방법 논문

Picrosirius Red Staining for Semiquantitative Histopathologic Evaluation of Collagen Deposition in Murine Models of Chronic Lung Allograft rejection(만성 폐 동종이식 거부 반응의 쥐 모델에서 콜라겐 침착의 반정량적 조직병리학적 평가를 위한 Picrosirius Red Staining)

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DOI:

10.3791/66395

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2025년 3월 21일

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1Department of Thoracic Surgery, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg, 2Department of Plastic and Hand Surgery, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg, 3Department of Thoracic Surgery, Kyoto University Hospital, 4Department of Otolaryngology, Medical Center - University of Freiburg, Faculty of Medicine, University of Freiburg

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

Picrosirius Red staining은 공간적으로 분해된 방식으로 쥐 폐 섬유화 리모델링에서 콜라겐 침착을 객관적으로 평가하기 위한 반정량적 방법입니다. 총 콜라겐 침착을 평가하는 것 외에도 Picrosirius Red 염색을 통해 두께가 다른 콜라겐 섬유를 구별할 수 있습니다.

초록

섬유증은 폐 이식 후 만성 거부 반응의 병태생리학적 특징이며 장기 수혜자 생존에 가장 큰 장애물입니다. 만성 거부 반응 연구를 위해 여러 쥐 폐 이식 모델을 사용할 수 있습니다. 그러나 이식편의 섬유화 변화에 대해 이질적인 결과를 보이며, 섬유증의 조직학적 정도는 대부분 질적으로 보고됩니다. 따라서 통계적 분석을 허용하는 공간적으로 해결된 접근 방식은 이러한 모델에서 섬유증을 평가하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 연구는 쥐 폐 동종이식편에서 콜라겐 조직의 반정량적 평가를 위해 Picrosirius Red 염색을 제시하고 이를 표준 Hematoxylin 및 Eosin, Masson's Trichrome 및 Herovici's stains와 비교합니다. 염색은 경미한 및 주요 조직적합성 복합체(MHC) 불일치를 기반으로 두 개의 서로 다른 쥐 이식 모델의 절편에 대해 수행되었습니다. 이 방법은 전체 폐 절편에서 콜라겐 조직의 반정량 분석을 위해 확립되었습니다. 따라서 섬유성 폐 질환의 쥐 실험 모델을 위한 도구 역할을 할 수 있습니다.

서론

폐 이식은 말기 폐 질환을 앓고 있는 환자를 위한 확실한 치료 옵션입니다. 그러나 만성적인 거부 반응으로 인해 장기 생존이 저해되어 수술 후 5년 이내에 접종자의 50%가 영향을 받습니다1. 소기도와 폐 실질의 섬유성 리모델링은 만성 폐 동종이식 거부 반응에서 폐 기능의 점진적인 상실의 기저에 있는 조직학적 특징이다2. 실험적으로, 만성 폐 동종이식 거부 반응은 MHC 불일치 마우스 균주 간의 쥐 정소성 폐 이식으로 모델링할 수 있습니다. 만성 거부 반응3의 표현형을 달성하기 위해 다양한 균주 조합이 제안되었습니다. 그 중, 경미한 MHC 불일치 C57BL/10 공여자와 C57BL/6 수혜자의 이식 조합이 자주 사용된다4. 또는 매일 면역억제 치료를 받는 C57BL/6 수혜자에게 BALB/c 기증자 폐를 이식할 수 있다5. 이러한 모델은 조직학적으로 다른 정도의 섬유화 변화를 초래합니다6. 이러한 변화는 종종 표준 Hematoxylin 및 Eosin, Masson의 Trichrome 염색을 사용하여 정성적으로 보고됩니다.

