼슘 이미징 등과 같은 다양한 실험 조사와 함께 혈관 생리학 / 병태 생리학을 연구하기위한 우수한 모델 역할을합니다. 여기에서는 장기 목욕 설정에서 혈관 반응을 조사하기 위해 IPA를 분리하는 기술을 사용했습니다. IPA 세그먼트는 강내 와이어를 통해 장기 목욕 챔버에 장착되고 다양한 약리학 적 약제에 의해 자극되었습니다. IPA 혈관 색조의 변화(즉, 혈관 수축 및 혈관 이완)를 등척성 힘 변환기 및 생리학적 데이터 분석 소프트웨어 프로그램을 사용하여 기록하였다. 우리는 식물 화학 또는 합성 약물의 약리학 적 활성을 연구하기 위해 혈관 이완 / 혈관 수축 메커니즘을 조사하는 데 적용 할 수있는 몇 가지 실험 프로토콜을 구현했습니다. 이 프로토콜은 또한 폐동맥 고혈압을 포함한 다양한 질병을 조절하는 약물의 역할을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. IPA 모델을 통해 약물의 약력학 파라미터를 평가하는 데 중요한 농도-반응 곡선을 조사할 수 있습니다.

서론

폐 혈관 구조는 저압 혈관 시스템으로, 주요 기능은 산소가 제거 된 혈액을 폐의 가스 교환 영역으로 전달하는 것입니다. 폐의 폐동맥은 기관지 나무와 평행 한 가지로 배열되어 궁극적으로 여러 폐포에 걸쳐 연속적이고 마지막으로 정맥과 정맥으로 모이는 광범위한 모세 혈관 네트워크를 형성합니다. 폐동맥의 혈관 색조는 내피와 혈관 평활근 세포 (VSMC) 사이의 상호 작용을 포함하는 여러 요인에 의해 제어됩니다1.

이 연구에서 우리는 폐내 동맥 (IPA)의 내피 의존성 및 독립적 인 혈관 이완에 중점을 둡니다. 내피 의존성 혈관 이완과 관련하여 내피 세포 표면에서 발생하는 다양한 메커니즘은 세포 내Ca2+ 농도를 증가시킬 수 있으며(예: 아세틸콜린[ACh]는 무스카린 수용체[M3]와 결합), 산화질소(NO), 프로스타사이클린(PGl2) 및 내피 유래 과분극 인자(EDHF)의 형성을 유도할 수 있습니다(그림 1 ). NO는 내피 산화 질소 합성 효소 (eNOS)2에 의해 L- 아르기닌에서 합성 된 주요 내피 유래 이완 인자이며, 내피 세포에서 VSMC로 해리되고 (그림 1) 가용성 구아 닐릴 사이 클라 제 (sGC) 효소를 자극합니다. 이 효소는 구아노신 삼인산(GTP)을 고리형 구아노신 모노포스페이트(cGMP)로 변화시켜 단백질 키나아제 G(PKG)를 활성화하고 세포질Ca 2+ 수준을 감소시켜 혈관 이완을 유발합니다(그림 1). PGl2는 시클로옥시게나제(COX) 경로 3,4를 통해 내피 세포에 의해 합성된다. VSMC의 프로스타사이클린 수용체(IP)와 결합하여 아데닐릴 사이클라제(AC) 효소를 자극한 다음 아데노신 삼인산(ATP)을 고리형 아데노신 모노포스페이트(cAMP)로 전환합니다(그림 1)3,4. cAMP는 단백질 키나아제 A (PKA)를 활성화시켜 세포질Ca 2+ 수준을 감소시키고 혈관 이완5을 유발합니다 (그림 1). EDHF 경로는 또한 다양한 내피 매개체 및 전기적 사건을 통해 내피 의존성 혈관 이완에 참여합니다. EDHF 경로의 활성화는 VSMC의 과분극을 유도하여 전압 작동 Ca 2+ 채널 (VOCC)을 폐쇄하고 세포 내Ca 2+ 수준을 감소시키고 혈관 이완을 유도합니다6. 내피 비 의존성 혈관 이완은 세포 내Ca2+ 수준의 감소, 미오신 경쇄 키나아제 (MLCK)의 억제, 미오신 경쇄 포스파타제 (MLCP)의 활성화 및 VSMC의 수축 기계에 대한Ca 2+ 민감도의 감소와 같은 여러 메커니즘을 통해 VSMC에서 직접 발생합니다. 이 연구에서는 다양한 K+ 채널의 개방, VOCC의 봉쇄 및 근형질 세망7에서 Ca2+ 방출 억제로 인한 혈관 이완에 중점을 두어 세포 내Ca2+ 수준을 감소시켜 VSMC 미오신 경쇄 인산화 및 미오신 - 액틴 결합 또는 교차 다리 형성을 각각 감소시키고, 궁극적으로 혈관 이완을 초래합니다.

