방법 논문

철-탄수화물 복합체의 입자 크기 측정을 위한 동적 광산란 분석

DOI:

10.3791/63820

⸱

2023년 7월 7일

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Vifor Pharma Group, Vifor Pharma Management Ltd, 2Section of Pharmaceutical Sciences, School of Pharmaceutical Sciences of Western Switzerland (ISPSO), University of Geneva

이 논문에서

요약

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동적 광 산란(DLS)은 정맥내 투여된 철-탄수화물 복합체의 입자 크기 및 분포를 평가하기 위한 적절한 분석법으로 등장했습니다. 그러나 프로토콜은 표준화가 부족하고 분석된 각 철-탄수화물 복합체에 대해 수정해야 합니다. 본 프로토콜은 철 슈크로스의 분석을 위한 적용 및 특별한 고려사항을 기술한다.

초록

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정맥 내 투여되는 철-탄수화물 나노 입자 복합체는 철 결핍을 치료하는 데 널리 사용됩니다. 이 부류는 구조적으로 이질적인 여러 나노 입자 복합체를 포함하며, 이는 이러한 제제를 물리 화학적으로 특성화하는 데 사용할 수있는 방법론에 필요한 조건에 대해 다양한 감도를 나타냅니다. 현재, 철 - 탄수화물 복합체의 중요한 품질 특성은 완전히 확립되지 않았다. 동적 광 산란(DLS)은 온전한 입자 크기와 분포를 결정하는 기본적인 방법으로 부상했습니다. 그러나 실험실 전반에 걸친 방법론의 표준화, 개별 철-탄수화물 제품에 필요한 특정 수정 및 크기 분포를 가장 잘 설명할 수 있는 방법에 관한 과제는 여전히 남아 있습니다. 중요한 것은 사용되는 희석제와 연속 희석액이 표준화되어야 한다는 것입니다. 시료 전처리 및 데이터 보고에 대한 접근 방식의 큰 차이로 인해 철-탄수화물 제제 비교를 위한 DLS의 사용이 제한됩니다. 여기에서 우리는 Z-평균 및 다분산 지수를 사용하여 철-탄수화물 복합체인 철 자당의 크기와 크기 분포를 측정하기 위한 강력하고 쉽게 재현할 수 있는 프로토콜을 자세히 설명합니다.

서론

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철 자당(IS)은 다핵 철-옥시수산화물 코어와 자당의 복합체로 구성된 나노입자로 구성된 콜로이드 용액입니다. IS는 경구용 철분 보충을 용납하지 않거나 경구용 철분이 효과적이지 않은 다양한 기저 질환 상태의 환자에서 철분 결핍을 치료하는 데 널리 사용됩니다1. IS는 미국 식품의약국(FDA)에서 정의한 복합 약물의 약물 등급에 속하며, 생물학적 제제에 상응하는 복잡한 화학적 성질을 가진 약물 등급입니다2. 복합 의약품의 규제 평가는 후속 복합 약물을 정확하게 비교하기 위해 추가적인 직교 물리화학적 방법 및/또는 전임상 또는 임상 연구가 필요할 수 있습니다 3,4. 여러 연구에서 IS와 후속 IS 제품의 사용이 동일한 임상 결과를 나타내지 않는다고 보고했기 때문에 이는 중요합니다. 이는 IS 생성물 5,6 사이의 물리 화학적 특성의 차이를 검출하는 데 적합한 새로운 직교 특성화 기술의 사용의 중요성을 강조한다.

입자 크기가 옵소닌화의 속도와 정도에 중요....

