본 프로토콜은 차밭에서 PA를 생산하는 잡초의 차 샘플에서 피롤리지딘 알칼로이드(PA)의 오염을 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
독성 피롤리지딘 알칼로이드(PA)는 차 샘플에서 발견되어 인체 건강에 위협이 됩니다. 그러나 차 샘플에서 PA 오염의 원인과 경로는 불분명하다. 이 연구에서는 UPLC-MS/MS와 결합된 흡착 방법을 개발하여 잡초 Ageratum conyzoides L., A. conyzoides rhizospheric 토양, 신선한 찻잎 및 말린 차 샘플에서 15개의 PA를 측정했습니다. 평균 회수율은 78%-111% 범위였으며 상대 표준 편차는 0.33%-14.8%였습니다. 중국 안후이성의 진자이 차밭에서 15쌍의 A. conyzoides 및 A. conyzoides 근권 토양 샘플과 60개의 신선한 찻잎 샘플을 수집하여 15개의 PA에 대해 분석했습니다. 중간중간-N-옥사이드(ImNO)와 세네시오닌(Sn)을 제외하고 신선한 찻잎에서 15개의 PA가 모두 검출된 것은 아닙니다. ImNO(34.7μg/kg)의 함량은 Sn(9.69μg/kg)보다 컸습니다. 또한, ImNO와 Sn은 모두 차 나무의 어린 잎에 집중되어 있었고, 그 함량은 오래된 잎에서 더 낮았다. 결과는 차의 PA가 차밭에서 PA를 생산하는 잡초-토양-신선한 찻잎의 경로를 통해 옮겨진 것으로 나타났습니다.
서론
2차 대사산물인 피롤리지딘 알칼로이드(PA)는 초식동물, 곤충, 병원균으로부터 식물을 보호한다 1,2. 지금까지 전 세계적으로 6,000종 이상의 식물 종에서 서로 다른 구조를 가진 660개 이상의 PA와 PA-N-산화물(PANO)이 발견되었습니다 3,4. PA 생산 식물은 주로 국화과, 보라기과, 파바과, 아포시나과에서 발견됩니다 5,6. PA는 불안정한 디하이드로피롤리지딘 알칼로이드로 쉽게 산화되는데, 이는 강한 친전자성을 가지며 DNA 및 단백질과 같은 친핵체를 공격하여 간세포 괴사, 정맥 폐색, 간경변, 복수 및 기타 증상을 유발할 수 있습니다 7,8. PA 독성의 주요 표적 기관은 간입니다. PA는 또한 폐, 신장 및 기타 장기 독성과 돌연변이 유발 성, 발암 성 및 발달 독성을 유발할 수 있습니다
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프로토콜
본 연구를 위해 다음과 같은 잡초 종을 수집하였다: Ludwigia prostrata Roxb., Murdannia triquetra (Wall. ex C. B. Clarke) Bruckn., Ageratum conyzoides L., Chenopodium ambrosioides, Trachelospermum jasminoide (L.) Lem., Ageratum conyzoides L., Emilia sonchifolia (L.) DC, Ageratum conyzoides L. 및 Crassocephalum crepidioides (벤스.) S. 무어. 신선한 찻잎은 다양한 Longjing 43# 차나무에서 채취했으며, 건조된 차 샘플은 녹차 제조 공정에 따라 가공된 시판되는 차였습니다(재료 표 참조).
1. 시료 채취
- 40개의 실제 샘플을 수집합니다.
- 여러 차밭에서 무작위로 잡초 10개, 흙 10개, 신선한 찻잎 10개를 수집하세요.
참고: 본 연구를 위해 토양을 20cm 깊이에서....
- 여러 차밭에서 무작위로 잡초 10개, 흙 10개, 신선한 찻잎 10개를 수집하세요.
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결과
말린 차 시료, 신선한 찻잎, 잡초 및 토양에서 15PA의 최적화된 흡착제 정제 및 분석 방법을 확립하고 SPE 카트리지를 사용하여 일반적으로 사용되는 정제 방법과 비교했습니다. 그 결과 SPE 카트리지를 사용한 말린 차 샘플, 잡초 및 신선한 찻잎에서 15개의 PA의 회수율은 72%-120%인 반면 흡착제 정제를 사용한 것은 78%-98%인 것으로 나타났습니다(그림 1). 흡착제 정화를 사용한 토양에서 15개의 PA의 회수율은 79%-111%였습니다(그림 1). 40개의 실제 샘플을 무작위로 수집하여 두 가지 클린업 방법을 비교하기 위해 PA의 함량을 검출했습니다(보충 표 1-7). 헬리오트린(He)은 1.3-22 μg/kg의 함량으로 흡착법을 사용하여 10개의 건조 차 샘플 모두에서 검출된 반면, 1.8-24.6 μg/kg의 함량.......
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토론
현재 연구는 차 샘플에서 PA의 오염 경로와 출처를 탐색하고 차 식물의 다른 부분에서 PA의 분포를 탐색하는 효과적이고 민감한 방법을 개발하도록 설계되었습니다. 그러나 이 연구에서는 크로마토그래피 컬럼에서 15개의 PA만이 성공적으로 분리되었으며, 이는 식물 종 3,4의 많은 수의 알칼로이드에 비해 매우 적은 수입니다. 이것은 컬럼 자체의 패킹 특성뿐만 아니라 검사된 차 샘플의 복잡한 매트릭스와도 관련이 있습니다. 따라서 다중 PA를 검출하기 위한 더 나은 분리 및 정제 방법은 여전히 추가 탐색이 필요합니다.
