방법 논문

폴리비닐 알코올 코팅 의료기기에 대한 치료제 접합 검증

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DOI:

10.3791/67358

⸱

2024년 11월 29일

 ,  , 
1Department of Surgery, LSU Health Shreveport, 2Department of Molecular and Cellular Physiology, LSU Health Shreveport

이 논문에서

요약

여기에서는 의료 기기에 주조된 폴리비닐 알코올 멤브레인에 단백질 치료제를 접합하여 단백질 치료제로 의료 기기를 유도체화하는 프로토콜을 제시합니다. 단백질 기반 치료제의 접합은 국소 및 농축 전달을 가능하게 하며, 투여를 위해 훨씬 더 적은 약물 투여량을 필요로 하는 동시에 off-target 효과를 최소화하는 비용 효율적인 접근법입니다.

초록

단백질 기반 치료제는 투여 경로와 작용 부위에 국한시킬 수 없는 능력으로 인해 제한되는 경우가 많습니다. 우리가 개발한 한 가지 혁신적인 접근 방식은 단백질 치료제를 의료 기기에 공유 결합하여 이러한 제제를 의도한 작용 부위에 보다 국소화되고 고도로 농축하여 전달할 수 있도록 하는 것입니다. 이 연구는 글루카곤 유사 펩타이드-2(GLP-2)가 임상적으로 관련성이 있고 측정 가능한 양으로 질 확장 슬리브(VES) 및 장 확장 슬리브(IES) 장치에 공유 결합할 수 있는지 평가하는 것을 목표로 합니다.

팽창 슬리브는 폴리비닐 알코올(PVA)로 코팅되고 글루타르알데히드/황산 증기와 가교결합되어 GLP-2와 같은 아민 함유 치료제와 결합할 수 있는 화학적 활성 표면을 생성했습니다. 250μg, 100μg, 50μg, 25μg 및 0μg의 GLP-2를 24웰 플레이트의 PVA 코팅된 웰에 결합하여 표준 곡선을 생성했습니다. ELISA 표준은 토끼 항-GLP-2 항체에 이어 염소 항-토끼 IgG 알칼리 인산가수분해효소 2차 항체와 알칼리성 인산가수분해효소 블루 마이크로웰 기질을 사용하여 만들어졌습니다. 비색법(620nm에서 노란색에서 파란색으로)은 GLP-2 결합 항체의 농도에 비례하여 PVA 코팅 슬리브에서 GLP-2의 결합 농도를 계산할 수 있었습니다. IES/VES 장치에 50μg의 GLP-2를 추가하면 외부 IES/VES 표면적(9.425cm2)± 평균 22.69μg/cm2의 GLP-2가 결합되었으며, 이는 추가된 GLP-2의 44%가 PVA 코팅된 IES/VES 슬리브에서 고정되었음을 나타냅니다.

현재 인간 GLP-2 투여량은 50μg/Kg입니다. 각 슬리브는 22μg을 운반하기 때문에 이는 단일 장치에서 전신 선량의 약 44%에 해당합니다. 이 방법론을 사용하면 GLP-2 약물의 전신 투여와 동일한 효과를 얻으면서 전신 효과를 피하기 위해 훨씬 더 낮은 용량의 치료제를 추가할 수 있습니다.

서론

효소, 항체, 사이토카인, 호르몬 및 성장 인자와 같은 단백질 기반 치료제는 여러 질병의 치료에 매우 효과적인 것으로 나타났습니다1. 이러한 치료제를 제공하는 방법에 대한 이해를 높이면 이러한 물질을 의약품/치료제로 적용하기 위한 생명공학을 크게 발전시킬 수 있습니다1. 단백질 치료제의 효능은 생체 분포, 비용 및 off-target 효과에 의해 제한됩니다. 단백질 치료제의 약동학 및 약력학을 개선하기 위해 PEGylation, glycosylation, lipidation 및 다른 단백질의 융합을 포함한 여러 가지 접근 방식이 시도되었습니다2. '표적 가능성'은 또 다른 우려 사항인데, 현재 대부분의 단백질 치료제는 여러 작용 부위를 가지고 있어 표적을 벗어난 효과를 일으키기 때문입니다. 구체적으로 말하자면, 이러한 약물을 원하는 부위에 표적화하면 필요한 치료 용량을 낮추고 부작용을 줄일 수 있다2. 의도된 작용 부위로의 약물 전달을 제한할 수 있다면 이러한 약물의 바람직하지 않은 'off-target' 부작용을 제한하는 동시에 치료를 근본적으로 개선할 수 있습니다.