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프로토콜

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1. 기계 작동

  1. 기계 및 소프트웨어 시작
    참고: 보충 그림 S1A-D 는 기계 및 소프트웨어 시작 단계를 설명합니다.
    1. 측정을 시작하기 최소 30분 전에 기기를 켠 다음 PC를 시작하십시오.
    2. 기기 소프트웨어 아이콘을 두 번 클릭하여 프로그램을 시작합니다.
    3. 로그인 창에 사용자 이름과 비밀번호를 입력합니다. 각 사용자에게 고유한 계정이 있는지 확인합니다.
    4. 오른쪽 하단 모서리에 있는 세 개의 검은색 막대가 모두 녹색으로 켜져 장치가 작동할 준비가 되었음을 나타낼 때까지 기다립니다.
    5. 장기간 사용하지 않는 경우 사용자가 자동으로 로그아웃되면 보안에서 로그인을 클릭하고 암호를 다시 입력합니다.
  2. 측정 파일 만들기
    알림: 새 측정 file 각 측정일이 시작될 때 생성됩니다. 모든 측정값이 나열되고 측정 파일에 저장됩니다. 이 절차에 대한 자세한 내용은 보충 그림 S2A-B를 참조하십시오.
    1. File(파일) | 새로 만들기 | 측정 ....

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결과

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설명된 방법은 다양한 조건에서 테스트 용액을 측정하는 ICH Q2(R1)20에 따라 검증되었습니다. 정밀도는 Z-평균 크기에 대해 0.5% RSD에 불과한 반면, PDI에 대해 최대 3.5% RSD가 계산되었습니다. 다른 분석가와 일의 평균 결과는 Z-평균 크기의 경우 0.4%, PDI의 경우 1.5%만 차이가 났습니다. 통계는 두 명의 분석가가 다양한 날짜에 수행한 12개의 측정에서 계산되었습니다. 50%-200% 범위의 테스트 농도 변화나 냉장 조건에서 최대 5일 동안 테스트 용액을 보관하는 것은 최종 결과에 영향을 미치지 않았습니다.

분석된 매개변수
Z-평균 크기
유체역학적 직경은 Z-평균 입자 크기로 주어지며, 이를 결정하는 방법은 ISO 22412:201717에 정의되어 있습니다. Z-평균 크기는 누적 평균이라고도 .......

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토론

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DLS는 약물 개발 및 규제 평가에 응용하기 위해 나노 입자의 크기와 크기 분포를 결정하기 위한 기본적인 분석법이 되었습니다. DLS 기술의 발전에도 불구하고, 특히 콜로이드 용액의 철-탄수화물 복합체와 관련된 희석제 선택 및 샘플 준비와 관련하여 방법론적 문제가 여전히 존재합니다. 중요하게도, 철-탄수화물 나노 의약품에 대한 DLS 방법은 생물학적 환경 (예 : 혈장)에서 아직 광범위하게 연구되지 않았습니다 22. 따라서 희석제 선택에 따라 모범 사례 프로토콜의 조화에 대한 중요한 필요성이 여전히 남아 있습니다. 희석제의 선택은 중요한데, 정제수와 등장성 식염수를 사용하는 것은 콜로이드 현탁액의 안정성에 영향을 미칠 수 있기 때문이다16.

또한 철-탄수화물 복합체는 어둡고 불투명한 용액을 갖는 문제를 완화하기 위해 처방 정보 권장 사항 이하로 희석되어서는 안 된다는 점에 유의해야 합니다. 과도.......

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공개 사항

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M.B., E.P., M.W. 및 A.B.는 Vifor Pharma의 직원입니다. G.B.는 Vifor Pharma의 컨설턴트입니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
Equipment
Zetasizer Nano ZSMalvernNA는 Zetasizer 소프트웨어 7.12, 헬륨 네온 레이저 (633 nm, 최대 4 mW) 및 173° 후방 산란 기하학
재료
일회용 플라스틱 큐벳을
LLG-일회용 플라스틱 셀LLG 실험기구LLG-Kü 베텐, 마크로, PS; 주문 번호 9.406011
저입자 물 ( 갓 탈이온화 및 여과된 (기공 크기 0.2 μ m) 물 권장).
마이크로리터 피펫
Venofer 100 mg/5 mLVifor Pharma
부피 플라스크 25 mL
NanosphereThermo3020A입자 표준
Software
Origin Pro v.8.5 오리진 랩 코퍼레이션
갖추고 있습니다.

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Auerbach, M., Gafter-Gvili, A., Macdougall, I. C. Intravenous iron: A framework for changing the management of iron deficiency. Lancet Haematology. 7 (4), e342-e350 (2020).
  2. Generic drugs: FDA should make public its plans to issue and revise guidance on nonbiological complex drugs. US Government Accountability Office. , Available from: https://www.gao.gov/products/gao-1....

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