방법 논문

심근세포 정렬의 변화를 주도하기 위한 마이크로 패턴화된 자기 유변학적 엘라스토머

DOI:

10.3791/68271

⸱

2025년 6월 10일

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, University of Delaware, 2Cardiovascular Institute, Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania, 3Department of Materials Science and Engineering, University of Delaware, 4Nemours/Alfred I. duPont Hospital for Children

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

우리는 철 입자가 내장된 초연질 실리콘 엘라스토머(폴리디메틸실록산, PDMS)를 사용하여 제작된 역동적이고 가역적인 강성 분석 플랫폼을 제시합니다. 이 새로운 분석법은 접촉 유도를 포함하여 세포 표현형의 응급 시간 의존적 물리적 변화를 연구하는 데 적합합니다. 여기에서는 자기학을 사용하여 매트릭스 보강에 대한 신생아 쥐의 심근세포 정렬을 측정합니다.

초록

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

기계적 및 지형학적 것과 같은 기질 관련 단서는 세포 반응에 큰 영향을 미칩니다. 그러나 대부분의 기초 연구는 정적 또는 고립된 효과를 사용합니다. 창발적 세포 반응에 대한 이러한 기계적 효과의 방향과 시간 척도는 대부분 탐구되지 않은 상태로 남아 있습니다. 시간에 따라 변하는 기질 관련 자극이 생리학적 및 병리학적 과정을 어떻게 주도하는지 조사하는 도구는 다음 차원의 기계생물학적 통찰력을 제공할 수 있습니다. 여기에서는 외부 자기장에 반응하여 빠르게 뻣뻣해지고 부드러워질 수 있는 마이크로 패턴의 자기유변학적 엘라스토머(MRE)를 사용하여 신생아 쥐의 심근세포 방향 및 정렬에 대한 기계적(강성) 및 접촉 유도(지형적) 자극의 영향을 보다 엄격하게 조사할 수 있습니다. 시간적으로 조정하고 되돌릴 수 있는 기계적 강성의 동적 제어를 통합함으로써 (1) 동일한 조건에서 사전 컨디셔닝하고 (2) 심근 경색과 같은 임상적으로 관련된 현상을 적절하게 모방하기 위해 체외 생체 역학을 급격히 변화시킴으로써 하중의 영향을 엄격하게 테스트할 수 있습니다. 이 접근 방식을 통해 보다 현실적이고 통제된 방식으로 세포 반응에 대한 부하의 영향을 연구할 수 있습니다.

서론

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

혈액을 효율적으로 펌프질하는 심장의 능력은 심근의 구조와 기계적 특성(강성)에 의존하며, 세포와 조직의 정확한 조직은 협응력 수축과 전반적인 기능에 필수적입니다. 심근은 주로 심근세포(CM)로 구성되어 있으며, 성인의 경우 세포의 길이를 따라 정렬된 육종(cm의 수축 단위)이 있는 길쭉하고 거의 막대 같은 형태를 나타냅니다. 대조적으로, 태아 또는 유도 만능 줄기 세포(iPSC) 유래 CM은 성인 CM과 크게 다릅니다. 그들은 더 둥근 모양, 단일 핵, 무질서하거나 정렬되지 않은 육종 구조 및 불규칙한 박동 빈도를 갖는 경향이 있습니다. 심근의 생체 내 조직의 구조적 유사성은 수축과 힘 전달의 동기화를 허용합니다. 이는 체외 모델을 통해 자연 심근을 재현하는 데 중요하고 필수적입니다. 성숙한 심근과 유사한 구조적 특성을 가진 CM을 생성하기 위해 이전 연구에서는 기질 강성조작 1,2, 기계적 변형3 적용, 접촉 유도 4,5 활용 또는 전기 페이싱 6,7 사용을 포함하여 성숙을 향상시키는 성공적인 전략을 보여주었습니다.

