이 글은 대형 스트로크 마우스에서 고도로 번역되고 독립적으로 입증된 마우스 mSU(Stroke Unit) 개념을 실행하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 또한 생쥐에서 초점 실험 뇌졸중 척도를 실행하기 위한 표준화된 프로토콜을 제공하며, 이는 장기간 감지된 뇌졸중 국소 결손을 평가합니다.
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이 논문에서
요약
초록
중동맥 폐색의 필라멘트 모델(fMCAo)은 아마도 가장 병진 마우스 스트로크 모델일 것이며, 혈관 내 재관류/재개통으로 제어된 허혈을 허용합니다. 그러나 뇌졸중 치료에 대한 현재의 임상 발전(예: 뇌졸중 단위)과 일치하지 않고, 일반적으로 실험실에서 주관적이거나 모호한 신경학적 점수를 사용하며, 높은 급성기 사망률을 나타냅니다. 여기에서는 검증된 비디오 가이드 프로토콜로 이러한 제한 사항을 해결합니다. 교육용 비디오와 의사 결정 알고리즘(위험 계층화 점수)이 포함된 마우스 스트로크 단위(mSU) 프로토콜을 제시하여 임상 스트로크 모델링과 마우스 스트로크 모델링 간의 격차를 해소합니다. 뇌졸중 신경학적 점수의 정확성과 민감도를 높이기 위해 우리는 처음으로 focal Experimental Stroke Scale(fESS)의 비디오 표준화 형식을 제시하고 뇌졸중 후 최대 6개월까지 그 가치를 입증합니다. 또한 사지의 운동 기능에 대한 편견 없는 정량적 평가를 위한 알려진 실린더 테스트와 함께 마우스 사다리 가로대 테스트에 대한 프로토콜이 제시됩니다. 결과는 mSU의 중개 효능을 강조합니다. Focal ESS(fESS)는 국소 뇌졸중 결손을 감지하고, 회복을 포착하고, 뇌졸중 후 최대 6개월 동안 민감도를 유지하는 데 있어 알려진 다른 척도보다 뛰어납니다. Ladder-rung 및 Cylinder 테스트는 전지 및 후방지 운동 결함을 장기적으로 객관적으로 정량화하고 모니터링합니다. 요약하자면, mSU, fESS 및 운동 기능 검사를 통합하면 임상적으로 관련된 뇌졸중 연구를 위한 강력한 프레임워크를 제공합니다. 당사의 프로토콜은 마우스 스트로크 연구에서 중개 가치를 향상시킵니다.
서론
거대 허혈성 뇌졸중은 전 세계적으로 이환율과 장애의 주요 원인 중 하나입니다1. 그러나 마우스 스트로크 연구는 지금까지 거의 모든 전임상 테스트 치료법에서 중개 차단에 직면해 있다2. 이 문제에 대한 여러 가지 이유와 이를 극복하기 위한 노력은 이전 간행물2에서 자세히 검토되었습니다. 이러한 문제는 임상적 발전이 관련 동물 모델에 제한적으로 통합되고2 뇌졸중 후 결손을 정확하고 민감하게 감지하는 데 있어 행동 및 신경학적 점수 체계의 약점에서 비롯된다2.
최근의 발견3은 마우스의 중동맥 폐색의 필라멘트 모델(fMCAo)이 개방성 두개골 손상 및 외상을 가진 다른 모델에 비해 상당한 번역 이점이 있음을 뒷받침합니다 2,4. 무엇보다도, 이것은 임상 뇌졸중 설정 5,6,7
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프로토콜
이 기사에 보고된 실험은 실험 동물 사용에 대한 국내 및 유럽 지침에 따라 수행되었으며 그리스 정부 위원회(Athens, License No "843895_06-09-2022")의 승인을 받았습니다.
1. "마우스 스트로크 단위"(mSU)
- 동물의 임상 상태를 매일("방문") 평가하고 RSS 점수를 계산합니다.
- 데이터 기록 및 모니터링을 위해 가급적이면 동물의 수술 전에 보충 파일 1을 인쇄하십시오.
- 이른 아침(약 08:00), 정오(14:00에서 16:00 사이) 및 늦은 밤(약 22:00 - 23:00)의 표준 시점(방문)에 각 동물을 임상적으로 평가합니다.
참고: 동물의 후속 조치 단계에 따라 이러한 표준 방문을 조정하십시오: A단계의 경우 2회/일(아침-밤), B단계의 경우 3회/일, C단계의 경우 하루에 한 번 동물의 상태를 확인합니다. RSS 점수에 따라 방문 빈도를 추가로 조정합니다(1.1.6 참조). 작업량 감소를 위해 >2명으로 구성된 팀에서 일하는 것이 좋습니다. 아침과 밤의 방문....