현재 클로피도그렐(clopidogrel), 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine)을 함유한 항증식 약물 코팅이 된 약물 용출 스텐트(drug-eluting stent)와 같은 치료제가 포함된 여러 의료기기가 사용되고 있으며, 이는 심장 카테터 삽입 후 재협착 및 반복적인 혈관 재생의 필요성을 예방하는 데 도움이 됩니다3. 또한, 파클리탁셀(paclitaxel), 독소루비신(doxorubicin), 젬시타빈(gemcitabine) 및 기타 항증식제를 함유한 생분해성 약물 용출 요관 스텐트가 상부 요로상피암치료를 돕기 위해 개발되었다 4. 이러한 스텐트가 분해됨에 따라 항종양제는 통제된 방식으로 국소적으로 방출되어 추가 투여 없이 약물 전달을 연장합니다4. 이 방법론은 의도된 작용 부위에서 항종양 약물의 장기적인 효과를 허용하는 동시에 전신 노출의 필요성을 방지하고 비종양 세포에 대한 약물 작용을 제한하며 약물 독성을 줄입니다. 또한, 스텐트의 생분해성 특성으로 인해 스텐트 제거 절차의 필요성을 방지할 수 있습니다4.

단장 증후군(SBS)은 단백질 기반 치료법을 사용한 환자에서 상당한 개선이 나타난 또 다른 질환이다5. SBS는 다양한 메커니즘을 통해 발생할 수 있지만 장 길이가 불충분하여 흡수 장애와 영양실조를 유발합니다. 글루카곤 유사 펩타이드 2 (GLP-2) 유사체와 같은 치료법은 이 질환을 외과적으로 관리하기 전에 사용할 수 있다5. 전신 영양 펩타이드 호르몬인 인간 GLP-2는 L형 내분비세포에 의해 원위 소장과 결장에서 생산됩니다. GLP-2는 장샘세포의 증식을 유도하고, 손상된 점막의 복구를 촉진하며, 장 상피세포의 세포사멸을 억제하고, 장의 혈액 공급을 개선한다5. 테두글루타이드(teduglutide)와 같은 GLP-2 유사체는 자연 장 적응을 촉진하는 데 도움이 되는 SBS 치료를 위해 1세 이상의 환자를 대상으로 승인되었다6. 당연히 장 적응에는 수년이 걸릴 수 있으며, 그 결과 흡수 시간을 늘리기 위해 위 배출이 지연되고 장 확장에 의해 직경이 증가하여 흡수 표면적이 증가할 수 있습니다7. GLP-2 유사체는 천연 GLP-2와 동일한 약리활성을 가지면서도 구조가 더 안정적이어서 반감기가 길고 표적5에 대한 친화력이 더 강합니다. 현재 테두글루타이드의 연간 비용은 $295,000이며 환자 투여량은 하루 0.05mg/kg입니다5. 테두글루타이드의 부작용으로는 메스꺼움, 구토, 설사, 복통, 체중 감소, 위장 용종, 기존 종양의 성장 증가등이 있다 5.

