이 프로토콜은 골육종 마우스 모델의 Yiqi Jiedu 달인을 예로 들어 달인 공식 및 gavage 기술의 자세한 표준화 프로세스를 제공합니다. 동물 보호에 대해 설명하고 연구 데이터의 신뢰성을 개선하여 생체 내 달인 공식의 치료 효능 및 분자 메커니즘을 조사하기 위한 효과적인 전략을 제공합니다.
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이 논문에서
요약
초록
달인 제형은 중국 전통 의학에서 가장 일반적으로 사용되는 제형이며 경구 투여에 의해 수천 년 동안 임상 실습에 적용되어 빠른 효과, 쉬운 흡수 및 환자의 특정 증후군에 따른 개별화된 치료가 특징입니다. 달인 공식의 품질은 중국 전통 의학의 임상 효능에 직접적인 책임이 있습니다. 따라서 달인 공식의 표준화 과정은 주관적인 요인으로 인한 달인 품질의 차이를 피하는 데 중요합니다. 한편, 임상실험의 한계로 인해 생쥐와 같이 인간 질병을 가진 작은 동물은 한의학의 달인 공식을 포함하여 다양한 중재의 치료 효능과 포괄적인 메커니즘을 탐구하기 위해 의학 연구에 자주 사용됩니다. 결과적으로, 중요한 경구 투여 방법으로서, 숙련된 위부 기술은 잠재적인 식도 손상 및 약물 유출을 방지하기 위해 특히 중요하며, 이는 각 모델 동물에 동일한 양의 약물이 투여되도록 보장하여 정확한 실험 결과를 이끌어 낼 것입니다. 또한, 동물 복지를 보호하고 사용되는 동물의 수를 최소화하기 위해 표준화된 달인 공식 제조 방법과 숙련된 개비 전략이 필요합니다. 여기에서는 골육종 마우스 모델에서 Yiqi Jiedu 달인을 예로 들어 달인 공식과 gavage 기술의 자세한 표준화 과정을 보고했습니다. 효능은 종양 부피에 의해 평가되었습니다. 이 프로토콜은 동물 보호를 극대화하고 연구 데이터의 신뢰성을 향상시켜 향후 중국 전통 의학에 대한 달인 공식의 치료 효능 및 분자 메커니즘을 조사하기 위한 효과적인 전략을 제공할 것입니다.
서론
달인 공식은 중국 전통 의학과 액체 의약 1,2의 가장 일반적으로 사용되는 제형입니다. 중국 전통 의학의 달인 공식은 약초를 물에 담근 후 물에 달인 다음 여과하여 찌꺼기를 버리는 방식으로 가공됩니다.
달인 제형은 특히 한의학의 증거 기반 치료의 특성에 따라 임상적 필요성에 따라 개별화될 수 있기 때문에 경구 투여를 통한 이 제형은 구체적이고 대체할 수 없는 장점으로 수천 년 동안 임상 실습에 적용되어 왔습니다 3,4. 달인 공식의 품질은 임상 효능과 직접적인 관련이 있습니다. 따라서 활성 성분이 최대한 추출되고 보호되도록 표준화된 달인 방법의 원칙에 따라 달인 공식을 준비해야 합니다3. 한편, 달인 준비가 된 의약품은 임상 실습에 사용되는 생 한약의 주요 형태입니다. 처방된 달인 준비가 된 의약품의 품질 표준 및 생산 방법은 중국 약전2의 규정을 준수해야 합니다. 또한, 처방된 달인 준비가 된 약은 찬물에 30분 이상 담가야 하며, ....
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프로토콜
이 프로토콜은 Yiqi Jiedu 달인을 샘플로 사용하여 골육종 모델 마우스의 자세한 gavage 기술을 설명합니다. 이 실험에는 생후 4주 된 수컷 무흉선 마우스(BALB/c 누드)를 사용하여 상하이 중국 전통 의학 대학의 실험 동물 센터의 SPF 등급 사육실에서 사육했습니다. 모든 동물실험은 상하이중의과대학 동물관리위원회의 승인을 받았으며 실험동물 윤리강령(동물윤리승인번호: PZSHUTCM2304060007)을 준수하고 실험동물과 관련된 국제 요건에 따라 엄격하게 수행되었습니다.
1. 재료
- 한약초(인삼 42g, 헤디오티스 디푸사 52.5g, 가시 두개골 허브 31.5g), 주사기 1mL, 12G/55mm 팔꿈치 개비지 바늘(그림 1)을 구합니다.
