이 비디오 및 프로토콜은 설치류에 유리 커버 두개골 창을 이식하는 방법을 보여줍니다. 이러한 준비는 생체내 개월 시간 단위 동안 네크로 텍스의 2 광자 이미징에서 만성 사용할 수 있습니다. 그것은 광학 내장 신호 이미징을 포함한 이미징의 다른 유형에도 사용할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
이미징 기술이 연구의 뇌 기능에 점차 중요 해지고 있습니다. 그것이 사는 그대로 두뇌의 연구를 수 있기 때문에 그 중에서도 두 광자 레이저 스캐닝 현미경은 매우 유용한 방법으로 떠오르고있다. 적절한 준비와 함께,이 기술은 몇 분 거리 개월, 만성 같은 피질 영역의 관찰하실 수 있습니다. 이 비디오에서는, 우리는 두 광자 현미경을 사용하여 두뇌의 생체내 이미징에서 만성위한 준비를 보여줍니다. 이 기술은 처음에는 지금 Janelia 팜에서 하워드 휴즈 의학 연구소의 탐정이다 박사 카렐 스보로 개척되었다. 여기에 표시된 것과 같은 준비가 이미지 대뇌 피질의 혈류 역학에, 칼슘에 민감한 염료를 사용하여, 또는 내장 광학 이미징 연구의 연결 활동을 기록하는 neocortical 구조 (예, 돌기 및 axonal 역학)의 영상에 사용될 수 있습니다. 네크로 텍스의 깊은 영상은 최적의 두개골 창 수술 가능합니다. 수술하는 동안 두라 메이터을 손상하지에 극단주의를 사용하여 함께, 감염을 피하기 위해 가능한 한 가장 멸균 조건 하에서 운영, 성공적이고 지속적인 유리 덮인 두개골 Windows에서 발생합니다.
프로토콜
- IACUC 승인 절차를 사용하여 isoflurane와 쥐 (유도 4 %, 수술을 1.5-2 %)을 마취. 꼬리 및 / 또는 발가락 핀치스이 동물이 완전히 진정되도록하기 위해 사용하는 것이 중요합니다.
- 쥐 트리머를 사용하여, 최대 눈 목 뒤쪽에서 머리를 면도.
- 수술 물을 다시 순환 담요 이상 stereotaxic 프레임에 마우스를 놓습니다. 단단히 귀에 바와 함께 머리를 확보.
- 밖으로 건조에서 동물의 눈에을 방지하기 위해, 눈 연고를 적용합니다.
- Dexamethasone (0.2 밀리그램 / 킬로그램)와 Carprofen가 (5 밀리그램 / 킬로그램) 각각의 뇌 및 / 또는 염증 반응의 붓기 방지하기 위해, subcutaneously, 관리할 수 있습니다.
- 수술을 시작하기 전에 70 % 알코올 및 betadine 세 교대 swipes와 함께 피부를 닦는하여 운영 지역을 소독.
- 모든 수술기구는 유리 비드 살균기를 사용하여 사전에 소독하고 있습니다. 에탄올로 소독되었습니다 가위를 사용하여 살다가 두 주동이의 방향으로 상처 거의 눈꺼풀에 도달, 두 경사 상처 뒤에있는 모든 머리의 기본을 따라 수평 절단, 시작, 두개골의 맨 위에 피부를 제거 그것은 정중선에서 수렴.
- lidocaine + 에피네프린 솔루....
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토론
우리가 비디오에서 두 광자 현미경의 사용과 결합하여 보조 수치, 두개골 윈도우 준비에 나타난 것처럼, 생체내 네크로 텍스의 구조와 기능에서 공부하는 매우 강력한 도구입니다. 기술 관련 해부학 및 미세 수술 절차 및이 준비가 필요 기술에 익숙해지로 엄격한 훈련이 필요합니다. 단지 깨끗한 수술은 만성 이미징 사용할 수 있습니다. 두라이 과도하거나 구멍을 조작하면, 준비는 이미지에 사용해서는 안됩니다.
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재료
티타늄 막대 사용자 정의 - 만든
참고문헌
- Svoboda, K., Denk, W., Kleinfeld, D., Tank, D. W. In vivo dendritic calcium dynamics in neocortical pyramidal neurons. Nature. 85, 161-165 (1997).
- Lendvai, B., Stern, E. A., Chen, B., Svoboda, K. Experience-dependent plasticity of dendritic spines in the developing....
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재인쇄 및 허가