Hematoxylin 및 Eosin을 사용한 표준 조직학적 염색을 통해 핵을 파란색으로 염색하고 세포질과 콜라겐 섬유는 빨간색으로 나타낼 때 표본을 전체적으로 볼 수 있습니다. Masson의 트리크롬 염색을 사용하면 핵은 검은색으로 염색되고 콜라겐 섬유는 녹색에서 파란색으로 염색되며 세포질, 피브린 및 근육을 포함한 배경은 빨간색입니다. Masson의 트리크롬 염색은 과소평가된 값으로 이어질 수 있기 때문에 Picrosirius Red 염색을 사용하는 것이 유익한 것으로 간주됩니다7. Picrosirius Red는 긴 양이온 콜라겐 섬유와 결합하고 대비가 풍부한 적색 염색을 제공하는 선형 음이온 성 염료입니다. 또한, Picrosirius Red 염색은 교차 편광에서 콜라겐 섬유의 자연스러운 복굴절을 향상시킵니다8. 이런 식으로 콜라겐 섬유 두께와 패킹을 평가할 수 있습니다. 편광 필터를 사용하면 배경이 어두워지고 침전된 콜라겐의 두께를 구별할 수 있습니다. 두꺼운 콜라겐 섬유는 빨간색으로 보이지만 얇은 콜라겐 섬유는 분극 아래에서 녹색으로 나타납니다. 복굴절과 콜라겐 아형 사이의 직접적인 연관성은 문헌에 자주 설명되어 있으며, 콜라겐 I에는 적색 복굴절이 할당되고 콜라겐 III에는 녹색 복굴절이 할당되었습니다9.

이 프로토콜은 쥐 폐 동종이식편에서 섬유증을 평가하기 위해 Picrosirius Red 염색을 사용하는 방법을 설명합니다. 기존의 조직학적 염색 외에도 만성 거부 반응의 쥐 모델에서 섬유화 변화를 반정량적으로 평가할 수 있고, 단 한 번의 염색으로 두꺼운 콜라겐 섬유와 얇은 콜라겐 섬유를 구별할 수 있는 수단을 제공하며, 비용 효율적이고, 수행하기 쉽습니다. 이 방법은 폐 실질의 섬유화 리모델링을 특징으로 하는 다른 쥐 실험 모델에도 동일하게 적용할 수 있습니다.

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프로토콜

모든 동물 프로토콜은 인도적 동물 연구를 위한 3R의 윤리 원칙을 준수하며 지역 수의학 윤리 위원회(Veterinäramt Kanton Zürich, 스위스, 연구 번호 45/2014)의 승인을 받았습니다. 마찬가지로, 독자는 실험실 동물에 대한 절차를 수행하기 전에 관련 기관의 허가를 받아야 합니다.

1. 샘플 수집

  1. 개인의 필요와 윤리적 승인에 따라 동물 실험을 수행합니다. 한 명의 미세외과 의사가 추가적인 허혈 시간 연장 없이 모든 수술을 수행합니다.
    참고: 대표적인 결과를 재현하려면 Charles River Laboratories에서 27-30g 무게의 특정 병원체가 없는 성인 수컷 C57BL/6J, C57BL/10J 및 BALB/c 마우스를 구하십시오. 동종 이식편의 경우, C57BL/6J 동물을 기증자와 수혜자로 사용합니다. 경미한 불일치 모델에서는 C57BL/10J 기증자 폐를 C57BL/6J 수혜자에게 이식합니다. 주요 불일치 모델에서는 BALB/c 기증자 폐를 C57BL/6J 투여자에게 이식하고 수술 후 사이클로스포린(10mg/kg/일)과 메틸프레드니솔론(1.6mg/kg/일)을 매일 피하 주사한다5. 관류를 위해 식염수를 사용하고 8주(56일) 후에 폐를 회수합니다.
  2. 안락사의 경우 동물에게 20G 카테터를 삽관하고 2%-3% 이소플루란이 보충된 O2 로 인공호흡을 합니다. 발 꼬집기에 대한 반응이 없는 것으로 충분한 마취 깊이를 확인하십시오.
  3. 수술용 가위로 복벽을 절개하고 흉골 길이를 잘라 심장을 노출시켜 정중 복강흉골 절개술을 시행합니다. 하대정맥(inferior vena cava)과 좌심방 부속기(left atrial appendage)를 해부학적 위치로 식별합니다.
  4. 수술용 가위로 하대정맥과 좌심방 부속기를 빠르게 연속적으로 절단하고 주사기로 폐동맥 뿌리를 통해 0.9% NaCl 3-5mL를 관류하여 폐순환에서 모든 혈액을 제거합니다.
    참고: 안락사는 각각의 윤리적 승인에 따라 수행되어야 합니다. 다른 방법도 동일하게 적용할 수 있습니다. 폐 순환에서 혈액을 철저히 제거하는 것이 좋으며, 이는 순환 정지 후 관류에 의해 수행될 수도 있습니다.
  5. 가위를 사용하여 관류된 폐를 제거합니다.
  6. 보존을 위해 샘플을 4% 포르말린으로 배양하십시오. 포르말린 용액을 기관지와 폐 혈관 조직에 직접 주입합니다. 샘플을 포르말린에 담그고 최소 6시간 동안 배양합니다.
    참고: 포르말린으로 폐를 팽창시키는 경우, 유사한 결과를 얻기 위해 표준화된 절차를 적용해야 합니다. 이러한 절차에 대한 예시 프로토콜은 다른 곳에 발표되어 있습니다10,11.
  7. 실험적 필요에 따라 장기를 다듬습니다. 횡단으로 폐를 반으로 잘라 한 단면에 있는 기관지 나무의 모든 부분을 포착합니다.
  8. 70% 에탄올, 70% 에탄올, 80% 에탄올, 96% 에탄올, 100% 에탄올(각 1시간), 100% 에탄올, 100% 에탄올, 100% 에탄올, 자일롤(각 2시간), 자일롤(1시간) 및 파라핀 3x와 같이 알코올 시퀀스의 탈수를 위해 샘플을 자동 조직 처리기로 옮깁니다.
  9. 파라핀을 녹이고 Polyoxymethylen 임베딩 카세트에 올바른 방향으로 샘플을 삽입합니다. 절단면이 아래를 향하도록 샘플을 삽입하도록 주의하십시오. 회전식 마이크로톰을 사용하여 5μm 절편을 연속적으로 절단합니다. 추가 처리 전에 슬라이드를 37°C에서 24시간 동안 건조시키십시오.