2. 복용량 결정
- 표준 체중 60kg인 성인의 일일 복용량은 인삼 12g, 백삼 15g, 가시 두개골 허브 9g이며, 총 36g, 즉 달인 준비가 된 약/체중 0.6g입니다. 체표면적11에 따라 표준 체중 60kg의....
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결과
생체 내 골육종의 성장에 대한 Yiqi Jiedu 달인의 억제 효과는 143B 골육종 세포를 흉선성 마우스의 경골에 주입하여 제조한 경골 내 이종이식 골육종 마우스 모델에서 결정되었습니다. Yiqi Jiedu 달인은 143B 주입의 둘째 날부터 28 일 동안 Gavage에 의해 Yiqi Jiedu 달인 그룹의 마우스에 투여되었습니다. 생리식염수를 대조군의 마우스에 투여하였다. 모든 쥐는 28일 후에 안락사되었다. 그 결과 Yiqi Jiedu 달인 그룹의 종양 부피가 대조군에 비해 현저히 감소한 것으로 나타났습니다(그림 5).
그림 1.......
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토론
중국 전통 의학에서 처방된 약초의 임상적 효능은 주로 투여된 용량 및 제형과 관련이 있습니다. 따라서 표준화된 달임 전략의 수립과 숙련된 관리 프로세스는 임상 실습뿐만 아니라 실험 결과의 신뢰성을 향상시키는 데 필요합니다.
이 연구에서 우리는 먼저 한약의 임상 실습에 사용되는 한약재의 표준화된 달임에 대한 자세한 전략을 제공하여 사람들이 과학적으로 달인 약을 지도하는 것을 용이하게 하고 달인 공식의 품질과 한약의 임상 효능을 실질적으로 향상시킵니다. 따라서 표준화가 이루어지면 임상에서 한약 효능의 정확성과 일관성이 향상될 것입니다.
가비지 전략은 전임상 연구에서 경구 섭취 방법으로 널리 적용되어 왔으며 마우스, 랫트 및 토끼를 포함한 다양한 실험 동물에 적용할 수 있어 투여의 용이성, 정확한 투여량 조절 및 약물 투여의 임상 경로를 모방할 수 있는 능력과 같은 몇 가지 이점을 제공합니다13
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공개 사항
저자는 공개할 것이 없다고 선언합니다.
감사의 글
현재 연구는 (1) 국립자연과학재단(81973877 및 82174408), (2) 중국 국가 중점 R&D 프로그램(2020YFE0201600), (3) 상하이 최우선 연구 센터 건설 프로젝트(2022ZZ01009), (4) 병원 TCM 준비의 산업 전환을 위한 상하이 협력 혁신 센터, (5) 상하이 중의약 대학 예산 내 연구 프로젝트(2021LK047)의 보조금으로 지원됩니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 143B 세포주 | ATCC | CRL-8303 | 골육종 세포주 |
| 마취 기계 | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | R500IP | 마취 마우스 |
| 장비 자동 세포 카운터 | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | 카운팅 셀 |
| BALB / c 흉선 마우스 | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | 남성 | 동물 |
| 가시가 있는 두개골 허브 | 상하이 Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | 달인 준비 의약품 |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| 원심분리기 튜브(15mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, 코닝 | 원심분리기 |
| 세포 팔꿈치 위침(12게이지/55mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | 위 관류 장치의 구성 요소 |
| 거즈 | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | 달인 필터 |
| 인삼 | 상하이 Wanshicheng 제약 Co., Ltd. | 20220704-2 | 달인 준비 의약품 |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. (Hedyotis diffusa 상하이 양헤탕 전통 중국 의학 정제 Co., Ltd.) | 2023071107 | 달인 준비 의약품 |
| isoflurane | 심천 RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | 마취 마우스 |
| 마이크로 볼륨 주사기 | 상하이 높은 비둘기 산업 및 무역 유 | 0-50 μ L | 경골 |
| 인산염 완충 식염수 | Beyotime Biotechnology | ST447 | 인간 골육종 세포 |
| 고무 밴드 | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | 계량컵에 거즈 고정 |
| 즈 주사기 (1mL | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | 위 관류 장치 |
| 트립신 (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, 세포의 Gibco | 트립신 처리 |
참고문헌
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12(2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specifi....
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재인쇄 및 허가