분리 된 IPA에서 혈관 수축 및 혈관 이완 측정을 평가하는 기술은 설치류에 대해 잘 확립되어 있지만 데이터는 실험 프로토콜에 따라 다릅니다. 본 연구는 신경 신호, 호르몬, 사이토 카인, 혈압 등과 같은 생체 내 혈관 반응을 조절하는 외부 요인이없는 상태에서 만들어진 시험관 내 래트 IPA 제제의 혈관 반응성을 평가하는 데 사용되는 방법을 설명합니다.

우리는 IPA의 혈관 반응성을 연구하기 위한 예로서 식물 추출물을 사용하는 여러 실험 프로토콜을 사용했습니다. 다양한 차단제 (그림 1)를 사용하여 식물 추출물에 의해 유도 된 내피 의존성 및 비 의존성 혈관 이완 메커니즘을 확인했습니다. 그럼에도 불구하고, 다양한 폐 병리의 치료에 사용되는 약물, 추출물 또는 식물 화학 물질에 대한 IPA의 혈관 반응을 평가하기 위해 동일한 프로토콜을 적용 할 수 있습니다.

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프로토콜

이 연구에서 수행 된 실험은 Naresuan University 동물 관리 및 사용위원회 (NUACUC)의 윤리위원회, 프로토콜 번호 NU-AE620921, 과학적 목적을위한 동물의 관리 및 사용에 대한 승인을 받았습니다.

1. 생리적 용액의 조성

  1. 다음과 같이 최종 농도를 달성하기 위해 증류수에 화학물질을 용해시켜 크렙스 용액을 제형화한다: 122 mM NaCl, 10 mM HEPES, 5 mM KCl, 0.5 mM KH2PO4, 0.5mM NaHPO4, 1 mM MgCl2, 1.8 mM CaCl2, 및 11 mM 글루코스8. 사용하기 전에 용액의 pH를 1M NaOH로 7.3으로 조정하고 37°C로 예열합니다.
  2. 1.1단계에서 언급한 것과 유사하게 차가운 Krebs 용액을 준비합니다. 단계 2에 기재된 바와 같이 IPA의 격리 매체로서 사용하기 위해.

2. 폐내 동맥 분리 (IPA)

  1. 8주 된 수컷 Wistar 쥐를 티오펜탈 나트륨(100mg/kg)을 복강 주사하여 마취합니다9. 발에 고정 된 집게를 사용하여 깊은 수면에서 고통스러운 자극에 대한 쥐의 반응을 확인한 다음 2.2 단계에서 안락사시키기 전에 쥐가 발 풀백 반응이 없는지 확인하십시오.
  2. 쥐의 중간 흉부와 심장 단자를 가위 (크기 14cm)로 자릅니다. 그런 다음 가위 (크기 14cm)로 폐의 뿌리를 찾으십시오. 가위로 절단하여 폐 전체를 수확하고 차가운 Krebs 용액10,11에 담그십시오.
  3. 가위 (크기 11cm)로 폐의 단일 엽을 자르고 폐의 내측 / 뿌리가 위를 향하도록 페트리 접시 (크기 9cm)에 놓습니다 (그림 2A, B). 정맥, 기관지 및 동맥의 정렬을 위에서 아래로 관찰하고 식별합니다(그림 2B).
  4. 가위 (크기 11cm)로 기관지를 세로로 자릅니다. 그런 다음 집게(크기 11cm)를 사용하여 기관지 끝을 잡습니다. 부드럽게 해부하고 폐에서 기관지와 정맥을 제거하십시오. IPA는 항상 기관지 아래에 해부학 적으로 정렬되어 있습니다.
  5. 그 후 주요 IPA를 시각화 할 수 있습니다 (그림 2C). 집게(크기 11cm)를 사용하여 IPA의 끝을 잡고 가위(크기 11cm)로 폐 조직에서 조심스럽게 해부합니다.
  6. 분리된 IPA를 장기 수조 어셈블리가 설정될 때까지 차가운 크렙스 용액에 보관하십시오(pH 7.3 및 온도 4°C)1 1.

