마우스 망막의 동결 절편 및 면역 염색

Yongqiong Lin; Yingjie Tong; Tongdan Zou; Jiajia Wang; Houbin Zhang

doi:10.3791/67622

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방법 논문

마우스 망막의 동결 절편 및 면역 염색

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DOI:

10.3791/67622

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2025년 2월 28일

Yongqiong Lin^*¹ , Yingjie Tong^*¹ , Tongdan Zou¹ , Jiajia Wang¹ , Houbin Zhang¹^,²

¹The Key Laboratory for Human Disease Gene Study of Sichuan Province and Department of Laboratory Medicine, Sichuan Provincial People's Hospital, School of Medicine, University of Electronic Science and Technology of China, ²Research Unit for Blindness Prevention of Chinese Academy of Medical Sciences (2019RU026), Sichuan Academy of Medical Sciences & Sichuan Provincial People's Hospital

^* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

마우스 망막 동결절편을 준비하고 광수용체에서 면역염색을 수행하기 위한 프로토콜이 설명됩니다. 이 논문을 통해 연구자들은 잘 보존된 형태와 고품질 면역염색 결과를 가진 마우스 망막 동결 절편을 일관되게 생성할 수 있습니다.

초록

조직 절편 및 면역조직화학은 동물 모델을 사용하여 망막 질환의 조직학 및 병리학적 연구에 필수적인 기술입니다. 이러한 방법을 통해 조직 형태와 조직 내 특정 단백질의 국소화에 대한 자세한 검사를 수행할 수 있으며, 이를 통해 질병 진행 및 메커니즘에 대한 귀중한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 마우스는 이러한 목적으로 가장 널리 사용되는 모델입니다. 그러나 쥐의 안구는 작고 쥐의 망막은 매우 섬세한 조직이기 때문에 쥐의 안구에서 고품질 망막 절편과 면역 염색 이미지를 얻는 것은 일반적으로 어렵습니다. 이 연구는 마우스 망막의 동결 절제 및 면역조직화학을 수행하기 위한 개선된 프로토콜에 대해 설명합니다. 이 프로토콜의 핵심은 각막 제거, 수정체 추출 및 삽입 과정에서 안구의 변형을 방지하는 슈퍼 접착제 층으로 안구를 코팅하는 것입니다. 이 단계는 망막 형태학의 무결성이 잘 보존되도록 합니다. 이 프로토콜은 고품질 망막 절편을 일관되게 생산하고 우수한 면역염색 결과를 달성하기 위한 중요한 기술적 고려 사항과 최적화 전략을 강조합니다.

서론

냉동 절제 및 면역조직화학(IHC)은 생물의학 연구, 특히 망막¹과 같은 복잡한 생물학적 구조를 연구하는 데 없어서는 안 될 기술입니다. 이러한 고급 방법론은 망막의 복잡한 세포 구성과 분자 조직을 이해하는 데 필수적입니다. 이를 통해 연구자들은 망막 기능과 병리학을 세부적으로 조사할 수 있는 능력을 갖추게 되며, 이 분야의 지식을 발전시키는 데 중요한 통찰력을 얻을 수 있습니다.

냉동 절제술은 망막 조직의 형태학적 무결성을 유지하는 데 중요한 역할을 합니다. 이를 통해 망막의 섬세한 구조가 그대로 유지되도록 하여 높은 정확도와 신뢰성으로 후속 면역형광 연구에서 절편을 사용할 수 있습니다. 파라핀 임베딩과 같은 다른 방법과 비교했을 때, 동결절편은 조직 형태와 항원성을 모두 더 잘 보존하기 때문에 상당한 장점이 있어 면역조직화학적 염색에 특히 적합합니다². 동결 절편 기법은 다양한 복잡한 조직과 미세한 세포 구조³를 연구하는 데 널리 채택되어 구조를 정확하게 분석할 수 있습니다.

IHC는 조직 내 특정 단백....