Method Article

성체 제노푸스(Xenopus)에서 접근 가능한 조직의 포괄적인 샘플링을 위한 효율적인 기술

DOI:

10.3791/68353

⸱

June 10th, 2025

 ,  , 
1Department of Systems Biology, Harvard Medical School

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이것은 포괄적인 Xenopus 샘플링 프로토콜의 첫 번째 부분입니다. 표본 조직은 심실, 동맥 줄기, 왼쪽 간엽, 담낭, 폐, 췌장, 비장, 후두, 식도, 위, 장, 고환, 지방체, 난관, 쌍을 이루는 신장, 좌골신경총, 피부, 흉선 및 눈 전체입니다.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Xenopus 는 오랫동안 척추동물의 발달과 질병을 조사하기 위한 중추적인 모델 유기체였으며, 세포 과정과 유전자 기능에 대한 깊은 통찰력을 제공해 왔습니다. 배아 제노푸스(Xenopus)에 대한 풍부한 정보에도 불구하고, 성체 조직 샘플링을 위한 표준화된 방법, 특히 정량적 단백질체학(quantitative proteomics)과 같은 현대적인 접근법에 대한 표준화된 방법에는 상당한 격차가 남아 있습니다. 이 연구는 성인 Xenopus의 여러 조직을 빠르고 정확하며 효율적으로 샘플링하기 위한 포괄적인 프로토콜을 소개합니다. 이 프로토콜은 다른 항아리와 비교하여 미묘한 해부학적 차이와 관련된 문제를 해결하여 개구리 해부에 대한 경험이 부족한 사람들에게도 재현성을 보장합니다. 이 프로토콜은 시료의 신선도를 우선시하여 고품질 생화학 분석에 최적화되어 있습니다. 우리는 한 시간 이내에 최대 18개의 조직을 신속하게 수집할 수 있도록 촉진하고 있습니다. 또한 이 방법은 관류 및 비관류 조건에 적용되어 다양한 실험 요구 사항에 대한 유연성을 제공합니다. 이 연구는 Xenopus laevis 와 tropicalis 에 대한 중요한 방법론적 격차를 메울 뿐만 아니라 유사한 양서류 모델에 기술을 적용하는 연구자들에게 귀중한 자원으로 작용하여 비교 생물학 및 진화 연구의 범위와 신뢰성을 향상시킵니다.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Xenopus 는 특히 발달 및 진화적 맥락에서 인간 질병을 연구하기 위해 마우스, 제브라피시 및 기타 모델 유기체에 비해 고유한 이점을 제공합니다. 외부 배아 발달과 크고 쉽게 조작할 수 있는 배아는 내부적으로 발달하고 침습적 절차가 필요한 마우스에서 어려운 실시간 관찰 및 실험적 개입(예: 조직 이식, 유전자 편집)을 가능하게 합니다. 또한, Xenopus의 3개의 방이 있는 심장과 사지동물의 팔다리는 선천적 결함1, 사지 재생2 및 심장 발달3 연구를 위한 보다 직접적인 진화적 다리를 제공합니다. 생쥐와 달리 제노푸스 올챙이는 포유류에는 없는 재생 과정을 모델링하여 팔다리와 장기를 재생할 수 있으며, 수생 생활 단계에서는 환경 또는 독소 영향에 대한 비침습적 연구를 수행할 수 있습니다. 더 빠른 육종, 더 낮은 비용 및 더 적은 윤리적 제약과 결합된 Xenopus 는 포유류 시스템에서 복제하기 어려운 기관 발생 및 스트레스 반응에 대한 고처리량, 기계론적 연구에 탁월합니다.

이 논문은 <....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

모든 실험은 하버드 의과대학 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committee IS 00001365_3)의 규칙 및 규정에 따라 승인되고 수행되었습니다. 샘플링 전에 관류 프로토콜13 을 따르는 경우 2.3단계로 건너뜁니다.