3. 혈관 평활근 세포 (VSMC)의 분리

  1. 앞서 2단계에서 설명한 대로 IPA를 분리합니다. 가위 (크기 11cm)로 IPA의 주요 가지를 세로로 자르고 작은 스트립 (2mm)으로 자릅니다 (그림 3A).
  2. IPA 스트립을 110 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.5 mM KH2PO4, 0.5 mMNaH2PO4, 10 mM NaHCO3, 10 mM Hepes,0.03 mM 페놀 레드, 10 mM 타우린, 0.5 mM EDTA, 2 mM MgCl2, 11 mM 글루코스, 및 0.16 mMCaCl2를 함유하는 해리 매질 (DM)10,12에 침지시키고, 1 M NaOH로 pH를 7.0으로 조정한다. 스트립을 1 mg/mL 파파인, 0.04% 소 혈청 알부민(BSA) 및 0.4 mM 1,4-디티오트레이톨(DTT)을 함유하는 DM에서 4°C에서 1시간 동안 배양하고, 37°C에서 15분 동안 추가로 배양한다. DM에 1mg/mL 콜라게나제 유형 1A를 추가하고 37°C에서 5분 동안 추가로 배양합니다.
    참고: DM은 세포 생존율을 보존하는 데 사용되는 솔루션입니다. 파파인과 콜라게나제 유형 1A는 세포 외 기질 단백질을 분해하여 단일 세포를 분리하는 효소입니다. BSA는 저장 및 효소 반응 동안 효소의 안정화에 사용되는 혈청 알부민 단백질입니다. DTT는 세포 분리 과정에서 효소의 활성을 안정화하고 촉진하는 데 사용되는 환원제입니다. 타우린은 세포막과 세포 완전성을 안정화시키는데 사용되는 아미노 황산이다.
  3. 조직을 신선한 DM으로 옮기고 유리 파스퇴르 피펫을 사용하여 부드러운 분쇄로 분산시킵니다(그림 3B). 분리된 VSMC가 현미경으로 목욕 용액에서 보일 때까지 계속 분쇄합니다(그림 3C).
    참고: 새로 분리된 VSMC는 약리학적 제제에 의한 조절, 패치 클램프 전기생리학적 분석, 칼슘 이미징 등과 같은 다양한 실험 조사와 함께 혈관 생리학/병태생리학을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 그러나, 본 연구는 장기 목욕 기술을 이용한 분리 된 IPA의 혈관 이완에만 초점을 맞추고 있습니다.

4. 오르간 목욕 기술

  1. 앞서 2단계에서 설명한 대로 IPA를 분리합니다. IPA의 주요 가지를 ~2mm 길이의 고리로 자릅니다(그림 2D)13.
  2. IPA 링을 두 개의 직경 40μm 스테인리스 스틸 와이어(그림 2E)11,13,14에 끼워 오르간 수조 챔버(그림 4)에 부착합니다.
  3. IPA 링으로 장착된 스테인리스 스틸 와이어를 데이터 수집 장치 및 데이터 기록 및 분석에 적합한 생리학적 소프트웨어가 설치된 컴퓨터 시스템에 연결된 등척성 힘 변환기에 연결한 다음 IPA 링의 장력을 1g11로 부드럽게 올립니다.
  4. 용기 세그먼트가 45g의 휴지 장력에서 약 1분 동안 평형을 이루도록 합니다. 평형 기간 동안 Krebs 용액이 15분마다 정기적으로 교체되는지 확인하십시오. 이러한 평형 기간 후에, 47.4 mM NaCl, 80 mM KCl, 10 mM Hepes, 0.5 mMKH2PO4, 0.5 mM NaHPO4, 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 및 11 mM 글루코스 10,11을 함유하는 높은 세포외 K+ (80 mM) 용액에 대한 혈관 수축을 측정함으로써 혈관의 생존력을 시험한다.
  5. 페닐에 프린 (PE, 1 x 10-5 M)으로 사전 계약 된 고리에서 아세틸 콜린 (1 x 10-5 M)에 대한 이완 반응을 계산하여 내피의 유무를 평가하십시오 (혈관 수축은 PE를 추가 한 후 1 시간 동안 안정적으로 유지됨). 고리가 70% 이상의 이완을 위해 정량화되는 경우 내피가 손상되지 않은 것으로 간주하십시오(그림 5A). 이완이 10% 미만인 경우 고리를 내피 탈질13으로 간주합니다(그림 5B). 작은 와이어로 혈관 내부를 부드럽게 문질러 내피를 기계적으로 제거하여 탈질을 유도합니다.
  6. 시험 실험의 시작 전에 30분 동안 동맥 고리를 다시 평형화시킨다.