세포 외 환경의 경직성이 세포에 영향을 미친다는 것은 오래 전부터 이해되어 왔습니다. 인체 전체에는 뇌의 수백 파스칼(Pa)에서 뼈 8,9,10의 최대 수십 기가파스칼(GPa)에 이르기까지 다양한 강성이 존재합니다. 발달 과정에서 조직의 경직도가 변경되고, 이러한 변화는 세포 수준의 분화와 성숙을 정상적인 기능에 필요한 성인 표현형으로 조절하는 것으로 밝혀졌습니다 11,12,13,14. 경직도의 변화는 질병 상태 및 특정 병리학의 진행과도 관련이 있습니다 15,16,17,18. 특히, 심근의 경직도는 질병의 발병과 진행에 따라 변합니다. 예를 들어, 건강한 심근은 35-70kPa 이상의 탄성 계수를 가진 심장 고장과 대조적으로 ~10kPa의 탄성 계수를 가지고 있습니다19. 또한, 수많은 시험관 내 연구에서 천연 심근 강성과 유사한 기질에서 배양된 심근세포는 더 나은 육상 조직을 가졌고20 최적의수축을 생성했으며1,19 가장 긴 활동 전위 지속 시간을 가졌다고 보고했습니다21.

또한, 생체 내 세포는 미세환경 내에서 형태와 기능을 주도하는 복잡하고 다양한 지형적 단서에 노출된다는 사실이 더욱 잘 인식되고 있습니다. 이러한 지형학적 단서는 분자 수준에서 인테그린의 무작위 배열에서 근육 조직 내 세포의 미크론 수준 정렬에 이르기까지 다양한 크기와 기하학으로 나타납니다22,23. 다른 기계적 조절자와 마찬가지로 지형은 확산, 신장, 정렬, 운동성, 분화 및 세포사멸과 같은 세포 형태학에 중요합니다 24,25,26. 합성 배양 기질의 도입으로 세포 및 조직 배양을 위한 제어된 표면 지형을 생성하는 방법이 개발되었습니다 27,28,29. 예를 들어, 미세 패턴화된 나노 및 마이크로 홈은 포유류 세포에 대한 접촉 안내를 제공하는 데 사용되어 세포가 배양 기질의 지형 구조를 따르도록 세포골격의 방향을 지정하고 리모델링합니다.

여기에서는 자기장의 강도를 조정하여 강화하거나 연화할 수 있는 조정 가능한 재료인 패턴화된 자기유변학적 엘라스토머(MRE) 기판을 사용하여 구조적(접촉 신호) 및 기계적(강성) 안내를 모두 통합하는 체외 배양 방법을 소개합니다 17,30,31,32. 배양 기판 근처에 자석을 배치하면 강성을 높일 수 있으며, 샘플과 자석 사이의 거리를 변경하여 보강 정도를 수정할 수 있습니다. 반대로, 자석을 완전히 제거함으로써 강성을 줄일 수 있습니다. 이 접근 방식은 생체 내와 유사한 기계적 조건을 복제할 수 있는 강력하고 동적이며 제어 가능한 방법을 제공하는 반면, 표면 마이크로 패터닝은 이방성을 도입하여 보다 생체모방적인 2D 세포 배양 기질을 생성할 수 있습니다.

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프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 패턴화된 PDMS 스탬프 준비

참고: PDMS 스탬프는 패턴화된 MRE 표면을 준비할 때 쉽게 조작하고 정확한 접촉을 할 수 있는 유연성을 위해 필수적입니다. 또한 스탬프의 유연한 특성으로 인해 패턴을 손상시키지 않고 MRE PDMS 층에서 쉽게 제거할 수 있으므로 정확한 패턴 전송과 MRE 표면의 보존을 모두 보장할 수 있습니다.