2. 파라핀 활주의 Deparaffinization 그리고 수화는

  1. 샘플을 100% 자일롤에 2회 각각 5분 동안 배양하여 파라핀을 제거합니다.
    주의 : 자일롤은 가연성이며 건강에 해롭습니다. 흄 후드 아래에서만 사용하십시오.
  2. 샘플을 100% 에탄올, 100% 에탄올, 95% 에탄올, 70% 에탄올 및 50% 에탄올로 각각 2분 동안 수화합니다. 그런 다음 증류수로 2분 동안 씻습니다.

3. Picrosirius Red로 염색하기

  1. 염색은 Meyer의 hemalum 용액에서 8분 동안 미끄러집니다. 흐르는 수돗물에 10분 동안 슬라이드를 세척합니다.
  2. Picrosirius Red 용액에서 슬라이드를 1시간 동안 배양합니다. Picrosirius Red 용액의 경우 미리 혼합된 염색 용액을 사용하거나 포화 피크르산에 희석된 Direct Red 80 또는 Sirius Red F 3B(CI 35780) 0.1%를 사용합니다.
    주의: 피크르산은 가연성이며 폭발성이 높으므로 조심스럽게 다루어야 합니다.
    참고: 재료 표에 나열된 바와 같이 Picrosirius Red 염색 키트에 대한 다양한 공급업체가 있습니다. 가격과 염색 방법의 차이를 인식하고 항상 공급업체의 지침을 준수하십시오. Sirius Red F 3B(CI 35780)에 대한 특정 색상 지수가 있는 염색 키트만 사용하는 것이 좋습니다.
  3. 슬라이드를 5x-10x를 아세트산 용액(0.5%)에 담급니다. 슬라이드를 부드럽게 흔들어 용액을 물리적으로 제거합니다.
  4. 슬라이드를 95% 에탄올, 100% 에탄올, 100% 에탄올, 100% 자일롤로 각각 5분 동안 탈수합니다.
  5. 각 샘플에 장착 매체 한 방울을 추가하여 삽입하고 커버슬립으로 덮습니다. 흄 후드 아래에서 슬라이드를 말리십시오.

