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방법 논문

Mouse Hippocampus and Prefrontal Cortex의 Dual Extracellular Recordings in the Mouse Hippocampus and Prefrontal Cortex(생쥐 해마와 전전두엽 피질의 이중 세포외 기록)

2.6K 조회수

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DOI:

10.3791/66003

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2024년 2월 16일

 ,  ,  , 

이 논문에서

요약

이 프로토콜은 국소 자기장 전위를 기록하고 쥐 해마와 전전두엽 피질의 정보 흐름을 조사하기 위해 맞춤형으로 설계된 기록 장치와 전극의 사용을 간략하게 설명합니다.

초록

국소 전위(LFP)를 기록하는 기술은 국소화된 신경 세포 집단의 전기적 활동을 측정하는 데 사용되는 전기생리학적 방법입니다. 이는 인지 연구, 특히 해마와 전전두엽 피질과 같은 뇌 영역에서 중요한 도구 역할을 합니다. 이러한 영역 간의 이중 LFP 기록은 지역 간 신호 통신을 탐색할 수 있게 해주기 때문에 특히 흥미롭습니다. 그러나, 이러한 녹음을 수행하는 방법은 거의 설명되지 않으며, 대부분의 상용 기록 장치는 비싸거나 특정 실험 설계를 수용하기에 적응성이 부족합니다. 이 연구는 항정신병 약물 및 칼륨 채널 조절제가 이러한 영역의 LFP 특성에 미치는 영향을 조사하기 위해 마우스 해마와 전전두엽 피질에서 이중 전극 LFP 기록을 수행하기 위한 포괄적인 프로토콜을 제시합니다. 이 기술을 사용하면 각 뇌 영역 내의 전력 스펙트럼 및 둘 사이의 일관성을 포함한 LFP 특성을 측정할 수 있습니다. 또한 이러한 실험을 위해 저비용의 맞춤형 녹음 장치가 개발되었습니다. 요약하면, 이 프로토콜은 서로 다른 뇌 영역에서 높은 신호 대 잡음비로 신호를 기록하는 수단을 제공하여 뇌 내 지역 간 정보 통신의 조사를 용이하게 합니다.

서론

국소자기전위(LFP)는 세포외 공간에서 기록된 전기적 활동을 말하며, 국소적인 뉴런 그룹의 집합적 활동을 반영합니다. 1Hz의 느린 파동에서 100Hz 또는 200Hz의 빠른 진동에 이르기까지 다양한 범위의 주파수를 나타냅니다. 특정 주파수 대역은 학습, 기억 및 의사 결정과 같은 인지 기능과 관련이 있습니다 1,2. LFP 특성의 변화는 치매 및 정신 분열증을 포함한 다양한 신경 장애의 바이오마커로 사용되었습니다 3,4. LFP 기록을 분석하면 이러한 상태 및 잠재적인 치료 전략과 관련된 근본적인 병리학적 메커니즘에 대한 귀중한 통찰력을 제공할 수 있습니다.

이중 LFP 기록은 두 개의 특정 뇌 영역 내부 및 두 영역 사이의 국부적인 전기 활동을 측정하는 데 사용되는 기술입니다. 이 기술은 서로 다른 뇌 영역 내에서 그리고 서로 다른 뇌 영역 사이에서 발생하는 복잡한 신경 역학 및 신호 통신을 조사할 수 있는 귀중한 기회를 제공합니다. 이전 연구에 따르면 개별 뇌 영역의 신경 세포 특성의 변화를 감지하는 것은 복잡할 수 있지만 지역 ....

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프로토콜

이 연구는 과학적 목적을 위한 동물 관리 및 사용에 대한 호주 규정에 따라 Florey Animal Ethics Committee(The University of Melbourne, No. 22-025UM)의 승인을 받았습니다. 본 연구에는 호주 동물자원센터(Animal Resources Centre)에서 얻은 C57BL/6마리의 수컷 마우스(8주)가 사용되었다.

1. 헤드스테이지 설계 및 제작

알림: 헤드스테이지 PCB 보드는 동물의 머리에 직접 배치하도록 설계된 소형 14mm x 12mm 4층 보드입니다. 상용 증폭기 칩( 재료 표 참조)을 사용하며 모든 디자인 및 Gerber 파일은 온라인에서 사용할 수 있습니다(GitHub 링크: https://github.com/dechuansun/Intan-headstage/tree/main/pcbway).