이전에, 본 연구실에서는 장 확장 슬리브(IES)를 배치하면(그림 1) 생체 외 소장을 즉시 36.2% 신장하고 생체 내 1개월 배치 후 소장을 30.2% 신장을 생성할 수 있음을 보여주었습니다 6,8. 이 장치는 비경구 영양 의존도를 줄일 수 있는 SBS 환자를 위한 치료법이 될 수 있습니다. 치료제를 IES 장치에 생체 접합체로 주입할 수 있는 능력은 장 점막 성장 작용제인 GLP-2를 장치에 추가함으로써 주의 분산 장 형성 능력을 더욱 향상시킬 수 있습니다. 폴리비닐 알코올(PVA) 멤브레인은 PVA를 물에 용해시키고 구조적 지지체에 주조한 다음 황산을 촉매로 사용하여 글루타르알데히드와 가교하여 준비할 수 있는 친수성 폴리머입니다9. 이러한 하이드로겔 나노입자는 약물 확산, 하이드로겔 매트릭스 팽창 및 약물/매트릭스10의 화학적 반응성을 통해 약물 전달 시스템으로서의 잠재력을 가지고 있는 것으로 나타났습니다. PVA는 우수한 생체 적합성과 안전성으로 인해 인체에 대한 임상 사용이 FDA 승인을 받았습니다11. PVA 중합은 생체접합(bioconjugation)을 가능하게 하는 말단기를 생성합니다12.

IES/VES 장치는 PVA 멤브레인으로 주조할 수 있는 9.425cm2의 외부 표면적 3cm 길이입니다. 이러한 PVA 멤브레인은 GLP-2와 생체 접합하여 치료제의 국소 및 농축 전달을 가능하게 할 수 있습니다. 약물의 필요한 용량을 낮추고 전신 투여의 필요성을 우회하여 치료의 부정적인 오프 사이트 효과를 피합니다. 이는 더 적은 복용량을 필요로 하여 이러한 고가의 약물 비용을 완화하는 데 도움이 될 수 있으며, 약물의 출시가 지연되면 투여 빈도가 줄어들어 비용을 더욱 낮출 수 있습니다. IES 장치에 GLP-2를 코팅하면 필요한 투여량을 낮추고, 환자의 비용을 절약하고, 전신 투여를 피하고, 치료의 부정적인 영향을 방지하고, 약물을 대상 부위에 지속적으로 전달할 수 있습니다. 이 보고서는 GLP-2와 같은 치료용 단백질이 생리학적으로 의미 있는 양으로 IES/VES 장치와 같은 의료 기기에 공유 결합할 수 있는 정도를 평가하여 이러한 약물의 국소적 이점을 제공하는 동시에 비표적 효과를 피할 수 있습니다.

프로토콜

참고: 섹션 1과 2는 동시에 완료됩니다. PVA로 코팅하고 PVA 멤브레인을 가교하는 작업은 팽창 슬리브와 24웰 플레이트 모두에 대해 동시에 수행해야 합니다. 이를 통해 동시에 24웰 플레이트로 표준 곡선을 생성하여 흡광도를 사용하여 각 슬리브의 GLP-2 농도를 계산할 수 있습니다.

1. GLP-2 코팅 IES 및 VES 장치 생성

  1. 탈이온수 5mL에 PVA 5g을 첨가하여 100% PVA 용액을 만듭니다. 녹는 데 도움이 되려면 핫플레이트에서 저어주는 것을 고려하십시오. 그런 다음 탈이온수 1mL에 GLP-2 1mg을 첨가하여 1mg/mL GLP-2 용액을 만듭니다.
  2. 유리 피펫 위에 사전 계약 장 확장 슬리브와 질 확장 슬리브를 삽입하고, 사전 계약된 슬리브 주위의 유리 피펫에 단단히 맞도록 자른 플라스틱 피펫으로 끝을 안정화합니다.
  3. 작은 붓을 사용하여 미리 만들어진 5% PVA로 사전 계약된 슬리브를 칠합니다. PVA 코팅을 도장한 후 슬리브를 실온(RT)에서 10분 동안 건조시킨 다음 각 슬리브에 총 5번의 PVA 코팅을 한 번 더 칠합니다.
  4. 5번째 코팅이 건조된 후 사전 계약된 슬리브를 화학 안전 후드 아래의 건조기에 넣어 RT에서 가교결합할 수 있도록 합니다. 25% 글루타르알데히드 3mL와 94%-98% 황산 3mL를 첨가하여 증기가 반응하고 PVA 멤브레인을 슬리브에 가교결합할 수 있도록 데시케이터의 열린 비커를 분리하여 가교를 시작합니다.
  5. 챔버의 슬리브를 48시간 동안 가교한 후 챔버에서 꺼내 글루타르알데히드가 슬리브에서 15분 동안 증발하도록 합니다.
  6. 그런 다음 각 슬리브에 조심스럽게 피펫팅하여 1mg/mL GLP-2 용액 50μL를 추가합니다. 유리 파이펫에서 사전 계약된 슬리브를 제거하고 각 슬리브를 24웰 플레이트의 해당 웰에 추가하기 전에 RT에서 30분 동안 건조시킵니다.