SPE 카트리지 및 흡착제 방법은 다양한 샘플 매트릭스에서 다중 PA를 검출하기 위해 적용되었지만 차의 복잡한 매트릭스에서는 흡착 방법이 보고되지 않았습니다24. 따라서 이 연구에서는 GCB:PSA:C18(10mg:20mg:15.......
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공개 사항
저자는 공개 할 것이 없습니다.
감사의 글
이 작업은 중국 국립 자연 과학 재단 (32102244), 국가 농산물 품질 및 안전 및 위험 평가 프로젝트 (GJFP2021001), 안후이 성 자연 과학 재단 (19252002) 및 USDA (HAW05020H)의 지원을 받았습니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 아세토니트릴 (99.9%) | Tedia Company, Inc. | 21115197 | CAS No:75-05-8 |
| 암모니아(25%-28%) | Wuxi Zhanwang 화학 시약 Co., Ltd. | 181210 | CAS No:1336-21-6 |
| Ammonium formate (97.0%) | Anpel Laboratory Technoiogies (shanghai)G0860050 | CAS No:540-69-2 | |
| Carbon-GCB | CNW | B7760030 | 120-400 MESH, 10g. 상자당 |
| 원심분리기 Z 36 HK | HERMLE | Z36HK | 30000 rpm(최소:10rpm), 치수(W x H x D): 71.5 cm× 42cm &시간; 51cm |
| 시판차 제품 | Lvming, Qingshan, Luyuchun, Changling, Huixing, Wuyunjian, Heshengchun | loose tea | 녹차 |
| Europine N-oxid (EuNO) (98.0%) | BioCrick | 323256 | CAS No:65582-53-8 |
| Europine (Eu) (98.0%) | BioCrick | 98222 | CAS No:570-19-4 |
| Formate (98.0%) | Aladdin | E2022005 | CAS No:64-18-6 |
| HC-C18 | CNW | D2110060 | 40-63 μ m,100g.per |
| box 헬리오트린(He) (98.0%) | BioCrick | 906426 | CAS No:303-33-3 |
| Heliotrine-N-oxide (HeNO) (98.0%) | BioCrick | 22581 | CAS No:6209-65-0 |
| 고속 원심분리기 TG16-WS | cence | 203158000 | Max:16000 r/min, 330 × 390 × 300 mm (L × W &타임스; H), 수용량: 6 × 50 mL |
| HSS T3 컬럼 | Waters | 186004976 | ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 × 100 mm 1.8 μ m) |
| 인터메딘(Im) (98.0%) | BioCrick | 114843 | CAS No:10285-06-0 |
| 인터메딘-N-옥사이드(ImNO) (98.0%) | BioCrick | 340066 | CAS No:95462-14-9 |
| 자코빈(Jb) (98.0%) | BioCrick | 132282048 | CAS No:6870-67-3 |
| 자코빈-N-옥사이드(JbNO) (98.0%) | ChemFaces | CFN00461 | CAS No:38710-25-7 |
| 메틸알코올 (99.9%) | 테디아 컴퍼니, Inc. | 21115100 | CAS No:67-56-1 |
| PSA | 아겔라 | P19-00833 | 40-60 μ m, 60 Å 100g.per |
| box Retrorsine (Re) (98.0%) | BioCrick | 5281743 | CAS No:480-54-6 |
| Retrorsine-N-oxide (ReNO) (98.0%) | BioCrick | 5281734 | CAS No:15503-86-3 |
| Senecionine (Sc) (98.0%) | BioCrick | 5280906 | CAS No:130-01-8 |
| Senecionine-N-oxide (ScNO) (98.0%) | BioCrick | 5380876 | CAS No:13268-67-2 |
| Seneciphylline N-oxid (SpNO) (98.0%) | BioCrick | 6442619 | CAS No:38710-26-8 |
| Seneciphylline (Sp) (98.0%) | BioCrick | 5281750 | CAS No:480-81-9 |
| Senkirkine (Sk) (98.0%) | BioCrick | 5281752 | CAS No:2318-18-5 |
| SPE PCX | Agilent Technologies | 12108206 | 양이온 혼합 모드, 6 mL |
| 황산(97%) | Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd. | 1003019 | CAS No:7664-93-9 |
| Trisodium citrate | Sinpharm 화학 시약 Co., Ltd. | 20121009 | CAS No:6132-04-3 |
| 초음파 세척기 | Supmile | KQ-600B | 내부 슬롯 크기: 500 > 300 > 150 mm; 용량: 22.5 L |
| UPLC-xevoTQMS | Waters | ZPLYY-003 | 트리플 4단계 로드 질량 분석기, Waters Alliance 2695/Waters ACQUITY UPLC 액상 시스템 |
| 수조 온도조절기 발진기 | Guoyu 기기 | SHY-2AHS | 진동 시간: 60-300회/분, 일정한 온도 범위: 실온 100°C; 씨 |
참고문헌
- Schramm, S., Kohler, N., Rozhon, W. Pyrrolizidine alkaloids: Biosynthesis, biological activities and occurrence in crop plants. Molecules. 24 (3), 498(2019).
- EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). Scientific opinion on pyrrolizidine alkaloids in fo....
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