  1. 제조업체에 다음 사양을 제공하십시오. 보드 두께: 0.6mm; 최소 트래킹/간격: 4mils; 최소 구멍 크기: 0.2mm.
  2. PCB 조립 과정에서 다음 순서를 따르십시오.
    1. 350°C로 설정된 열풍총을 사용하여 증폭기 칩을 보드에 납땜합니다....

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결과

여기에 표시된 결과는 C57BL/6 수컷 마우스의 4개 코호트(각 코호트에 대해 n = 8, 연령: 8주, 체중: 24.0 ± 0.42g)에서 테스트한 국소 자기장 전위(LFP) 특성에 대한 여러 약물의 효과를 보여줍니다. 검사된 약물에는 항정신병 약물인 클로자핀, 칼륨 채널 조절제인 4-아미노피리딘(4-AP), 레티가빈, 대조군 생리식염수가 포함되었습니다.

그림 1에서 볼 수 있듯이 마우스를 작은 기록 챔버에 넣고 맞춤형으로 설계된 헤드스테이지를 사용하여 해마(HIP)와 전전두엽 피질(PFC)에서 LFP를 수집했습니다. 이 연구는 주로 세타 및 감마 주파수 대역 검사에 중점을 두었기 때문에 기록된 신호는 먼저 2-100Hz의 주파수 범위 내에서 초기 대역 통과 필터링을 거친 다음 2000Hz에서 샘플링을 거쳤습니다. 그런 다음 신호는 여러 개의 2s epoch로 분할되었습니다. 뚜렷한 모션 아티팩트를 표시하는 모든 epoch.......

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토론

여기에 제시된 프로토콜은 해마(HIP)와 전전두엽 피질(PFC)에서 이중 국소자기전위(LFP)를 동시에 기록하기 위해 특별히 설계된 맞춤형 헤드스테이지를 구성하는 절차를 간략하게 설명합니다. 이 프로토콜에 제공된 자세한 단계는 연구원이 각 영역 내 및 HIP와 PFC 간의 신호 통신을 철저히 조사할 수 있는 충분한 정보를 제공합니다.

맞춤형으로 설계된 헤드스테이지는 상업용 앰프 칩을 사용합니다. 현재 구성은 8개 채널의 녹음을 지원하지만 헤드스테이지는 전체 32채널 용량을 수용하도록 쉽게 조정할 수 있으므로 전극 어레이 녹음에 적합한 확장된 채널 용량에 대한 잠재력을 제공할 수 있습니다. 헤드 스테이지의 저렴한 비용을 고려할 때 한 가지 옵션은 보드를 동물의 머리에 영구적으로 부착하는 것입니다. 이 접근 방식은 모션 아티팩트를 최소화하고 움직임으로 인한 전반적인 방해 수준을 줄이는 이점을 제공합니다.

맞춤형 전극은 LFP의 안정.......

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공개 사항

저자는 밝힐 것이 없습니다.

감사의 글

이 연구는 Royal Melbourne Hospital Neuroscience Foundation(A2087)의 지원을 받았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
황동 튜브 Albion Alloys, 미국내경 0.45 mm
Carprofen Rimadyl, 화이자 동물 건강 
상업용 증폭기 칩IntantechRHD 2132
제어 보드IntantechRHD 기록 시스템
치과 시멘트 Paladur
Heat 수축Panduit0.8 mm 직경
M1.2 스테인레스 스틸 나사시계 도구시계 및 시계 나사
다채널 소켓 커넥터 Harwin, AU1.27mm 피치, PCB 소켓
PFA 코팅 텅스텐 와이어 AM 시스템, 미국150 &MICRO의 내경; 엠 
인산 기반 플럭스칩 퀵CQ4LF-0.5
녹음 소프트웨어IntantechRHX 녹음 소프트웨어
입체 프레임세계 정밀 기기마우스 입체 기기
슈퍼 접착제UHU초고속

참고문헌

  1. Einevoll, G. T., Kayser, C., Logothetis, N. K., Panzeri, S. Modelling and analysis of local field potentials for studying the function of cortical circuits. Nat Rev Neurosci. 14 (11), 770-785 (2013).
  2. Buzsaki, G., Anastassiou, C. A., Koch, C.

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재인쇄 및 허가

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