2. GLP-2 코팅 24웰 플레이트 제작

  1. GLP-2의 표준 곡선이 PVA에 결합되도록 하려면 24웰 플레이트의 사용 예정 웰 18개 바닥에 5% PVA의 50μL를 피펫으로 주입합니다. IES 및 VES 장치를 고정하기 위해 6개의 웰을 비워 둡니다(각 장치 유형당 3개).
  2. PVA 층을 24웰 플레이트에서 120°C의 오븐에서 밤새 건조시킵니다.
  3. PVA가 RT에서 48시간 동안 가교결합할 수 있도록 24웰 플레이트를 화학적 안전 후드 아래의 데시케이터에 놓습니다. 25% 글루타르알데히드 3mL와 94%-98% 황산 3mL를 추가하여 증기가 챔버 내부에서 반응하여 PVA를 24웰 플레이트에 가교결합할 수 있도록 열린 비커를 분리하여 가교를 시작합니다.
  4. 48시간 동안 가교결합한 후 챔버에서 24웰 플레이트를 제거하고 글루타르알데히드가 플레이트에서 15분 동안 증발하도록 합니다.
  5. 그런 다음 250 μL, 100 μL, 50 μL, 25 μL 및 0 μL의 1 mg/mL GLP-2 용액을 라벨링된 웰에 추가하여 농도 구배를 만들고 GLP-2의 각 농도(250 μg, 100 μg, 50 μg, 25 μg 및 0 μg)에 대해 3개의 웰과 각 슬리브 유형(IES 및 VES)에 대해 3개의 웰이 있는 24웰 플레이트를 만듭니다.

3. 표준 곡선 및 엄선한 슬리브 GLP-2 농도의 생성

  1. 각각의 GLP-2 희석액을 웰에 첨가하고 약물 코팅된 슬리브를 웰에 첨가한 후, 약물 결합이 발생할 수 있도록 플레이트를 4°C에서 하룻밤 동안 냉장 보관합니다.
  2. 다음날 탈이온수 차단 용액에 분유 1mg/mL 2mL를 각 웰에 1시간 동안 추가합니다. 막기 후에, 각 세척 각 5 분 동안 PBS로 각 우물을 3 번 세척하십시오.
  3. 50mL의 탈이온수에 40μL의 토끼 항-GLP-2 항체를 첨가하여 토끼 항-GLP-2 항체 용액을 만듭니다. 그런 다음 24웰 플레이트의 각 웰에 rabbit GLP-2 항체 용액 2mL를 추가하고 4°C에서 밤새 냉장 보관합니다.
  4. 1차 항체 배양 후, 각 세척마다 5분 동안 PBS로 3회 더 잘 세척합니다. 염소 2차 항체에서 생산된 항토끼 IgG 알칼리 포스파타아제를 40mL의 탈이온수에 2차 항체 20mL를 첨가하여 만듭니다. 그런 다음 각 웰에 2mL의 2차 항체 용액을 추가하고 RT에서 2시간 동안 그대로 둡니다.
  5. 2차 항체 용액을 흡인하고 각각 5분 동안 또 다른 3x PBS 세척으로 각 웰을 세척합니다. 그런 다음 알칼리성 인산가수분해효소 블루 마이크로웰 기질을 각 웰에 추가합니다.
  6. 2차 항체에 접합된 알칼리성 인산가수분해효소가 RT에서 20분 동안 기질과 반응하도록 합니다. 반응이 진행됨에 따라 용액의 색이 노란색에서 파란색으로 변하는 것을 관찰하십시오.
  7. 각 웰에서 200 μL의 용액을 피펫팅하여 반응을 중지하고 24웰 플레이트와 동일하게 표시된 96웰 플레이트에 넣습니다. PVA 멤브레인이 알칼리성 인산가수분해효소에 접합된 24웰 플레이트에서 시약을 제거하면 반응이 중단되고 색상이 변하지 않습니다.
  8. 620nm 파장에서 흡광도 마이크로플레이트 리더를 사용하여 96웰 플레이트를 판독하여 표준 곡선을 생성하고 PVA 코팅 슬리브의 GLP-2 농도를 계산합니다.