4. 디지털화 및 이미지 처리

  1. 사진이 선명하고 선명해질 때까지 적절한 이미징 소프트웨어를 사용하여 광학 현미경으로 샘플의 초점을 맞춥니다. 편광 필터를 추가하고 배경이 완전히 어둡거나 검게 될 때까지 편광 정도를 조정합니다. 배경이 가능한 한 어두우면 올바른 편광이 달성됩니다.
    참고: 편광 필터 없이 기존의 투과광을 사용하여 Picrosirius Red 염색을 시각화하는 것도 가능합니다. 이를 위해 시리우스 레드와 패스트 그린을 사용하는 것이 좋은데, 이는 시리우스 레드를 단독으로 사용하는 것보다 더 민감한 것으로 나타났기 때문이다12,13. 그러나 두꺼운 콜라겐 섬유와 얇은 콜라겐 섬유를 구별하기 위해 편광 현미경이 필요합니다.
  2. 20배 배율로 모든 샘플을 완전히 스캔하고 .tiff로 내보냅니다. 피지 소프트웨어로 전송14. 슬라이드를 미리 적절하게 청소하고 노출 시간 및 광원 강도에 대한 표준화된 설정을 사용하십시오.
  3. 샘플을 수동으로 둘러싸고 소프트웨어에서 Edit > Clear Outside를 사용하여 잘라냅니다. Analyze > Measure(분석 측정)를 클릭하여 전체 표면적을 측정합니다.
    참고: 측정할 구획을 선택하는 것은 신뢰할 수 있고 비교 가능한 결과를 만드는 데 중요한 단계입니다. 전체 샘플을 디지털화하고 선택함으로써 양호한 단면을 표시하고 이질적인 조직을 전체적으로 고려합니다. 그러나 흉막 또는 개별 기관지와 같은 샘플 내의 특정 영역에 국한하는 것도 가능합니다. 항상 표준화된 방식으로 비교할 구획을 선택해야 합니다. 샘플이 환기에서 큰 변동성을 보이는 경우, 분석된 격실(15)에서 공역 영역을 제외하는 것이 좋습니다.
  4. Image > Adjust >Color Threshold를 클릭하여 색상 임계값을 사용하여 샘플당 총 콜라겐 함량을 측정하고 Analyze > Analyze Particles를 클릭하여 설정을 조정합니다. 크기 = 1 - 무한대, 지우기, 요약을 설정합니다. 밝기 = 35 - 255. 색조 = 2 - 130
    참고: 신뢰할 수 있는 결과를 얻으려면 색상 임계값을 적절하게 설정하는 것이 중요합니다.
  5. 두껍고 얇은 콜라겐 섬유에 대해 색조를 빨간색 figure-protocol-1 의 두꺼운 콜라겐 섬유(Hue 2-30) 및 황록색 figure-protocol-2 의 얇은 콜라겐 섬유(Hue 31-130)로 조정하여 반복합니다. 결과는 스테인드 픽셀의 영역이됩니다.
  6. Plugins > Macros > Record를 클릭하여 자동화된 처리를 위해 매크로를 구성하고 모든 샘플에 대해 반복합니다.
  7. 단면의 표면적에 맞게 표준화된 최종 값을 받으려면 모든 매개변수에 대한 염색된 픽셀의 면적을 각 샘플에 대해 각각 4.3 및 4.5단계에서 측정한 총 표면적으로 나눕니다.

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결과

위에서 설명한 프로토콜은 쥐 폐 조직의 콜라겐 침착에 대한 객관적인 반정량적 평가를 가능하게 합니다. 섬유성 리모델링은 폐 이식 후 만성 거부 반응의 병태생리학적 특징입니다. 따라서 Picrosirius Red 염색은 좌측 쥐 정소성 폐 이식을 사용하여 만성 폐 동종이식 거부 반응 모델에 적용되었습니다. 경미한 면역억제 하에서 BALB/c 기증자에서 C57BL/6 수혜자에게 MHC 불일치가 심하게 이루어지는 폐 이식의 주요 폐 이식은 인간의 만성 폐 동종이식 기능 장애에 필적하는 섬유화 변화를 초래한다5. 대조적으로, C57BL/10 기증자에서 C57BL/6 수혜자로의 경미한 MHC 불일치 이식은 주로 림프구성 세기관지염6을 유발합니다. 그림 1 은 실험 설정을 자세히 보여줍니다.

그림 2...

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토론

Hematoxylin 및 Eosin과 같은 표준 조직학적 방법, Masson의 Trichrome 염색은 공간적으로 분해된 방식으로 쥐 폐의 섬유화 변화를 감지하는 데 널리 사용됩니다16,19. 그러나 이러한 변화를 정량화하고 조직의 콜라겐 구성을 평가하기 위해 추가 방법이 필요한 경우가 많습니다.