5. 식물 추출물에 대한 혈관 이완제 반응

  1. PE (1 x 10-5 M)로 IPA 링을 사전 계약하여 식물 추출물의 이완 효과를 조사하십시오.
  2. 그런 다음 식물 추출물(1-1,000μg/mL)을 내피 원형 고리와 내피 탈질 고리에 누적하여 조심스럽게 추가하여 혈관 이완을 유도하고(그림 6A, B) 농도 의존적 반응 곡선을 얻습니다(그림 6C).
  3. 용매로 사용되는 디메틸 설폭 사이드 (DMSO)의 효과도 음성 대조군으로 작용하도록 유사하게 평가되는지 확인하십시오 (그림 6C).

6. 식물 추출물이 내피를 통해 혈관이완을 유도하는 기전

  1. 내피 산화 질소 합성 효소 (eNOS), 시클로 옥시 게나 제 (COX) 13 및 내피 유래 과분극 인자 (EDHF) 경로를 통해 식물 추출물의 혈관 이완제 작용 메커니즘을 평가하여 내피 온전한 IPA 고리를 다음 억제제와 함께 30 분 동안 배양합니다 (그림 7A) : 1 x 10-4 M NG- 니트로 -L- 아르기닌 메틸 에스테르 (L-NAME, eNOS 억제제) 9, 1 x 10-5 M 인도 메타 신 (COX 억제제) 9, 또는 1 x 10-7 M AP로 IPA의 수축을 유도하기 전에 1 x 10-7 M 아파민 (작은 칼슘 활성화 칼륨 채널 차단제) 및 1 x 10-7 M charybdotoxin (중간 및 큰 전도도 칼슘 활성화 칼륨 채널 차단제)의 조합.
  2. 그런 다음 PE로 수축 안정화 된 후 식물 추출물의 누적 농도 (0.1-1,000 μg / mL)를 추가합니다.
  3. 억제제가 없는 IPA 고리의 반응과 비교하여 억제제가 있는 상태에서 IPA 고리의 이완 백분율로서 식물 추출물의 효과를 제시하고(그림 7B-D) 농도-반응 곡선을 구축합니다.

7. 혈관 평활근 K+ 채널을 통한 식물 추출물 유발 혈관 이완 메커니즘

  1. 전압 게이트 칼륨 채널(KV)의 차단제 인 1 x 10-3 M 4- 아미노 피리딘 (4-AP) (그림 8A), 1 x 10-5 M 글리 벤 클라 미드, ATP 민감성 칼륨 채널 (KATP) 차단제 또는 1 x 10-7 M 이베리오톡신, 큰 전도도Ca 2+ 활성화 K + 채널 (KCA)의 차단제, 1 x 10-5 M PE로 IPA의 수축을 유도하기 전에.
  2. 그런 다음 식물 추출물의 누적 농도를 추가합니다.
  3. 식물 추출물의 효과를 억제제가 없는 IPA 고리와 비교하여 억제제를 사용한 IPA 고리의 이완 백분율로 제시하고(그림 8B-D) 농도-반응 곡선을 구성합니다.

8. VSMCs에서 세포외 칼슘(Ca2+) 유입 억제를 통한 식물 추출물 유발 혈관 이완의 메커니즘

  1. 1mM 에틸렌 글리콜-비스(2-아미노에틸에테르)-N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA)을 포함하는 Ca2+-free Krebs 용액에서 30분 동안 내피 탈질 IPA 고리를 사전 배양합니다(그림 9A).
  2. 그런 다음 목욕 용액을Ca2 + free-80mM K+ 용액으로 10분 동안 교체하여 VSMC를 탈분극한 다음 VOCC를 엽니다(그림 9A).
  3. 누적 적으로CaCl2 (0.01-10 mM)를 추가하여 IPA의 혈관 수축을 유도하고 농도-반응 곡선을 구축합니다 (그림 9A).
  4. 동일한 IPA 고리에서이 프로토콜을 반복하되 식물 추출물 또는 1 μM 니카 디핀 (L 형Ca 2 + 채널 차단제)을Ca2+ 함유 80 mM K + 용액 중 10 분 동안 미리 배양 한 후 CaCl28을 누적 첨가합니다.
  5. 마지막으로, 수축 반응을 대조군CaCl2 챌린지에 의해 이전에 유도된 최대 수축과 비교한다(그림 9B).

