이 프로토콜은 전체 및 조직학적 변화와 상관관계가 있는 초음파 영상을 사용하여 자궁내막암의 유도성 마우스 모델에서 시간 경과에 따른 형태학적 변화의 진행을 모니터링하는 방법을 설명합니다.
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방법 논문
마우스에서 종양 억제인자 Arid1a 및 Pten 의 Pax8 지시 결실에서 자궁내막암 진행의 비침습적 초음파 평가
이 논문에서
요약
초록
자궁암은 이러한 모델에서 취급 및 유전자 조작의 용이성으로 인해 생쥐에서 연구될 수 있습니다. 그러나 이러한 연구는 종종 다른 코호트에서 여러 시점에서 안락사된 동물의 사후 병리를 평가하는 것으로 제한되며, 이는 연구에 필요한 마우스의 수를 증가시킵니다. 종단 연구에서 이미징 마우스는 개별 동물의 질병 진행을 추적하여 필요한 마우스의 수를 줄일 수 있습니다. 초음파 기술의 발전으로 조직의 마이크로미터 수준의 변화를 감지할 수 있게 되었습니다. 초음파는 난소의 난포 성숙과 이종 이식 성장을 연구하는 데 사용되었지만 마우스 자궁의 형태학적 변화에는 적용되지 않았습니다. 이 프로토콜은 유도된 자궁내막암 마우스 모델에서 병리학과 생체 내 이미징 비교의 병치를 조사합니다. 초음파로 관찰된 특징은 육안적 병리학 및 조직학에서 볼 수 있는 변화의 정도와 일치했습니다. 초음파는 관찰 된 병리를 매우 예측하는 것으로 밝혀졌으며, 생쥐의 암과 같은 자궁 질환의 종단 연구에 초음파 검사의 통합을 지원합니다.
서론
마우스는 생식 장애에 대한 가장 중요한 동물 모델 중 하나이다 1,2,3. 난소암과 자궁암의 여러 유전자 변형 또는 유도 설치류 모델이 있습니다. 이러한 연구는 일반적으로 형태학적 및 병리학적 변화의 종단적 경향을 포착하기 위해 서로 다른 시점에서 안락사된 여러 코호트에 의존합니다. 이것은 개별 마우스에서 암 발병에 대한 지속적인 데이터를 획득하는 능력을 방지합니다. 추가적으로, 개별 마우스의 질병 진행 상태를 알지 못하면, 개입 연구는 특정 동물에서 진행을 검출하기 위한 개별 역치보다는 미리 결정된 시점과 이전 코호트의 평균 소견을 기반으로 한다 4,5. 따라서 신약 또는 화합물 테스트를 위한 전임상 모델을 용이하게 하고 병리학에 대한 이해를 가속화하는 동시에 엄격함과 재현성을 높이기 위해 살아있는 동물에서 종단적 평가를 허용하는 이미징 접근법이 필요합니다6.
초음파 영상(US)은 다른 영상 방법에 비해 상대적으로 쉽고 저렴하며 ....
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프로토콜
마우스를 포함하는 모든 절차 및 실험은 존스 홉킨스 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인된 프로토콜에 따라 수행되었다. 모든 절차에 대해 장갑과 일회용 격리 가운을 포함하여 적절한 PPE를 착용했습니다. 날카로운 물건을 취급할 때 예방 조치를 취했으며, 사용 직후 빨간색 상자 날카로운 물건 용기에 적절하게 폐기했습니다. 이 프로토콜에 사용된 모든 재료 및 장비에 대한 자세한 내용은 재료 표를 참조하십시오.
1. 독시사이클린을 이용한 iPAD(inducible Pten, Arid1a double deletion) 마우스에서 자궁내막암 유도
- 앞서 설명한 대로 혼합 유전적 배경(129S, BALB/C, C57BL/6)에서 10마리의 Pax8-Cre-Arid1a-Pten 이중 결실(iPAD) 형질전환 마우스(그림 1)를 유지합니다14.
- 독시사이클린 치료 전에 각 마우스의 난소, 난관 및 자궁의 기본 초음파(2D) 이미지를 수집합니다.
- 유전자 결실을 유도하기 위해 7-8주령부터 최소 2주 동안 ....