  1. 10:1(염기: 경화제) 184PDMS 10g을 준비합니다.
  2. 184PDMS 5g을 35mm 페트리 접시에 붓고 모든 거품이 사라질 때까지 ~5-10분 동안 건조제에서 가스를 제거합니다.
  3. 184PDMS가 60°C의 오븐에서 30분 동안 부분적으로 경화되도록 합니다.
  4. 184 PDMS가 부분적으로 경화될 때까지 5분이 남았을 때, 여분의 184 PDMS를 회절 격자에 얇게 층을 추가하고 ~5분 동안 데시케이터에서 가스를 제거합니다.
  5. 오븐에서 부분적으로 경화된 35PDMS가 있는 184mm 접시를 꺼냅니다.
  6. PDMS가 있는 회절 격자를 35mm 접시에 있는 부분적으로 경화된 184 PDMS로 뒤집습니다.
    참고: 회절 격자가 35mm 접시에서 부분적으로 경화된 184 PDMS를 향하도록 합니다.
  7. 소량의 184PDMS가 격자를 둘러쌀 때까지 회절 격자를 가볍게 누릅니다.
  8. 경화되지 않은 나머지 184 PDMS를 사용하여 격자를 둘러싼 접시를 다시 채우고 경화하는 동안 제자리에 유지되도록 합니다.
  9. 회절 격자가 들어있는 접시를 60 ° C로 설정된 오븐에 1.5 시간 동안 놓습니다.
  10. 184 PDMS가 완전히 경화된 후 오븐에서 회절 격자가 있는 35mm 접시를 꺼냅니다.
  11. 메스로 회절 격자 주위를 득점합니다.
  12. 소량의 이소프로필 알코올(IPA)을 적용하여 회절 격자 아래에 침투합니다.
  13. 패턴과 평행한 방향으로 184 PDMS에서 격자를 당겨 빼냅니다.
  14. 과도한 184PDMS를 제거하고 패턴이 있는 섹션만 남깁니다.
  15. 184 PDMS 스탬프를 필요한 크기로 자릅니다.
    참고: 이 연구에서는 장치에 1cm × 1cm 스탬프를 사용합니다.

2. PDMS 우표의 지상 코팅

참고: 실란 처리는 스탬핑 중 PDMS 층 사이의 원치 않는 접착을 방지하는 표면 코팅을 생성하여 원활한 분리를 보장하고 패턴 전달의 품질을 보존합니다.

  1. 실란 치료(선호되는 방법)
    1. 제작된 184 PDMS 스탬프를 패턴화된 표면이 위를 향하도록 O2 플라즈마 클리너에 넣습니다. PDMS 표면을 30초 동안 45W의 O2 플라즈마로 처리합니다.
      알림: 플라즈마 클리너에서 제거한 후에는 즉시 스탬프 위에 뚜껑(또는 덮개)을 씌워 청소한 스탬프에 이물질이 가라앉지 않도록 합니다.
    2. 184개의 PDMS 스탬프를 흄 후드의 건조기에 넣습니다.
    3. 마이크로 원심분리기 튜브의 뚜껑을 뜯습니다.
    4. 마이크로 원심분리기 튜브 뚜껑을 데시케이터의 184 PDMS 스탬프 옆에 놓습니다.
    5. 마이크로 원심분리기 튜브 뚜껑에 트리클로로(1H, 1H, 2H, 2H-퍼플루오로옥틸) 실란 20μL를 추가합니다.
      주의 : 이 화학 물질은 건강에 유해하므로 화학 흄 후드에만 사용해야 합니다.
    6. 데시케이터를 닫고 진공 청소기를 당깁니다.
    7. 실란이 1 시간에서 밤새도록 스탬프를 코팅하도록합니다.

3. 자기 유변 엘라스토머의 제조

참고: 조정 가능하고 가역적인 MRE를 생성하기 위해 카르보닐 철 입자와 엘라스토머의 정확한 비율과 자기장의 적용을 결합하여 다양한 값에 걸쳐 강성을 조정할 수 있습니다. 입자 분율, 기본 엘라스토머 계수 및 자기장 강도를 변화시킴으로써 재료의 강성을 특정 요구 사항에 맞게 미세하게 조정할 수 있습니다.