9. 근형질 세망(SR)에서 세포내 칼슘(Ca2+) 방출 억제를 통한 식물 추출물 유도 혈관 이완 메커니즘

  1. 내피 탈질 IPA 링을 80mM K+ 용액에 약 5분 동안 노출시켜 VSMC를 탈분극하고 VOCC를 열고 궁극적으로 SR에Ca 2+ 로딩을 생성합니다(그림 10A).
  2. 10분 동안 목욕 용액을 1mM EGTA가 포함된 Ca2+가 없는 Krebs 용액으로 교체합니다(그림 10A).
  3. 그런 다음 포스포리파아제 C/IP3 경로를 활성화하여 궁극적으로 SR에서Ca2+를 방출하고 IPA의 일시적인 수축을 유발하는 1 x 10-5M PE로 IPA 링에 도전합니다(그림 10A).
  4. 동일한 프로토콜을 반복하여 PE에 대한 일시적인 수축을 확인합니다.
  5. 약 5분 동안 80mM K+ 용액으로 IPA 링에 다시 도전한 다음 목욕 용액을 식물 추출물이 있거나 없는 1mM EGTA를 포함하는 Ca2+ 프리 Krebs 용액으로 10분 동안 교체합니다.
  6. 다시 1 x 10-5 M PE로 IPA 링에 도전하십시오.
  7. PE에 의해 유도된 IPA 수축을 식물 추출물이 있는 상태와 없는 상태 사이에 비교합니다(그림 10B).

10. 통계 분석

  1. 결과를 평균± SEM으로 표현합니다. 스튜던트 t-검정을 사용하여 이러한 값을 비교하거나 분산 분석(ANOVA)으로 분석한 후 적절한 통계 소프트웨어를 사용하여 Tukey-Kramer 사후 검정을 수행합니다. p < 0.05에서의 차이가 통계적으로 유의하다고 생각하십시오. 여기서, n=6마리의 래트/실험 프로토콜이 있었다.
    알림: 혈관 수축 및 혈관 이완의 기록은 컴퓨터에 설치된 적절한 소프트웨어로 평가할 수 있습니다. 예를 들어, 도 5A 는 혈관이 수축을 일으키는 PE에 의해 자극될 때, 이것은 원래 추적의 증가된 장력으로부터 관찰될 수 있음을 보여준다. 추적은 20-30 분 안에 안정화되며 이는 100 % 수축으로 간주됩니다. 그 후, ACh는 혈관을 자극하여 이완을 일으키며, 이는 원래 추적의 장력 감소에서 관찰 할 수 있습니다. 따라서, 감소된 장력은 100% 수축에 대한 백분율로 계산된다.

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결과

본 연구의 프로토콜은 단리된 IPA 제제의 혈관 반응에서 관찰되는 생리적 현상을 측정하기 위한 최적의 실험 조건을 결정하기 위해 개발되었다. 파일럿 실험은 다음과 같이 식물 추출물의 혈관 효과 및 혈관 이완 작용의 기계론적 기초에 대한 이해를 돕기 위해 잠재적인 결과를 설명하기 위해 수행되었습니다.

식물 추출물의 혈관 이완 효과
그림 6A, B에서 볼 수 있듯이 내피 손상되지 않은 IPA (E +)에서 식물 추출물은 혈관 이완의 농도 의존적 반응을 유도했습니다 (EC50 = 66.88 μg / mL, 그림 6C). 내피 (E-)의 박멸은 EC 50의 2.2 배 증가에 반영된 바와 같이 식물 추출물에 의해 유도 된 혈관 이완 (p < 0.01)을 크게 감소 시켰습니다 ...

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토론

이 원고에서는 쥐 IPA와 VSMC를 분리하는 기술을 설명합니다. 시험관 내에서 IPA의 혈관 반응을 조사하기 위해 여러 실험 프로토콜이 사용되었으며, 이는 식물 추출물에 의해 유도된 IPA 혈관 이완의 약리학적 효과 및 기계론적 기초를 특성화하는 데 사용될 수 있습니다.

