그린 커피 과일 (GF)을 사용하는 방법은 커피 베리 보러 (CBB)에 대한 살충제의 독성을 테스트하기 위해 개발되었습니다. 살충제 또는 독성 물질은 CBB 감염 전후에 소독 된 GF에 적용되었습니다. 곤충 사망률, 기피성 및 생식 능력은 다른 매개 변수 외에도 평가되었습니다.
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이 논문에서
요약
초록
커피 베리 보러 (CBB) Hypothenemus hampei를 치료하기 위해 살충제를 권장하기 전에 성인 곤충에 대한 이러한 살충제의 사망률과 혐오감 또는 생식 출력에 미치는 영향을 아는 것이 중요합니다. 그러나 현재 이용 가능한 방법은 성인 사망률만을 평가하여 다른 행동 방식을 가진 새로운 살충제의 선택을 제한합니다. 이 연구에서는 실험실 조건에서 CBB에 대한 다양한 효과를 확인하기 위해 다양한 실험 방법을 조사했습니다. 이를 위해 그린 커피 과일(GFs)을 수집하고 차아염소산나트륨 용액에 침지한 후 자외선을 조사하여 소독하였다. 병행하여, 콜로니로부터의 CBB 성인은 차아염소산나트륨 용액에 침지함으로써 소독되었다. 과일 보호 (preinfestation)를 평가하기 위해 과일을 플라스틱 상자에 넣고 살충제를 적용했습니다. 이어서, CBB 성인을 GF 당 두 개의 CBB의 비율로 방출하였다. GFs를 1, 7, 15 및 21일 후에 CBB 감염 및 생존을 평가하기 위해 조절된 조건 하에 방치하였다. CBB 감염 후(postinfestation) 후 살충제 효능을 평가하기 위해, CBB 성인은 21°C에서 3시간 동안 2:1 비율로 GFs를 방출하였다. 복부가 부분적으로 노출 된 CBB 성인을 보여주는 감염된 과일을 선택하여 96 웰 랙에 넣고 과일에 지루한 CBB를 직접 처리했습니다. 20 일 후, 과일을 해부하고, 각 과일 내부의 CBB 생물학적 단계를 기록하였다. GF는 CBB에 대한 독성, 화학 및 생물학적 살충제를 평가하기 위해 자연 조건을 모방하는 기질 역할을했습니다.
서론
커피 베리 보러 (CBB), Hypothenemus hampei는 콜롬비아에서 1988 년에 처음 발견되었으며 이후 커피 작물의 가장 중요한 해충 종이되었습니다. CBB 암컷은 출생 과일을 이미 수정 된 상태로 남겨두고 1,2에서 방출하는 휘발성 화학 물질에 의해 인도 된 새로운 과일을 찾습니다. 완전한 사이클은 25°C의 온도에서23일3일 이내에 성취된다. 주기는 창시자 여성이 씨앗을 관통하고 과일 내정자에 알을 낳는 것으로 시작됩니다. eclosed 애벌레는 씨앗을 먹습니다. 이 시점에서 과일이 해부되면 창립자 여성과 자손을 모두 관찰 할 수 있습니다. 14 일 후, 애벌레는 번데기가되고, 번데기 단계는 5 일간 지속됩니다. 성인 단계에서 암컷은 형제 자매들과 교배하고, 새로 수정 된 암컷은 손상된 과일에서 날아 다니며 새로운 커피 과일을 찾아 새로운 사이클4를 시작합니다.
침투 과정과 애벌레 먹이의 결과 모두 커피 씨앗을 손상시켜 커피 음료의 품질을 떨어 뜨리고 수익을 크게 줄입니다. 커피 농장에서 5 % 이상의 감염은 일반적으로 ....
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프로토콜
참고: 이 프로토콜은 실험실 조건에서 CBB에 대한 다양한 효과를 식별하는 다양한 방법을 다룹니다.
1. 과일 수집
- 아침 일찍 커피 농장에서 나무에서 개화 한 후 ~ 120-150 일의 발달 연령을 가진 GF를 선택하십시오.
2. 과일 소독20
- 약 300 GF를 실험실로 가져 오십시오. 균일 한 크기와 건강한 GF를 선택하고 peduncles를 철회하십시오.
- GFs를 비누 용액 (998 mL의 수돗물에 2 mL의 액체 식기 세척 비누)에 담근 다음 GF를 문질러 GF를 세척하십시오. 그런 다음 과일을 물로 헹구고 물을 세 번 바꿉니다.
