현재 프로토콜은 클로르헥시딘 글루코네이트(CG) 유발 복막 섬유증의 복막 투석(PD) 마우스 모델을 설정합니다. 현재 모델은 다른 PD 동물 모델에 비해 간단하고 사용하기 쉽습니다.
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방법 논문
클로르헥시딘 글루코네이트 유발 복막 손상의 마우스 모델
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
복막 섬유증은 복막 투석(PD)의 중요한 합병증입니다. 이 문제를 조사하고 해결하기 위해서는 PD의 적절한 동물 모델이 필요합니다. 본 프로토콜은 PD 환자의 상태를 모방하는 클로르헥시딘 글루코네이트(CG) 유도 복막 섬유증 모델을 설정합니다. 복막 섬유증은 수컷 C57BL/6 마우스에서 총 9회 동안 3주 동안 15% 에탄올에 0.1% CG를 복강내 주사하여(격일로 투여) 유도했습니다. 그런 다음 22일째에 복막 기능 테스트를 수행했습니다. 생쥐를 희생시킨 후, 복벽의 정수리 복막과 간의 내장 복막을 적출 하였다. 그들은 Masson의 삼색 염색 후 현미경으로 분석했을 때 더 두껍고 섬유질적이었습니다. 한외여과율은 감소하였고, 포도당 질량수송은 CG에 의해 유도된 복막 투과성의 증가를 나타내었다. 이렇게 확립된 PD 모델은 PD 기술을 개선하고, 투석 효능을 개선하고, 환자 생존을 연장하는 데 응용할 수 있다.
서론
복막 투석(PD)은 일종의 신대체 요법입니다. 그러나 PD는 해결할 수 없는 문제가 있다. 예를 들어, 장기간의 PD 치료는 복막 손상을 야기할 수 있고, 결국 한외여과 실패 및 치료 중단을 초래할 수 있다(1,2,3,4,5,6). 복막 섬유증은 가장 심각한 합병증중 하나입니다 7,8. 복막 섬유증은 간질 내 세포외 기질의 침착 및 축적, 복막의 신혈관신생 및 혈관병증을 특징으로 한다 9,10.
이러한 복막 변화의 주요 원인은 재발성 복막염 및 투석액의 비생체적합성이며, 이는 고삼투압, 고포도당, 낮은 pH 및 포도당 분해 생성물 축적이다11,12
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프로토콜
모든 마우스 실험은 E-DA Hospital/I-Shou University의 Laboratory Animal Center의 승인을 받았으며 "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals"(NRC, USA 2011)에 따라 처리되었습니다. 7-8주령의 수컷 C57BL/6 마우스를 본 연구에 사용하였다.
1. 화학 약품 준비
- 0.1% 클로르헥시딘 글루코네이트(CG, 재료 표 참조)를 15% 에탄올에 희석하여 화학적 자극제를 준비합니다.
2. 동물 치료
- 세 마리의 마우스를 대조군으로 지정합니다. 0.9% 생리식염수(NS) 1mL/kg을 3주 동안 격일로 총 9회 복강주사(ip)한다.
- 복막 섬유증 그룹에 3 마리의 마우스를 할당하십시오. 12.5μL/g 체중의 용량으로 15% 에탄올(1.1단계)에 0.1% CG를 주사하여 클로르헥시딘 글루코네이트(CG)를 사용하여 복막 섬유증을 유도합니다. 이것을 3 주 동안 격일로 총 9 번 수행하십시오.
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결과
그림 1A,B에서 복벽의 정수리 복막은 Masson의 삼색 염색17에서 현저하게 두껍고 섬유화되었으며, 이는 CG 노출 그룹에서 복막 섬유증이 대조군 식염수 그룹(NS)보다 더 심각함을 나타냅니다. 그림 2A,B에서 간 표면의 내장 복막도 현저하게 두껍고 섬유화되어 CG 노출 그룹에서 복막 섬유증이 대조군 식염수군(NS)보다 더 심하다는 것을 증명합니다. 도 3A에서, 한외여과율은 CG 군에서 감소하고, 글루코스 질량수송은 CG 유도군에서 복막 투과성이 증가함을 나타내었다(도 3B).
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토론
본 연구에서는 마우스 PD 모델을 i.p. CG를 주사하고, 그 결과 이 모델에서 복막 섬유증과 기능 저하가 나타나 PD 환자의 상태를 모방하였다.
프로토콜에는 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 첫째, CG 또는 NS의 i.p. 주사를 수행하기 위해서는 천자로 인한 복강 내 장기 손상을 방지하기 위해 집게를 사용하여 마우스의 복벽 피부를 집어 올려야 합니다. 둘째, 조직학적 분석을 위해 복벽의 복막을 채취하는 동안 i.p. 주사로 손상된 부위는 피해야 합니다.
복막 섬유증의 여러 실험 동물 모델 중 가장 일반적인 것은 사용 편의성과 적응성 때문에 CG 모델입니다. Suga et al.20 은 1995년에 CG 유도 복막 섬유증 쥐 모델을 처음으로 보고했습니다. i.p. 2mL의 식염수에 용해된 0.1% CG와 15% 에탄올을 26일 동안 매일 주사했습니다. IshiI et
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
우리는 Shin-Han Tseng에게 비판적인 토론과 연구의 부분적인 실행에 진심으로 감사드립니다. 이 연구는 E-DA 병원 연구 재단과 대만 국립 청쿵 대학교의 EDAHP110003 및 NCKUEDA110002의 지원을 받았습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 0.9 % 일반 식염수 | Y F CHEMICAL CORP., 신베이시, 대만 | - | |
| 10 % 중성 완충 포르말린 | 대만 Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan | 00002A | |
| 자동 생화학 분석기 | Hitachi Ltd., Tokyo, Japan | 농도 측정을위한 | Labospect 시리즈 008 |
| 클로르헥시딘 디 글루 코네이트 용액, H2에서 20 %O | Sigma-Aldrich, MO, USA | C9394 | 주입용 15% 에탄올로 0.1%로 희석 |
| 에탄올 | Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA | BAKR8006-05 | 작업 농축을 위해 생리 식염수로 15%로 희석 |
| 포도당(Dianeal) | Baxter International, Inc., IL, USA | FNB9896 | 상업용 투석 용액(4.25%) |
| GraphPad Prism 8.0 | GraphPad 소프트웨어, Inc., CA, US | ||
| L-type Glu 2 assay | FUJIFILM Wako, Japan | 461-32403 | |
| Xylazine 20 | Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, | Taiwan-Zoletil | |
| 50 | Virbac Laboratories, Carros, France | - |
참고문헌
- Han, S. H., et al. Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center. Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).
- Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T.
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재인쇄 및 허가