식물 추출물의 내피 의존성 혈관 확장 작용과 관련하여 L-NAME (eNOS), 인도 메타 신 (COX) 및 아파민 + 차리 브도 톡신 (EDHF)과 같은 다양한 차단제가 사용되었습니다. 대표적인 데이터는 양성 결과(즉, eNOS 또는 EDHF 억제제의 존재 하에서 혈관 확장제 반응의 현저한 감소)와 음성 결과(즉, COX 억제제의 존재 하에 혈관 확장제 반응의 변화 없음)를 모두 보여주었으며, 이는 식물 추출물이 eNOS 및 EDHF 내피 경로를 통해 작용함을 시사합니다. 식물 추출물에 의해 유도 된 내피 비 혈관 이완제 효과는 K + 채널, 세포 외Ca2 + 유입 및 SR...

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공개 사항

저자는 공개 할 것이 없습니다.

감사의 글

저자는 태국 국립 연구위원회, 화학 혁신 우수 센터 (PERCH-CIC), 국제 연구 네트워크 (IRN61W0005)가 재정 지원을 제공하고 Naresuan University의 생리학 학부 의학과가 연구 시설 지원을 제공했음을 인정하고자합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1,4-디티오트레이톨(DTT)시그마-알드리치D0632
CAS NO. 348-12-3
4-아미노피리딘(4-AP)알드리치 화학A78403
CAS NO. 504-24-5
아세틸콜린시그마-알드리치A6625
CAS NO. 60-31-1
아파민시그마-알드리치A9459
CAS 번호 24345-16-2
소 혈청 알부민 (BSA)시그마 - 알드리치A2153 < / > CAS 번호 9048-46-8
칼슘 chorideAjax FinechemAJA960
CAS 번호 1707055184
Charybdotoxin시그마 - 알드리치C7802
CAS 번호 95751-30-7
콜라겐 분해 효소 유형 1A시그마 - 알드리치C9891
CAS 번호 9001-12-1		클로스트 리듐 히스톨리티쿰
D (+) - 포도당 일 수화물Millipore CorporationK50876942 924
CAS NO. 14431-43-7
디메틸 설폭 시드 (DMSO)시그마 - 알드리치D4540
CAS 번호 67-68-5
에틸렌 글리콜 -비스 (2- 아미노 에틸 에테르) -N, N, N', N'- 테트라 아세트산 (EGTA)시그마 - 알드리치E3889
CAS 번호 67-42-5
에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA)Sigma-AldrichE9884
CAS NO. 60-00-4
겸자 11cm.녹슬지 않는 Dumoxel겸
14cm.Rustless Dumoxel-Glibenclamide
Sigma-AldrichG6039
CAS NO. 16673-34-0
GraphPad Prism 프로그램소프트웨어 버전 5.0 (San Diego, CA, USA)
HEPESSigma-AldrichH3375
CAS NO. 7365-45-9
IberiotoxinSigma-AldrichI5904
CAS NO. 1002546960		재조합 Mesobuthus tamulus
IndomethacinSigma-AldrichI7378
CAS NO. 53-86-1
Labchart 프로그램소프트웨어 버전 7.0 (AD Instrument, Castle Hill, Australia).
염화마그네슘Ajax Finechem296
CAS NO. 1506254995
남성 Wistar 쥐Nomura Siam International Co. Ltd., 방콕, 태국
NG-니트로 -L- 아르기닌 메틸 에스테르 (L-NAME)시그마 -알드리치N5751
CAS 번호 51298-62-5
니카르 디핀시그마 < /> CAS 번호 54527-84-3
오르간 목욕 15mL.--연구자들의 특정 순서
: Papain: Sigma-AldrichP4762
CAS NO. 9001-73-4		FromPapaya Latex
Phenal redSigma-AldrichP5530
CAS NO. 34487-61-1
PhenylephrineSigma-AldrichP6126
CAS NO. 61-76-7
염화칼KemausKA383
CAS NO. 7447-40-7
칼륨 이수소 인산Aldrich 화학EC231-913-4
CAS NO. 7778-77-0
S+A2:E36odium chlorideKemausKA465
CAS NO. 7647-14-5
가위 11cm.스폴 스테인리스-
가위 14cm스폴 스테인리스-
중탄산 나트륨Ajax Finechem475
CAS 번호 912466
나트륨 디 하이드로 겐 포스페이Aldrich Chemical33,198-8
CAS NO. 7558-80-7
수산화 나트륨Ajax482
CAS 번호 1506196602
나트륨 티오펜탈Anesthal JPN3010002<br / > CAS NO. 1C 314/47
타우린시그마-알드리치T0625
CAS 번호 107-35-7
수조 WBU 45Memmert2766
CAS 번호 -
자 륨 염 트

참고문헌

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