결과

이 프로토콜은 GLP-2의 결합을 허용하기 위해 PVA로 IES 및 VES 장치를 코팅하고 가교하는 방법을 설명합니다. 그림 2는 각 장치에서 GLP-2의 농도를 결정하기 위해 생성된 표준 곡선을 보여줍니다. 그림 3은 각 IES 및 VES 장치의 GLP-2 농도와 표준 곡선에 사용된 웰의 농도를 보여줍니다. 슬리브의 평균 GLP-2 농도는 22.69 ± 9.32 μg/cm2였으며, 이는 23.7 μg/cm2의 GLP-2 농도를 가진 24웰 플레이트의 50 μg 웰과 일치했습니다. 이는 50μg의 GLP-2를 첨가하면 첨가된 약물의 45%가 PVA 코팅된 의료기기에 결합된 상태로 유지됨을 보여줍니다.

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그림 1: IES 배포. 이 그래픽은 쥐 모델에서 장 확장 슬리브의 생체 내 배치를 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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그림 2: 표준 곡선. 이 이미지는 Y = mx + b, Y = 620nm에서의 흡광도, x = 농도, m = 0.0118, B = 0.0734, R2 = 0.966 값을 가진 선 그래프를 사용하여 생성된 표준 곡선을 보여줍니다. 24-웰 플레이트는 1.93 cm2의 표면적을 가졌으며, 250 μg, 100 μg, 50 μg, 25 μg 및 0 μg 웰에 대해 각각 125.95 μg/cm2, 66.38 μg/cm2, 23.77 μg/cm2, 14.58 μg/cm2 및 0.00 μg/cm2의 GLP-2 농도를 제공했습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

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그림 3: 장치 및 각 웰에 대한 GLP-2 농도. 이 그래프는 각 IES 및 VES 장치에 대해 결정된 농도와 표준 곡선을 만드는 데 사용된 24웰 플레이트의 웰을 보여줍니다. 각 슬리브에 GLP-2 50 μg을 첨가 한 후 (외부 표면적 9.425 cm2), 장치에 결합 된 GLP-2의 양은 22.69 ± 9.32 μg / cm2였습니다. 이는 표준 곡선의 50μg 웰에 대한 23.7μg/cm2 에 해당합니다. 이 슬리브에 GLP-2 50μg을 첨가하면 여러 번 세척한 후 첨가된 약물의 45%가 장치에 결합되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

