우리는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR)의 이상의 표현은 소설 아가로 오스 겔 기반 microfluidic 장치를 사용 신경 줄기 세포 (NSCs)의 운동성 향상 것을 보여줍니다. 이 기술은 인간의 신경 줄기 세포와 같은 세포 소스가 없어서 다른 포유 동물 세포 시스템에 쉽게 적응할 수 있으며, 시간을 주변의 차례가 중요합니다.
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이 논문에서
요약
초록
microfluidic 기술 macromolecular의 assays를위한 성숙의 새로운 수준에 도달하는 동안 셀 기반의 assays은 유아 단계 1 아직 없습니다. 이것은 하나가 기존 microfabrication 기술과 재료를 사용하여 셀 - 호환 꾸준한 microenvironment를 만들 수있는 어려움에 크게 때문입니다. 우리는 microfluidic 장치의 기본 재료로, 소설 microfabrication 소재, 아가로 오스 겔의 도입을 통해이 문제를 해결합니다. 아가로 오스 겔은 셀 기반의 assays를위한 이상적인 소재 때문에 높은 가단, 가스 및 세포 생존에 필요한 영양분을 침투성이며,. 우리는 아가로 오스 겔 기반 장치 세균 및 호중구 세포 이주 2 공부에 성공했는지 이전에 나타났습니다. 이 보고서에서는 세 병렬 microfluidic 채널이 약 1mm 두께의 아가로 오스 겔 막에 패턴입니다. 미디어 / 버퍼 상수 흐름은 연동 펌프를 사용하여 두 개의 사이드 채널 유지하고 있습니다. 세포 관찰을위한 중앙 채널에 유지됩니다. 측면 채널에서 영양분과 화학 물질의 측면에서 중심 채널, 센터 채널의 화학적 환경에 지속적으로 diffusing 있기 때문에 쉽게 한쪽 채널을 따라 흐름을 통해 제어됩니다. 이 장치를 사용하여, 우리는 신경 줄기 세포의 움직임이 다양한 화학 조건 하에서 쉽게 광학 모니터링 수 입증하고, 실험 결과는 표피 성장 인자 수용체 (EGFR)의 이상의 표현이 신경 줄기 세포의 운동성 향상 것을 보여줍니다. 신경 줄기 세포의 운동성은, 따라서 tumorigenic 요인 3 세포의 공격성을 평가하기위한 중요한 biomarker입니다. NSC의 운동성을 기본 메커니즘을 파악하는 것은 신경 발달의 장애로 모두와 뇌 암 줄기 세포 침공에 대한 통찰력을 얻을 것입니다.
프로토콜
절차
fibronectin과 코팅 슬라이드
이전 microfluidic 장치의 조립에, fibronectin과 유리 슬라이드를 소독. 코트 biohood에서 슬라이드 불임을 유지합니다. 슬라이드의 가장자리를 따라 멸균 PDMS 스페이서를 정렬하고 영구 마커와 직면하고있는 측면을 표시합니다. 유리 슬라이드의 전체에 걸쳐 PDMS 스페이서 내부 fibronectin의 5 μg / ML 솔루션 (시그마)의 피펫 1 ML. 시간 동안 그대로 슬라이드를 남겨 후, 완전히 N 2 총을 사용하여 건조. 슬라이드는 나중에 실험 4 O C에서 저장할 수 있습니다.
장치를 조립
전체 장치 조립 프로토콜은 다음 절차를 사용하여 무균 조건 하에서 biohood에서 이루어집니다 :
- 70 % 에탄올로 닦고와 N 2 총을 들고 건조하여 그 위에 패턴 microchannels와 실리콘 마스터를 청소합니다. 마스터의 구제 기능 주변 집게를 사용하여 1mm 높이의 살균 PDMS 스페이서를 놓습니다.
- 아가로 오스 분말 0.3 g (피셔 과학)와 CO의 10 ML 무게에 의....
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토론
그림. 1 세 NSC의 변종, 부모 세포, wtEGFR 및 ΔEGFR (제어)의 탄도를 보여줍니다. 궤도의 각 세트는 5 시간 동안 영화에서 얻은되었습니다. EGF 농도가 ~ 10ng/ml 때 부모의 세포, 세포 운동성는 만족, wtEGFR 세포에 대해, 세포 운동성 피크가 100ng/ml 이상으로 이동, 예상대로 ΔEGFR 세포에서, 세포 운동성는 EGF 농도의 독립했다.
100ng/ml로 wtEGF 세포가 가장 운동성이있는 세포를했다, 그들은 빠르게 10ng/ml과 부모의 전지보다 약 1.5 시간을 옮겼습니다. 이것은 (1) EGFR의 표현을 통해 세포의 운동성 향상을 나타냅니다 (2) EGF 리간드 - 수용체 기다리는 이벤트의 숫자는 세포 운동성에 직접적인 영향을 미치고 있습니다. ΔEGFR 세포 라인 constitutively 적극적인 EGFR의 돌연변이이다. 이 돌연변이 인간 glioblastoma의 ~ 60 %에 나타납니다. 그것은 제정 활성 리간드 독립적인 키나제되고 잘립니다 세포외 도메인을했다. autophosphorylation의 강.......
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감사의 글
이 작품은 뉴욕주 과학의 사무실, 기술 및 학술 연구 (NYSTAR) (고급 기술 부여를위한 센터의 형태로)에 의해 및 Nanobiotechnology 센터 (NBTC), 국민의 STC 프로그램에서 교부금에 의해 지원됩니다 계약 번호 항법 - 9876771하에 과학 재단과 미국의 뇌종양 협회와 의학의 뉴욕 아카데미 (잽).
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) (1X) | 시약 | Invitrogen | 11971-025 | |
| CO2-독립 배지 | 시약 | Invitrogen | 18045-088 | 대기 조건에서 다양한 상피, 섬유아세포 및 림프구 세포주-의 성장을 지원하는 데 적합한 비-HEPES 독자적 배지로, L-glutamine을 포함하지 않음 |
| Trypsin-EDTA | 시약 | Invitrogen | 25200-072 | |
| PBS | 시약 | Invitrogen | 14190-144 | 칼슘 또는 마그네슘이 포함되지 않은 인산염 완충 식염수 |
| Pen/Strep | 시약 | Invitrogen | 15140-122 | 0.85% 식염수에 penicillin G (sodium salt) 및 streptomycin sulfate를 사용하여 penicillin (base) 10,000 units 및 streptomycin (base) 10,000 g/ml 포함 |
| FBS | 시약 | Invitrogen | 10437-028 | 검증된 소 태아 혈청 |
| 말 혈청 | 시약 | Invitrogen | 16050-130 | EIA 테스트 완료(음성) 말 혈청 |
| Fibronectin | 시약 | Sigma-Aldrich | F0895 | 인간 혈장 유래 Fibronectin, cold insoluble globulin으로도 불림 |
| EGF | 시약 | Sigma-Aldrich | E4127 | 마우스 하악선 유래 표피 성장 인자, 동결 건조물 |
| Agarose | 시약 | Fisher Scientific | BP1356-500 |
참고문헌
- Blow, N. Microfluidics: in search of a killer application. Nature Methods. 4, 665-670 (2007).
- Shing-Yi Cheng, S. H., Wassweman, M. ax, Archer, S. hivaun, Shuler, M. ichael L., Wu, M. ingming A hydrogel-based microfluidic device for the studies of directed cell migration. Lab-o....
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재인쇄 및 허가