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결과
상술한 바와 같이, mSU는 fMCAo 연산 후에 시작된다. fMCAo stroke 및 sham의 두 개의 독립적인 마우스 코호트에 대한 당사의 대표 결과(그림 4a)는 특히 3일에서 10일 사이의 임계 기간 동안 이전에 입증된 mSU의 값을 확인합니다13. 우리 코호트에서는 뇌졸중 병태생리학의 일환으로 코호트 1의 3/15마리(뇌졸중, 6개월 추적관찰), 코호트 2의 2/10(뇌졸중, 14일 추적관찰), 가짜 운영 동물의 0/6(그림 4a)에서 폐사율이 발생했으며(모두 아침 방문 중에 죽은 채로 발견됨) 점수에 포함되었습니다. 어떤 동물도 사전 정의된 인도적 평가변수에 따라 안락사되지 않았다. A상(초기 fMCAo 후 24-48시간) 내에서의 이러한 급성 사망률(10-15%)(그림 4a)은 큰 지역 뇌졸중으로 인한 반구 부종 .......
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토론
본 프로토콜은 mSU 지원 프로토콜에 대한 포괄적인 가이드로, fMCAo 모델13에 의해 대규모 영토 스트로크를 받은 마우스에서 3-10일 사이의 인공물 사망률을 줄이기 위해 고안되었습니다. 또한, 본 프로토콜에는 뇌졸중 후 마우스에서 신경학적 초점 점수의 확장된 주관성 및 편향을 줄이기 위해 ESS 척도(fESS)의 초점 구성 요소에 대한 표준화된 비디오 가이드가 포함되어 있습니다. 이와 함께 장기(최대 6개월) 반대측 전지 및 후방 운동 결손을 정량화하기 위한 Ladder-rung 테스트를 소개합니다.
mSU는 사용자 친화적이고 효과적입니다. 당사의 비디오 지원 프로토콜은 경험이 없는 연구자도 mSU를 적용할 수 있도록 합니다. mSU의 3단계(즉, 단계 A, B 및 C, 위 프로토콜의 섹션 1 및 그림 1h 참조)는 평.......
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공개 사항
보고할 공개가 없습니다.
감사의 글
연구의 일부 기간 동안 귀중한 수술적 지원을 제공해 주신 Nikolaos Plakopitis와 Ioannis Tatsidis에게 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| mSU | |||
| 5% 포도당 용액용 도구 | VIOSER S.A | na (해당 사항 없음) | 모든 genericon |
| 비접촉식 디지털 온도계 | AVRON | YTC20095 | 모든 genericon |
| 디지털 체중 | KERN & Sohn Gmbh | FCB6K1 | Any genericon |
| 식품 펠릿 | Mucedola srl | na | Any genericon, 동물 시설의 일반 식품을 사용하십시오 |
| 가열판 | Photax | na | Photax 식기 따뜻한 2 |
| 액체 방부제 | Sch ü LKE & Mayr GmbH | na | Octenisept® |
| 일반 식품 블렌더 | na | 펠릿 분쇄용. 모든 genericon | |
| 일반 식염수 | DEMO SA | 염화 | 나트륨 주입 0,9 % |
| Pinsetter 및 면봉 | 모든 genericon | ||
| 설탕 | 또는 | 27 | |
| 및 | 주사기 (1ml)를 사용합니다 | . 식품 투여(바늘 없음) 및 피하 유체 투여(바늘 포함) | |
| <강한>ESS용 도구 | |||
| 45도; 각진 표면 | 구성하십시오 | 플렉시글라스 또는 기타 재료로 만들어졌으며, 고무 표면이 있으며, 등반 테스트를 위해 | |
| 면봉 | 모든 genericon | 또는 | 상업용 귀 면봉은 면 끝을 길고 얇게 가장자리 |
| 를 날카롭게 만든 나무 막대 | . 예를 들어 이쑤시개 | 일반적인 | |
| 무엇입니까? | 그것을 구성 | 크기 : 1 x 1 x1cm, 약 100cm 길이, 나무. 빔 워킹 테스트를 위해 두 개의 테이블 가장자리 사이에 놓 | |
| 으십시오. 두꺼운 장갑 | 빔에서 떨어질 때 동물 외상을 방지하기 위한 | 모든 제네릭 |
참고문헌
- Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).
- Lourbopoulos, A., et al. Translational block in stroke: A constructive and "out-of-the-box" reappraisal. Front Neurosci. 15, 652403(2021).
- Cai, R., et al.
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