토론

여기에서는 GLP-2와 같은 단백질 기반 치료제를 PVA 코팅 및 가교 결합된 의료 기기에 결합하는 방법론을 제시합니다. 결합된 GLP-2의 농도는 토끼 항 GLP-2 항체, 염소 항 토끼 IgG 알칼리 포스파타제 및 알칼리 인산가수분해효소 블루 마이크로웰 기질을 첨가하여 PVA 코팅된 24웰 플레이트에 표준 GLP-2 농도 곡선을 생성함으로써 측정되었습니다. 알칼리 인산가수분해효소에 접합된 2차 항체는 노란색으로 시작하는 알칼리성 인산가수분해효소 파란색 마이크로웰 기질을 추가할 수 있게 했으며, GLP-2 항체 결합 알칼리 인산가수분해효소가 기질과 반응하면서 파란색으로 변합니다. 이 색상 변화는 620nm의 흡광도에서 판독되어 그림 2 의 표준 곡선을 생성하고 흡수를 사용하여 GLP-2 바운드 IES 및 VES 장치의 조화를 계산합니다. 이러한 PVA 코팅 장치에 50μg의 GLP-2를 첨가한 후 첨가된 약물의 45%가 장치에 결합되었습니다.

이 프로토콜에서 중요한 단계는 가교 단계입니다. PVA 코팅된 의료 기기는 25% 글루타르알데히드 및 94%-98% 황산 증기가 PVA를 기기에 가교 결합할 수 있도록 밀폐 챔버에서 48시간 이상이 필요합니다. 이러한 가교결합을 통해 반응기를 가진 PVA 멤브레인이 안정적인 생체 반응성 표면이 되어 표적 약물 전달을 위해 단백질 기반 치료제에 결합할 수 있습니다. 5회 코팅의 사용은 1-2회 코팅은 1시간, 3회 코팅은 24시간 동안 재팽창으로 이어졌기 때문에 경험적으로 결정되었으며, 장과 질 확장에 대한 시간 경과에 따른 산만함을 제공하기 위해 장치가 재팽창하는 데 며칠이 걸리기를 바랐습니다. 표면적이 9.425cm2인 IES 및 VES 장치는 작은 크기에 비해 많은 양의 치료제를 생체 접합할 수 있는 잠재력을 가지고 있습니다. 가교결합 단계가 실패하면 PVA 멤브레인의 안정성이 감소하고 그림 3의 IES 2에서 볼 수 있듯이 생체 접합 치료제를 유지하는 능력이 저하됩니다.

PVA 코팅된 의료 기기에 단백질 기반 치료제를 공유 결합하면 이러한 제제를 관심 부위에 국부적이고 집중적으로 전달할 수 있는 동시에 전신 투여 및 관련 비용 및 off-target 효과를 방지할 수 있습니다. 현재 모든 환자에 대한 일반적인 테두글루타이드 용량은 하루 50μg/kg입니다13. 각 슬리브는 22 μg/cm2를 전달하기 때문에 이는 단일 장치에서 전신 선량의 약 44%에 해당합니다. 외부 표면적이 9.425cm2인 이 슬리브는 213.85μg의 GLP-2를 국부적으로 전달할 수 있습니다. 이는 전신보다 4.3배 더 많은 용량이며 관심 영역에 국한되어 있습니다. 표적 가능성은 체계적인 투여의 필요성을 우회함으로써 약물 사용량을 줄일 수 있습니다. 현재 연간 테두글루타이드 요법은 하루 50μg/kg을 투여하는 데 $295,000입니다5. 테두글루타이드를 슬리브에 접합하여 필요한 약물 투여량을 줄이고 전신 부작용을 최소화해야 합니다. 테두글루타이드의 일반적인 부작용으로는 복통(28%), 주사 부위 반응(26%), 메스꺼움(26%), 복부 팽만(17%), 두통(16%), 구토(14%) 등이 있습니다13.