  1. 더 부드러운 다이내믹 레인지 MRE 준비(가중치 예시는 표 1 참조)
    1. 원하는 양의 실리콘 시너와 에코 엘라스토머 파트 B를 측정하고 스피드 믹서에서 2500rpm으로 1분 동안 혼합합니다.
    2. 용액에 에코 엘라스토머 파트 A와 카르보닐 철 입자를 첨가하고 스피드 믹서에서 2500rpm으로 1분 동안 혼합합니다.
      참고: 원하는 중합 타이밍을 보장하기 위해 혼합 순서가 중요합니다.
    3. 팁이 절단된 전사 피펫을 사용하여 새 35mm 페트리 접시에 MRE를 5g을 넣고 건조제에서 ~5분 동안 가스를 제거한 다음 60°C의 오븐에서 ~10분 동안 부분적으로 경화시킵니다.
      참고: 오븐과 데시케이터의 수평이 적절하게 맞춰져 있는지 확인하는 것은 평평한 샘플을 얻는 데 필수적이며, 이는 이미징의 용이성에 매우 중요합니다.
    4. 5분이 남았을 때 전사 피펫을 사용하여 경화되지 않은 MRE를 추가로 추가하여 184 PDMS 스탬프 표면을 코팅합니다. 코팅된 스탬프를 건조기에 넣어 5분 동안 가스를 제거합니다.
      참고: MRE가 스탬프의 가장자리를 덮으면 MRE가 완전히 경화된 후 스탬프를 제거하기가 더 어려워지므로 MRE를 너무 많이 사용하지 않도록 주의하십시오. 또한 MRE에서 스탬프를 제거할 때 패턴과 평행한 방향으로 당길 수 있도록 모든 단계에서 패턴의 방향을 표시해야 합니다.
    5. 오븐에서 MRE를 꺼내고 집게를 사용하여 코팅된 스탬프를 조심스럽게 이동합니다. 부분적으로 경화된 MRE에 뒤집어 놓고 가볍게 누릅니다. MRE와 코팅된 스탬프를 60°C의 오븐에 다시 넣고 25분 더 굽습니다.
    6. 완전히 경화되면 메스를 사용하여 패턴에 수직으로 스탬프 하단의 MRE를 채점합니다.
    7. 스탬프 주변의 절단 영역에 소량의 IPA를 바르십시오.
      알림: IPA가 컷으로 스며들어 스탬프 아래로 움직이기 시작해야 합니다.
    8. 집게를 사용하여 패턴과 평행한 방향으로 MRE에서 스탬프를 잡아당깁니다.
  2. 더 단단한 다이내믹 레인지 MRE 준비(예: 가중치는 표 참조)
    1. 30:1 184 PDMS를 준비합니다.
      알림: 일부는 혼합 용기에 붙어 있기 때문에 추가로 만드십시오.
    2. 표의 예에 따라 원하는 양의 527 PDMS 파트 A와 파트 B를 추가한 다음 카르보닐 철 입자와 30:1 184 PDMS를 비율로 추가합니다.
    3. 스피드 믹서에서 2500rpm으로 1분 동안 혼합합니다.
    4. 팁이 절단된 전사 피펫을 사용하여 새 35mm 페트리 접시에 MRE를 5g을 넣고 데시케이터에서 ~5분 동안 가스를 제거한 다음 60°C의 오븐에서 ~40분 동안 부분적으로 경화시킵니다.
    5. 5분이 남았을 때 전사 피펫을 사용하여 경화되지 않은 MRE를 추가로 추가하여 PDMS 스탬프 표면을 코팅합니다. 코팅된 스탬프를 건조기에 넣어 5분 동안 가스를 제거합니다.
      참고: MRE가 스탬프의 가장자리를 덮으면 MRE가 완전히 경화된 후 스탬프를 제거하기가 더 어려워지므로 MRE를 너무 많이 사용하지 않도록 주의하십시오. 또한 MRE에서 스탬프를 제거할 때 패턴과 평행한 방향으로 당길 수 있도록 모든 단계에서 패턴의 방향을 표시해야 합니다.
    6. 오븐에서 MRE를 꺼냅니다.
    7. 집게를 사용하여 코팅된 스탬프를 조심스럽게 움직이고 부분적으로 경화된 MRE에 뒤집어 놓고 가볍게 누릅니다.
    8. 코팅된 mre를 넣습니다.amp상단 랙에 stamp 60°C의 오븐에 밤새 넣습니다.
    9. 완전히 경화되면 메스를 사용하여 패턴에 수직으로 스탬프 하단의 MRE를 자릅니다.
    10. 스탬프 주변의 절단 영역에 IPA를 바릅니다.
      알림: IPA가 컷으로 스며들어 스탬프 아래로 움직이기 시작해야 합니다.
    11. 집게를 사용하여 패턴과 평행한 방향으로 MRE에서 스탬프를 잡아당깁니다.
강성 범위자료예시 체중
부드럽고10–80 kPa에코(A+B)11.25 g (A)11.25 g (B)
실리콘 시너22.5 지
철 입자45 지
엄격한60–120 kPa527 PDMS(A+B)18.75 g (A)18.75 g (B)
철 입자37.5 지
184PDMS(염기+경화)14.5g(기본)0.5g(경화)