Picrosirius Red 염색은 콜라겐을 확인하기 위해 1964년에 처음 설명되었습니다: 투과광 현미경 검사에서 콜라겐은 빨간색으로 나타나고 근육과 세포질은 노란색으로 나타납니다18. 편광 필터를 앞에 배치하고 복굴절을 활용함으로써 콜라겐 섬유 두께를 차별화할 수 있었습니다. 섬유소 색조와 콜라겐 섬유 두께 사이의 상관 관계는 그 이후로 반복적으로 입증되었으며 섬유화 리모델링에...

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공개 사항

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감사의 글

Birte Ohm은 프라이부르크 대학교 의과대학의 Berta-Ottenstein-Program for Clinician Scientists의 지원을 받고 있습니다. 슈테펜 아이젠하르트(Steffen U Eisenhardt)는 독일연구재단(DFG)의 하이젠베르크 교수로, 개인 보조금으로 이 연구를 지원했다. 또한 기술 지원에 대해 Sheena Kreuzaler에게 감사드립니다. 그림 1은 Biorender.com 의 도움으로 만들어졌습니다. 이미징은 프라이부르크 대학교 의과대학(프로젝트 번호 2023/A2-FOL, 2021/B3-FOL), DKTK 및 DFG(프로젝트 번호 450392965)의 일부 자금을 지원하는 Lighthouse Core Facility에서 수행되었습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
아세트산Honeywell, Charlotte, USA33209
Axio ObserverZeiss, Oberkochen, Germany4633000956 (일련 번호)
Coverslip 1.5Roth, Karlsruhe, GermanyKCY5.1
포름알데히드 37%Fisher Scientific, Leicestershire, UKF/1501/PB15
Meyer's hemalum solutionMerck, 다름슈타트, 독일109249
Picrosirius Red SolutionMorphisto, Offenbach am Main, Germany13422사용할 수 있는 대안: ab150681, abcam, Cambridge, UK; SRS250 ScyTek Laboratories, Logan City US
편광 필터Zeiss, Oberkochen, Germany00000-1121-813
Rotary microtome, HistoCore AUTOCUTLeica, Wetzlar, Germany149AUTO00C1, 14051956472
ROTI Histokitt mounting mediumRoth, Karlsruhe, Germany6638.1
ROTI Plast ParaffinRoth, Karlsruhe, Germany6642.5
Rotilabo 임베딩 카세트, POMRoth, Karlsruhe, GermanyK113.1
Superfrost Plus 접착 현미경 슬라이드epredia, 영국 포츠머스J1800AMNZ
Tissue Processor Leica, Wetzlar, GermanyTP 1020
Software
Fiji 소프트웨어 버전 2.14.0/1.54f오픈 소스
이미징 소프트웨어 ZEN 3.4.91Zeiss, Oberkochen, Germany