이 연구의 한계는 생체접합 PVA 코팅 의료기기에서 GLP-2의 지효성 방출의 약력학 및 약동학입니다. 현재 임상시험에서는 GLP-2가 가교결합된 PVA 장치에 결합할 수 있다고 문서화되어 있지만, 약물이 PVA 멤브레인에서 방출되기 전에 얼마나 오래 결합된 상태로 유지되는지와 이식 부위에서 GLP-2가 완전히 방출되는 정도에 대한 정보는 아직 없습니다. 우리는 몇 번의 세척 단계 후에도 GLP-2가 장치에 부착된 상태로 유지된다는 것을 알고 있지만 장치에 대한 접합 정도와 이것이 방출에 어떤 영향을 미칠지는 알 수 없습니다. 향후 연구에서는 생체 유체에 저장된 IES 및 VES의 상등액 방출을 측정하여 생체 내 방출을 모델링하거나 생체 내 이식 후 다른 시간에 이러한 장치를 회수하여 나머지 GLP-2를 측정할 수 있습니다. 또한 pH, 온도 및 수분과 같은 요인이 장치에서 약물의 안정성과 방출 속도에 영향을 미치는지 측정할 계획입니다. 향후 실험에서는 생체 접합 PVA 슬리브를 이식하고 배치 후 및 다른 설정 조건에서 서로 다른 시간에 슬리브를 둘러싼 약물 농도를 측정하여 이를 결정할 것입니다. PVA 코팅 슬리브의 약력학을 알지 못하면 국소 GLP-2 투여가 일반적인 전신 투여와 어떻게 비교되는지 확인할 수 없습니다. 또한 PVA 코팅 슬리브의 최대 바인딩 용량은 아직 알려져 있지 않습니다. 50μg을 첨가한 후, 첨가된 약물의 45%가 슬리브에 결합된 상태로 남아 있는 것을 확인할 수 있었습니다. 이는 이미 최대 바인딩 용량을 초과했음을 의미할 수 있습니다. 각 슬리브에 서로 다른 농도의 GLP-2를 추가하는 향후 연구는 이러한 장치의 실제 최대 결합 용량과 다양한 용량의 방출 속도를 결정하기 위해 보증됩니다.

여기에서는 PVA 코팅된 의료 기기에 대한 치료적 접합 기능을 검증합니다. 그 결과, 첨가된 GLP-2의 44%가 IES 및 VES 장치에 공유 결합되어 GLP-2와 같은 단백질 기반 치료제의 고농축 및 국소 전달이 가능함을 보여줍니다. 국소 약물 전달이 치료 비용을 낮추고, 접근성을 높이고, 부작용을 줄이는 데 도움이 되기를 바랍니다. 이 방법론은 현재 수백 가지의 단백질 기반 치료제에 사용되어 국소 약물 전달을 강화하고 치료 결과를 개선할 수 있습니다.

공개 사항

Jonathan Steven Alexander와 Christen J. Boyer는 특허 US10537659B2, 3D 프린팅 폴리비닐 알코올 의료 기기 및 활성화 방법(2017)을 보유하고 있습니다. 나머지 저자는 공개할 내용이 없습니다.

감사의 글

이 연구는 R. Keith White, MD가 외과 John C. McDonald Chair Fund를 통해, W. Reid Grimes, MD가 외과 Whitney Boggs 기부 교수 기금 및 LSU LIFT2 보조금, HSCS-2022-LIFT-002를 통해 자금을 지원했습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
안티-래빗 IgG (전체 분자)– 염소에서 생산된 과산화효소 항체Sigma-AldrichA0545-1ML
BluePhos Microwell Substrate KitSera Care5120-0059
GenClone 25-107, 24-웰 세포 배양 플레이트 플랫 바텀 웰, TC 처리, 100 플레이트/단위Genesee Scientific 25-107
GLP-2 재조합 토끼 단클론 항체 (3K3P5)Invitrogen MA5-42869
글루카곤 유사 펩타이드-2 (GLP-2) (1-33), 랫Echelon Biosciences195262-56-7
글루타르알데히드, 25% 수용액Sigma-Aldrich111-30-8
Nalgene 폴리프로필렌 데시케이터(스톱콕 포함ThermoFisher Scientific5310-0250
폴리(비닐 알코올)Sigma-Aldrich9002-89-5
황산(TraceMetal 등급), Fisher ChemicalFischer ScientificA510-P212
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참고문헌

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