표 1: 더 부드럽고 단단한 MRE를 모두 제작하기 위한 모든 재료의 중량 예. 표의 무게는 총 90g의 MRE 재료를 만들기 위한 것입니다. 더 적은 준비는 표의 예시 가중치와 동일한 비율로 모든 구성 요소를 혼합하여 달성할 수 있습니다.

4. 세포 배양 준비

참고: 세포 배양 준비에는 적절한 세포주를 선택하고, 필요한 영양소와 성장 인자를 함유한 배양 배지를 준비하고, 오염을 방지하기 위한 멸균 상태를 보장하는 작업이 포함됩니다. 세포는 배양 용기에 도금되고 최적의 조건(일반적으로 CO2가 제어된 37°C)에서 배양됩니다. 건강한 세포 성장을 유지하기 위해 정기적인 모니터링, 매체 변화 및 패시징이 수행됩니다.

  1. MRE의 표면을 70% 에탄올로 3회 세척하여 살균하고 세 번째 세척은 20분 동안 그대로 둡니다.
  2. 접시를 완전히 덮을 수 있을 만큼 충분한 부피를 추가하여 멸균 인산염 완충 식염수(PBS)로 MRE 표면을 3회 세척한 다음 모든 액체를 흡입합니다.
  3. 37°C에서 1시간 동안 PBS의 피브로넥틴(10μg/mL)으로 MRE 표면을 코팅하여 장치에 대한 세포 부착을 촉진합니다.
  4. 4.1.2단계와 유사하게 PBS로 MRE 표면을 3회 세척합니다.
  5. 신생아 쥐 심근 세포를 20,000 cells/cm2의 밀도로 파종합니다.
  6. 세포 배양 중에 매트릭스를 강화하기 위해 장치에 일시적으로 자석을 추가합니다.
    알림: 인큐베이터에 자석이 있는 장치를 배치할 때 주의하십시오. 자석이 상호 작용하지 않도록 장치를 멀리 떨어뜨려 놓아야 합니다. 이 연구는 상호 작용이 적기 때문에 구리 라이닝 인큐베이터보다 스테인리스강 라이닝 인큐베이터의 사용을 권장합니다.