참고문헌

  1. Weigt, S., DerHovanessian, A., Wallace, W., Lynch, J., Belperio, J. Bronchiolitis Obliterans Syndrome: The Achilles' heel of lung transplantation. Semin Respir Crit Care Med. 34 (3), 336-351 (2013).
  2. Verleden, G. M., et al. Chronic lung allograft dysfunction: Definition, diagnostic criteria, and approaches to treatment-A consensus report from the Pulmonary Council of the ISHLT. J Heart Lung Transplant. 38 (5), 493-503 (2019).
  3. Lama, V. N., et al. Models of lung transplant research: A consensus statement from the National Heart, Lung, and Blood Institute workshop. JCI Insight. 2 (9), e93121(2017).
  4. Martinu, T., et al. Spectrum of chronic lung allograft pathology in a mouse minor-mismatched orthotopic lung transplant model. Am J Transplant. 19 (1), 247-258 (2019).
  5. de Vleeschauwer, S., et al. Chronic rejection pathology after orthotopic lung transplantation in mice: The development of a murine BOS model and its drawbacks. PLoS One. 7 (1), e29802(2012).
  6. Yamada, Y., et al. Chronic airway fibrosis in orthotopic mouse lung transplantation models-An experimental reappraisal. Transplantation. 102 (2), e49-e58 (2018).
  7. Whittaker, P., Kloner, R. A., Boughner, D. R., Pickering, J. G. Quantitative assessment of myocardial collagen with picrosirius red staining and circularly polarized light. Basic Res Cardiol. 89 (5), 397-410 (1994).
  8. Puchtler, H., Waldrop, F. S., Valentine, L. S. Polarization microscopic studies of connective tissue stained with picro-sirius red FBA. Beitr Pathol. 150 (2), 174-187 (1973).
  9. Junqueira, L. C. U., Cossermelli, W., Brentani, R. Differential staining of collagens type I, II and III by Sirius Red and polarization microscopy. Arch Histol Jpn. 41 (3), 267-274 (1978).
  10. Davenport, M. L., Sherrill, T. P., Blackwell, T. S., Edmonds, M. D. Perfusion and inflation of the mouse lung for tumor histology. J Vis Exp. (162), e60605(2020).
  11. Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research. J Vis Exp. (102), e52964(2015).
  12. Segnani, C., et al. Histochemical detection of collagen fibers by Sirius Red/Fast Green is more sensitive than van Gieson or Sirius Red alone in normal and inflamed rat colon. PLoS One. 10 (12), e0144630(2015).
  13. Courtoy, G. E., et al. Digital image analysis of Picrosirius Red staining: A robust method for multi-organ fibrosis quantification and characterization. Biomolecules. 10 (11), 1585(2020).
  14. Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).
  15. Ségard, B. D., et al. Quantification of fibrosis extend and airspace availability in lung: A semi-automativ ImageJ/Fiji toolbox. PloS. 2 (2), e0298015(2024).
  16. Zhou, X., Moore, B. B. Lung section staining and microscopy. Bio Protoc. 7 (10), e2286(2017).
  17. Herovici, C. Picropolychrome: histological staining technic intended for the study of normal and pathological connective tissue. Rev Fr Etud Clin Biol. 8, 88-89 (1963).
  18. Sweat, F., Puchtler, H., Rosenthal, S. Sirius Red F3BA as a stain for connective tissue. Arch Pathol. 78, 69-72 (1964).
  19. Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections. Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), 655-658 (2014).
  20. Montes, G. S., Junqueira, L. C. The use of the Picrosirius-polarization method for the study of the biopathology of collagen. Mem Inst Oswaldo Cruz. 86, Suppl 3 1-11 (1991).
  21. Rittié, L. Method for Picrosirius Red-polarization detection of collagen fibers in tissue sections. Methods Mol Biol. 1627, 395-407 (2017).
  22. Diehm, Y. F., et al. Stem cell-enriched hybrid breast reconstruction reduces risk for capsular contracture in a hybrid breast model. Plast Reconstr Surg. 152 (3), 572-580 (2023).
  23. Rich, L., Whittaker, P. Collagen and Picrosirius Red staining: A polarized light assessment of fibrillar hue and spatial distribution. Braz J Morphol Sci. 22 (2), 97-104 (2005).
  24. Datar, U. V., et al. Clinicopathologic study of a series of giant cell fibroma using picrosirius red polarizing microscopy technique. Arch Iran Med. 17 (11), 746-749 (2014).
  25. Nishat, R., Kumar, H. Collagen fibers in oral submucous fibrosis - A polarizing microscopy study using two special stains. Indian J Pathol Microbiol. 62 (4), 537-543 (2019).
  26. Lattouf, R., et al. Picrosirius red staining: a useful tool to appraise collagen networks in normal and pathological tissues. J Histochem Cytochem. 62 (10), 751-758 (2014).
  27. López De Padilla, C. M. Picrosirius Red staining: Revisiting its application to the qualitative and quantitative assessment of collagen type I and type III in tendon. J Histochem Cytochem. 69 (10), 633-643 (2021).
  28. Junqueira, L. C. U., Bignolas, G., Brentani, R. R. Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections. Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).
  29. Zheng, L., et al. Scar collagen deposition in the airways of allografts of lung transplant recipients. Am J Respir Crit Care Med. 155 (6), 2072-2077 (1997).
  30. Astbury, S., et al. Reliable computational quantification of liver fibrosis is compromised by inherent staining variation. J Pathol Clin Res. 7 (5), 471-481 (2021).
  31. Feingold, B., et al. Diffuse myocardial fibrosis among healthy pediatric heart transplant recipients: Correlation of histology, cardiovascular magnetic resonance, and clinical phenotype. Pediatr Transplant. 21 (5), 12986(2017).
  32. vander Ploeg, E. A., Melgert, B. N., Burgess, J. K., Gan, C. T. The potential of biomarkers of fibrosis in chronic lung allograft dysfunction. Transplant Rev (Orlando). 35 (3), 100626(2021).

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