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방법 논문

대동맥 질환의 혈관 복구를 위한 정밀 초음파 유도 줄기세포 전달

1.1K 조회수

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DOI:

10.3791/68433

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2025년 6월 20일

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이 논문에서

요약

이 논문은 혈관 줄기세포를 대동맥 혈관 벽으로 정밀하게 초음파 유도하여 전달하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 기술은 혈관 벽을 효과적으로 표적으로 삼고 대동맥류 및 박리에서 혈관 복구를 촉진합니다.

초록

대동맥류 및 박리 파열은 생명을 위협하는 심혈관 응급 상황입니다. 질병 진행을 조기에 예방하고 통제하는 것은 환자 결과를 개선하는 데 필수적입니다. 혈관 줄기 세포는 다양한 혈관 질환에서 혈관 손상을 복구하는 데 중요한 역할을 합니다. 그러나 혈관 내 줄기 세포 주사 요법은 혈관 벽 내에서 외인성 줄기 세포의 효율적인 생착을 보장하는 데 어려움이 있습니다.

대동맥 질환에서 줄기세포를 전달하기 위한 보다 효과적이고 최소 침습적 접근법을 모색하기 위해 당사는 초음파 유도 정밀 표적 줄기세포 전달 기술을 개발했습니다. 특히, 이 기술은 초고해상도 소형 동물 컬러 도플러 초음파 이미징 시스템을 활용하여 대동맥 질환 마우스 모델에서 상행 대동맥의 혈관 벽을 정확하게 찾았습니다. 그 후, 25 μL의 Matrigel 내에 혼합된 1 × 106 mCherry 표지된 혈관 줄기세포를 29 G 바늘을 사용하여 주입하였다. 질병의 진행은 소동물 초음파로 모니터링되었습니다. 마지막으로, 주입된 혈관 줄기 세포를 추적하기 위해 광시트 현미경을 사용한 3D 이미징을 사용하여 대동맥을 채취하고 분석했습니다.

위와 같은 결과는 주입된 혈관 줄기세포가 최소한의 침습성으로 상행 대동맥의 혈관 벽으로 정확하게 전달되어 대동맥류 및 박리에서 혈관 복구를 효과적으로 촉진했음을 보여줍니다. 이 초음파 유도 줄기세포 전달 기술은 줄기세포 이식을 위한 유망한 최소 침습적 방법을 제공하며, 향후 클리닉에서 대동맥류 및 박리 및 기타 관련 심혈관 질환의 진행을 잠재적으로 제어할 수 있습니다.

서론

대동맥류 및 박리병(AAD)은 흔하고 치명적인 심혈관 질환으로, 일반적으로 잠복성 발병과 빠른 진행이 특징입니다. AAD의 발병률은 1.3%에서 8% 사이이며, 매년 전 세계적으로 150,000명에서 200,000명이 사망하는 것으로 추정됩니다 1,2. 급성 발병과 미묘한 임상 증상으로 인해 많은 환자들이 진단 시점까지 위독한 상태에 빠져 최적의 치료 기간을 놓치고 있습니다. β-아드레날린성 차단제 및 안지오텐신 수용체 차단제와 같은 약물 치료는 동맥류 확장을 어느 정도 늦출 수 있지만, 이러한 치료법은 주로 증상을 완화하며 AAD의 발병이나 진행을 효과적으로 예방하는 것으로 나타나지 않았습니다3.

현재 임상관리는 주로 대동맥근 재건술, 상행 대동맥 치환술, 벤탈 수술, 대동맥류의 혈관내 복원술을 포함한 외과적 중재에 의존하고 있다 4,5. 그러나 유전적 AAD를 가진 환자, 특히 아직 수술 적응증에 도달하지 않은 환자의 경우 효과적....

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프로토콜

모든 실험 절차는 Capital Medical University의 동물 연구 위원회의 규정에 따라 수행되며 Capital Medical University의 동물 복지 및 윤리 위원회의 승인을 받았습니다.

1. 주입된 혈관 줄기세포의 제조

참고: 주입 후 상태와 혈관 줄기세포의 효과를 확인하기 위해 앞서 설명한 대로 면역자기 비드 선택을 사용하여 Sca1+ 세포를 분리하고(17,18,19), mCherry 리포터를 운반하는 렌티바이러스로 transfection한 후 세포 위치 및 분포를 관찰한 다음 배양합니다. 양호한 성장 조건과 mCherry-labeled Sca1+ 발현을 가진 5 또는 그 이전 지문의 세포를 후속 실험에 사용합니다20.