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결과
Pax8-Cre-Arid1a-Pten 이중 결실(iPAD) 형질전환 마우스는 이전에 기술된 바와 같이 혼합 유전적 배경(129S, BALB/C, C57BL/6)에서 유지되었다14. 마우스는 모두 Cre 재조합 효소를 유도하기 위해 2 주 동안 독시사이클린 사료를 공급 받았다. 우리 그룹의 이전 연구에서 독시사이클린은 위관 영양14에 의해 투여되었습니다. 그러나 이 현재 연구에서 독시사이클린 사료 유도 방법은 효율적으로 작동하여 마우스의 위관영양 스트레스를 감소시켰습니다. 독시사이클린 투여 방법이 자궁과 같은 Pax8 발현 세포에서 종양 억제 인자 (Arid1a 및 Pten)에 대한 DNA를 절제하는 데 필요한 Cre 재조합 효소 발현을 유도하는 데 적합한지 확인하는 것이 중요합니다. ARID1a 및 pTEN14에 대한 항체를 사용한 면역조.......
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토론
이 프로토콜은 생쥐의 자궁 내 선암 진행에서 자궁 형태학적 변화를 평가하기 위한 초음파의 유용성을 조사합니다. 본 연구에서는 생쥐에서 자궁내막암의 유도를 종단으로 추적하여 초음파로 검출된 해부학적 세부 사항이 육안적 및 조직학적 병리의 지표임을 밝혀냈다. 이것은 생쥐에서 자궁암의 진행을 추적하기 위해 여러 시점에서 초음파로 모니터링되는 더 적은 수의 생쥐를 대상으로 종단 연구를 사용할 수 있는 문을 열어줍니다. 이 세로 검출은 레일 시스템 초음파 장비를 사용하지 않고 휴대용 프로브를 사용하여 수행되었습니다. 사용되는 고주파 프로브(변환기)는 널리 사용 가능하므로 전 세계 여러 기관에서 이 접근 방식을 재현할 수 있습니다. 프로토콜의 중요한 단계에는 실험에 필요한 분해능 수준에 맞는 올바른 프로브를 사용하고 초음파 전에 이미징을 위해 마우스를 준비하는 것이 포함됩니다.
마우스를 준비하는 중요한 단계는 연구 영역에서 모든 모발을 제거하고 복강에 체액을 주입하는 것입니다. 피부에 남.......
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공개 사항
저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.
감사의 글
NCI 난소암 포자 프로그램 P50CA228991, 박사후 과정 교육 프로그램 5T32OD011089 및 존스 홉킨스 대학의 Richard W. TeLinde Endowment의 자금 지원에 감사드립니다. 이 프로젝트는 또한 일본 사립 학교 진흥 및 상호 원조 공사 (Promotion and Mutual Aid Corporation for Private Schools of Japan)의 사립 고등 교육 기관에 대한 경상 지출에 대한 보조금으로 부분적으로 자금을 조달 받았다.
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재료
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| 10 mL injectable 0.9% NaCl | Hospira, Inc | RL-7302 | 등장성 유체 |
| 흡수 패드 | Daigger | EF8313 | 흡수 패드 |
| 마취 유도 챔버 | Harvard Apparatus | 75-2029 | 인덕션 챔버 |
| 마취 흡수 키트(흡수기 캐니스터, 홀더, 튜빙 및 어댑터 포함 | CWE, Inc | 13-20000 | 노즈 콘 및 튜빙 |
| Aquasonic Clear 초음파 젤 (0.25 리터) | Parker Laboratoies | 08-03 | 초음파 젤 |
| BD Plastipak 3 mL 주사기 | BD Biosciences | 309657 | 사기 |
| F / 공기 청소부 숯 용기 | OMNICON | 80120 | 마취 용 청소 시스템 |
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| MX550S, 25-55MHz 변환기, 15mm, Linear | VisualSonics | MX550S | 초음파 변환기(프로브) |
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참고문헌
- Ajayi, A. F., Akhigbe, R. E. Staging of the estrous cycle and induction of estrus in experimental rodents: an update. Fertility Research and Practice. 6, 5(2020).
- Kim, S. W., Kim, Y. Y., Kim, H., Ku, S. Y. Animal models closer to intr....
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