5. 염색 및 이미징

  1. 고정 세포 이미징
    참고: 고정 세포 이미징에는 특정 세포 구성 요소를 시각화하기 위한 몇 가지 주요 단계가 포함됩니다. 첫째, 세포는 구조를 보존하기 위해 고정됩니다. 다음으로, 세포막을 투과화하여 염색이 침투할 수 있도록 한 다음, 다른 단백질이나 세포 파편과 같은 의도하지 않은 부위에 항체 또는 염색이 비특이적으로 결합하는 것을 방지하기 위한 차단 단계를 수행합니다. 그런 다음 세포를 특정 분자를 표적으로 하는 염료 또는 항체로 염색하고 과도한 염색은 세척을 통해 제거합니다. 마지막으로, 세포 구조 분석을 위해 형광 현미경을 사용하여 염색된 세포를 이미지화합니다.
    1. 접시를 완전히 덮을 수 있을 만큼 충분한 양을 추가하여 1x PBS로 한 번 씻은 다음 모든 액체를 흡입합니다.
    2. 4%(v/v) 파라포름알데히드를 10분 동안 사용하여 세포를 고정합니다.
    3. 1x PBS로 세 번 세척합니다(5.1.1단계와 유사).
    4. 0.1% Triton X(1x PBS에 포함)를 넣고 투과화를 위해 5분 동안 배양합니다.
    5. 1x PBS로 세 번 세척합니다(5.1.1단계와 유사).
    6. NH4Cl (1x PBS에서 50 mM)을 추가하고 15 분 동안 배양하여 담금질합니다.
    7. 1x PBS로 세 번 세척합니다(5.1.1단계와 유사).
    8. 블로킹 버퍼(1x PBS에서 5% BSA)를 추가하고 실온(RT)에서 1시간 동안 배양합니다.
    9. 1:200에서 1차 Anti-α-Actinin 1차 항체를 5% BSA(1x PBS에서)로 결합합니다.
      참고: 항체를 철저히 혼합하십시오.
    10. 샘플에 1차 항체 용액을 추가합니다.
      참고: 전체 샘플을 덮을 수 있을 만큼 충분히 추가합니다.
    11. 4 °C에서 밤새 배양하십시오.
      알림: 용액이 혼합될 수 있도록 느린 속도로 로커에 샘플을 배치하는 것을 고려하십시오.
    12. 1x PBS로 세 번 세척합니다(5.1.1단계와 유사).
    13. 2차 항체(555 Alexa Fluor goat anti-mouse)를 1x PBS(1:2000)로 희석합니다.
      참고: 2차 항체는 빛에 민감합니다(형광단). 직접 사용하지 않을 때는 덮개를 덮고 빛을 피하십시오.
    14. 샘플에 2차 항체 용액을 추가합니다.
    15. RT에서 2시간 동안 배양합니다.
    16. 1x PBS로 세 번 세척합니다(5.1.1단계와 유사).
    17. DAPI(멸균된 탈이온수에 1μg/mL)를 추가하고 어두운 곳에서 5-10분 동안 배양합니다.
    18. 20x 딥인 렌즈가 있는 정립 현미경으로 세포를 이미지화합니다.
    19. 장치당 50개의 이미지를 촬영합니다.
    20. Directionality라는 ImageJ 플러그인을 사용하여 이미지를 처리합니다.
      참고: 방향성 옵션: 이 연구에서는 래핑 효과를 방지하기 위해 0°에서 176° 범위의 n = 45개의 빈을 사용했습니다. 사용된 방법은 로컬 그라데이션 방향이었고 디스플레이 테이블이 선택되었습니다. direction 출력은 평균 vector angle(정렬 각도를 나타냄)에 해당하고, goodness output은 평균 벡터 길이(정렬 정도를 나타냄)를 나타냅니다.
  2. 살아있는 세포 이미징
    참고: 라이브 셀 이미징을 사용하면 세포를 자연스러운 살아있는 상태로 유지하면서 동적 세포 과정을 실시간으로 추적할 수 있습니다. 이 기술은 배양 챔버가 장착된 형광 현미경을 사용하여 세포가 성장, 분열 또는 자극에 반응할 때 세포의 고해상도 이미지 또는 비디오를 캡처하는 것을 포함합니다. 시간 경과에 따른 세포 행동 및 상호 작용에 대한 연구를 가능하게 하고 세포 기능 및 역학에 대한 귀중한 통찰력을 제공합니다.
    1. SiR-actin 1:1000 비율로 세포를 배양 배지와 함께 37°C에서 1시간 동안 배양합니다.
    2. 미디어를 흡인하고 1:2000(SiR-actin: Media)으로 바꿉니다.
      참고: 이 희석은 확장된 라이브 이미징을 위해 세포 독성을 줄이기 위한 것입니다.
    3. 배양 챔버, 자동 스테이지 및 20x 딥인 렌즈가 있는 정립 현미경에서 5시간 동안 15분마다 면역형광 이미지를 수집합니다.
      참고: 라이브 셀 이미징 실험의 경우, MRE가 라이브 이미징 시스템에 배치되자마자 자석이 추가되었습니다.