  1. 6-8주 된 C57BL/6J 마우스에서 대동맥을 채취하고 현미경으로 외래 조직을 분리한 다음 약....

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결과

초음파 유도 혈관 줄기 세포 전달
이 연구에서는 소동물 컬러 도플러 초음파 이미징 시스템을 사용하여 초음파 유도 주사를 수행했습니다(그림 1A, B). 시술 중에 마우스는 가열된 초음파 플랫폼에 고정되었으며 필요에 따라 플랫폼과 초음파 프로브를 조정했습니다(그림 1C).

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그림 1: 초음파 유도 주입 장치 및 동물 플랫폼에서 마우스의 최적 위치. (A) 통합 철도 시스템의 .......

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토론

유전적 돌연변이에 의해 유발되는 AAD는 유전성 AAD로 분류되며, 그 중 MFS가 가장 흔합니다. AAD는 MFS22의 가장 생명을 위협하는 합병증입니다. 이 상태를 조사하기 위해 우리는 대동맥류가 자발적으로 발생하는 MFS(Fbn1C1041G/+ 마우스)의 잘 정립된 마우스 모델을 사용하여 조기 개입 연구에 이상적입니다. 이 모델은 또한 다른 모델링 접근 방식과 관련된 추가 조직 손상 및 실험 가변성을 우회합니다. 이 연구에서는 mCherry 표지된 Sca1+ 혈관 줄기세포를 초음파 유도 하에 Fbn1C1041G/+ 마우스의 상행 대동맥 벽에 정확하게 전달했습니다. 질병 진행은 소동물 초음파 영상을 사용하여 모니터링했습니다. 또한, 주입된 줄기세포의 이동을 추적하기 위해 대동맥의 3D 이미징 및 분석에 광시트 현미경을 활용했습니다. .......

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공개 사항

저자는 선언할 이해 상충이 없습니다.

감사의 글

이 연구는 국가과학기술전공프로젝트(2023ZD0503304), 중국국가자연과학재단(32271231), 중국국가핵심연구개발프로그램(2023YFC3606500)의 보조금으로 지원되었다. 3D 이미징 기술 지원을 해주신 Chao Zheng 박사님께 감사드립니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
0.1% 젤라틴 용액오리셀     GLT-11301
1.5mL 마이크로튜브액시젠MCT-150-C
10 & 뮤; L 피펫 팁랩셀렉트티-001-10
1000 & 무; L 피펫 팁랩셀렉트티-001-1000
15 mL 원심분리기 튜브랩셀렉트CT-002-15A
200 & 무; L 피펫 팁랩셀렉트티-001-200
5 mL 마이크로 원심분리기 튜브바이오샤프BS-50-M
50mL 원심분리기 튜브랩셀렉트CT-002-50A
안티피린맥클린A800873
안티 스카-1 마이크로비드 키트   밀테니 바이오텍     130-123-124
Bruker Luxendo MuVi -SPIM 시스템
CD31R& DAF3628희석 비율 1:100
큐빅-L조직 투명 솔루션
큐빅-RA굴절률 - 매칭 솔루션
DMEMATCC30-2002
당나귀 항염소 2차 항체, Alexa Fluor 488인비트로젠A11055희석 비율 1:800
FBS코 닝35-076-CV
HBLV-mcherry-PURO     한바이오
균질화기 튜브랩셀렉트HGT-003-200
영상유도 바늘 주입 장치  비주얼소닉
인슐린 주사기BD328421
이소플루란아메이신위도-YFW
라이트 시트 현미경브루커 룩센도       뮤비-SPIM
마트리겔코 닝356234
마이크로스캔 MS400 변환기       비주얼소닉
마우스 취급 및 생리학적 모니터링 플랫폼비주얼소닉
N-부틸디에탄올아민       맥클린     N802391
니코틴아미드맥클린N814605
PBS바이오샤프BL302A
Puralube 안과 연고에쿨1703321138
트리톤 X-100 시그마-알드리치T9284
트리판 블루 스테인 솔루션솔라바이오C0040
트립신-EDTA깁코25200-072
Vevo 2100 lmaging 시스템이스웰소닉스
Vevo 통합 레일 시스템 II이스웰산학

참고문헌

  1. Cui, H., et al. Untargeted metabolomics identifies succinate as a biomarker and therapeutic target in aortic aneurysm and dissection. Eur Heart J. 42 (42), 4373-4385 (2021).
  2. Liu, H., et al.

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