- GFs를 0.5% 차아염소산나트륨 용액(수돗물 900mL에 100mL)에 담그고 110rpm으로 진탕기에서 15분 동안 교반한다. 그런 다음, GFs를 진탕기에서 교반하고 10분마다 물을 세 번 변화시켜 물로 헹구십시오.
- 멸균 종이 타월로 GF를 말리십시오.
- GF를 트레이(33cm x 25cm x 2cm)에 놓고 15분 동안 조사한 다음 GF를....
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결과
결과는 CBB 암컷이 과일을 인식하고 과일 표면의 특성과 방출 된 냄새에 따라 CBB 암컷이 21 °C에서 3 시간 이내에 과일에 침투하거나 보어지기 시작했다는 것을 보여주었습니다.
24 시간 후 및 시간이 지남에 따라 커피 과일에 적용될 때 CBB에 대한 살충제의 영향 (preinfestation procedure)은 그림 4에 나와 있습니다. 두 살충제 (5 % 및 6 %의 알칼로이드 에멀젼)는 20 일째에 높은 곤충 사망률을 유발했으며 (표 1) LSD 시험에 따르면 절대 대조군 (P < 0.001)과 비교하여 상당한 차이를 보였다. 감염되지 않은 건강한 씨앗의 비율 (표 1)과 관련하여 Dunnett의 5 % (P < 0.001)에서의 테스트에 따라 대조군과 살충제 그룹 간에도 차이가 있었다. 대조군에서는 씨앗의 37 %가 감염되지 않았으며 살충제 .......
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토론
이 프로토콜에서 곤충뿐만 아니라 과일의 소독은 중요한 단계입니다. 밭의 과일을 실험실에서 사용하면 미생물과 진드기가 표피 7,15,16에 존재하기 때문에 높은 오염과 탈수를 자주 보입니다. 따라서 소독되지 않은 과일이나 곤충을 사용하면 박테리아 나 곰팡이와 같은 미생물에 의한 오염으로 인해 곤충이 사망하여 생물 분석 결과를 방해하게됩니다. 이전에, Tapias et al.20은 카르벤다짐 및 벤잘코늄 클로라이드와 같은 과일 소독을 위한 다른 항미생물제를 평가하였다; 그러나 과일 소독은 좋았지 만 이러한 화합물은 CBB 또는 환경에 매우 독성이 강했습니다.
0.5% 차아염소산나트륨을 사용하여 과일을 용액에 30분 및 15분 동안 침지함으로써 평가하였다. 두 시간의 두 길이 .......
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공개 사항
저자 중 누구도 선언 할 이해 상충이 없습니다.
감사의 글
저자들은 콜롬비아 국립 커피 재배자 연맹, 곤충학과 (Diana Marcela Giraldo, Gloria Patricia Naranjo), Experiment Station Naranjal 및 Jhon Félix Trejos의 조수들에게 감사를 표합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 주둥이가 있는 비커, 낮은 형태 500mL | 브랜드 PP BR87826 | ||
| 벤치탑 셰이커 | New Brunswick Scientific Innova 4000 인큐베이터 셰이커 | ||
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| 후드; 수평 층류 스테이션 | Terra Universal | 분체 도장 강철, 1930 mm W x 1118 mm D x 1619 mm H, 120 V (https://www.terrauniversal.com/hood-horizontal-laminar-flow-station-9620-64a.html) | |
| 곤충 CBB | BIOCAFE( | http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html). | |
| 멀티 폴드 화이트 페이퍼 타월 | Familia | 73551 | |
| Preval 스프레이 유닛 | Preval Merck | Z365556-1KT | https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/sigma/z365556?gclid=Cj0KCQiAweaNBhDEARIsAJ 5hwbfZOy1TWGj6huatFtRQt AzOyHe5-oBiKnOUK2T1exuuk WwJLdvxkvsaAjoYEALw_wcB |
| Reversible Racks 96-Well | heathrowscientific | HEA2345A | https://www.heathrowscientific.com/reversible-racks-96-well-i-hea2345a |
| 메스 블레이드 N 11 | Merck | S2771-100EA | |
| 메스는 N3 | Merck | S2896-1EA | |
| 차염화나트륨 | 클로록스 회사 | 클로록스 | |
| 스테레오 현미경 | 자이스 | 스테미 508 | https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/stereo-zoom-microscopes/stemi-508.html |
참고문헌
- Mendesil, E., et al. Semiochemicals used in host location by the coffee berry borer, Hypothenemus hampei. Journal of Chemical Ecology. 35 (8), 944-950 (2009).
- Jaramillo, J., et al. Coffee berry borer joins bark beetles in coffee klatch. PLoS....
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