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결과

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

초연질 실리콘 기반 MRE(magnetorheological elastomer)는 자기장을 가하여 정밀하게 조정할 수 있는 탄성 계수를 가지고 있습니다. 이를 통해 생리학적 범위 내에서 신속한 양방향 조정이 가능하며 변화의 속도와 규모를 모두 정밀하게 제어할 수 있습니다(그림 1). 겔 역학은 앞서 설명한 바와 같이 탄성 계수를 측정하여 평가되었으며, 평균 탄성 계수는 자석이 있는 경우 36.3 ± 5.2kPa, 더 부드러운 동적 범위 MRE에 대해 자석이 없는 경우 9.3 ± 1.2kPa인 것으로 나타났으며, 더 단단한 MRE 범위는 자석이 있는 경우 51.3 ± 7.0kPa, 자석이 없는 경우 40.2 ± 3.7kPa입니다(그림 1)30, 33,3...

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토론

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 기술은 엄격한 테스트를 거쳤지만 성공적인 실험을 위해서는 몇 가지 단계에 세심한 주의를 기울여야 합니다.

이 프로토콜에서는 상용 회절 격자를 패터닝을 위한 마스터 몰드로 사용합니다. 그러나, 실리콘 또는 SU8 마이크로 제조 주형과 같은 대안적인 패턴화된 주형은 또한 상이한 크기33,35에서 매우 다양한 패턴을 생성하기 위해 사용될 수 있다. 일부 상업적으로 이용 가능한 PDMS 재료는 사전 패턴화된 36,37 상태로 제공되며, 이는 또한 기계 조절 환경을 패터닝하기위한 효과적인 스탬프 역할을할 수 있습니다. 스피드 믹서는 PDMS 또는 실리콘과 카르보닐 철 입자를 혼합하는 공정을 단순화하지만, 스피드 믹서와...

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공개 사항

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.

감사의 글

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 연구는 델라웨어 근골격계 연구 COBRE 센터(P20 GM139760)의 일부 지원을 받았으며, 미국 국립보건원(National Institutes of Health)과 델라웨어 주(State of Delaware)의 일반의학연구소(National Institute of General Medical Science)의 보조금을 받았습니다. CCM(Center for Composite Materials)의 Sagar Doshi와 델라웨어 대학교 Dhong 연구실의 Ashika Singh에게 레이저 컨포칼 현미경을 사용할 수 있도록 귀중한 지원을 제공하고 재료의 표면 특성화에 필요한 전문 지식을 제공해 준 것에 대해 진심으로 감사를 표하고 싶습니다. 그들의 기여는 우리 작업의 질을 크게 향상시켰습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
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555 알렉사 플루오르 염소 항생쥐 2차 항체 서모피셔 사이언티픽A-21422https://www.thermofisher.com/antibody/product/Goat-anti-Mouse-IgG-H-L-Cross-Adsorbed-Secondary-Antibody-Polyclonal/A-21422
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