1. 준비(관류 없음)

  1. 연구 기관이 이 프로토콜에 설명된 안락사 기술을 승인했는지 확인하십시오.
  2. 5g/L MS-222(트리카인 메탄설포네이트) 및 5g/L 중탄산나트륨 용액을 준비합니다( 재료표 참조). pH가 ≥7인지 확인하십시오.
    참고: 부피는 안락사되는 동물을 완전히 덮는 데 필요한 부피보다 커야 합니다.
  3. Xenopus를 MS-222 용액에 넣고(1.2단계부터) 총 1시간14분 동안 동물을 물에 담그는 방식으로 1차 안락사를 수행합니다.
  4. 해부 표면(트레이 또는 폼 시트)을 보조 용기 내의 비스듬한 곳에 놓거나 혈액 배출을 용이하게 하도록 배치하십시오.
  5. 개구리가 용액에 1시간 동안 들어가면 1....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 프로토콜의 모든 단계를 따름으로써, 심장실, 동맥 줄기, 좌측 간엽, 담낭, 폐, 췌장, 비장, 후두, 식도, 위, 장, 고환, 지방체, 난관, 쌍을 이루는 신장, 좌골신경총, 피부, 흉선 및 눈 전체를 안락사 후 한 시간 이내에 깨끗하게 절제했습니다(그림 1, 그림 2, 그림 3, 그림 4, 그림 5, 그림 6 참조, 그림 7, 그림 8

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

여기에 제시된 프로토콜은 다양한 경험 수준의 사용자에게 유연성을 제공하는 동시에 적시에 효율적인 방식으로 필수 조직을 수집할 수 있도록 설계되었습니다. 신규 사용자는 체계적인 조직 수집을 보장하기 위해 설명된 대로 프로토콜의 각 단계를 따르는 것이 좋습니다. 그러나 경험이 많은 사용자는 특정 단계를 건너뛰고 필요한 조직만 샘플링할 수 있습니다. 예를 들어, 장간막 뒤에 위치한 비장에 접근하는 것은 췌장을 샘플링하지 않고도 단순히 위를 이동시키는 것만으로 달성할 수 있습니다. 이러한 적응성을 통해 특정 연구 요구 사항에 따라 샘플링 프로세스를 맞춤화할 수 있습니다. 조직 분해 속도와 대사 활성은 장기에 따라 다르지만, 신속하게 작업하고 냉각 완충액을 사용하면 결과 샘플에 미치는 영향을 최소화할 수 있습니다.

이 프로토콜은 효율성을 위해 설계되어 한 시간 이내에 최대 18개의 조직을 수집할 수 있습니다. 이 방법의 한계는 .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 선언할 경쟁 이해관계가 없습니다.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 작업은 NIH의 OD R24 보조금 ODO31956의 지원을 받았습니다. 또한 Samantha Jalbert와 Jill Ralston의 도움과 지원에 감사드립니다.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1x PBS Corning21-040-CV
LED 조명이 있는 5x 돋보기 및 스탠amazon.comB08QJ6J8P1조명은 열을 발생시키지 않아야 합니다
일회용 이송 피펫VWR414004-036
해부 미세한 집게Fisher Scientific08-875
해부 가위 날카로운 파이온트, 스트레이트 6.5"VWR76457-374
해부 트레이Fisher Scientific14-370-284스티로폼 시트는 허용되는 대안입니다
락사 용기미국 플라스틱 항목  2860대체 불투명 용기 허용
락사 용기 뚜껑미국 플라스틱 항목  3047
홍채 절제술 가위 6"VWR470018-938홍채 가위는 허용되는 대안입니다
MS-222: Syncaine(이전 트리카인)Pentair AESTRS1
쥐 치아 조직 겸자 5.5인치, 스테인레스 스틸Fisher ScientificS08100
중탄산나트륨, 분말, USPFisher Scientific18-606-333
표본 겸자, 톱니 모양 VWR82027-442
해부용 T-핀Fisher ScinetificS99385
드 . 안 안

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Duncan, A. R., Khokha, M. K. Xenopus as a model organism for birth defects—Congenital heart disease and heterotaxy. Semin Cell Biol. 51, 73(2016).
  2. Kawasumi-Kita, A., et al. hoxc12/c13 as key regulators for rebooting....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Xenopus Tissue SamplingAdult XenopusFrog DissectionQuantitative ProteomicsBiochemical AnalysisTissue CollectionAmphibian ModelsComparative BiologyPerfused TissuesReproducible Protocol

Related Articles