이 연구는 쥐 모델에서 발광 결장직장암 세포의 생체 내 피하 유도와 이미징 시스템을 사용한 후속 발광 측정에 중점을 둡니다. 이 절차는 실시간 모니터링 및 치료 평가를 위한 재현 가능한 종양 성장 모델을 확립하는 것을 목표로 합니다.
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방법 논문
항종양 효능을 평가하기 위해 Athymic Nude 마우스에 인간 결장직장암 세포의 피하 주입
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
대장암(CRC)은 전 세계적으로 암 관련 사망의 주요 원인 중 하나이며, 잠재적인 치료법을 평가하기 위해 개선된 전임상 모델의 시급한 필요성을 강조합니다. 동물 모델은 종양 생물학을 밝히고 새로운 치료 개입을 평가하는 데 필수적입니다. 마우스 모델은 유전자 조작 가능성, 빠른 증식, 비용 효율성, 면역 적능 및 면역 결핍 균주의 가용성 등 기존 모델에 비해 주요 이점을 제공하여 인간 암의 정확한 모델링을 가능하게 합니다.
이 프로토콜은 면역결핍 쥐 모델에서 생물발광 결장직장암 세포주 HCT-116의 피하 유도에 초점을 맞춘 다음, 종양 진행과 성장을 모니터링하기 위해 IVIS 시스템과 캘리퍼를 사용한 비침습적 생물 발광 이미징에 중점을 둡니다. 발광 세포를 사용하면 종양 발생 및 치료 개입에 대한 반응을 추적하기 위한 실시간 정량화 가능한 접근 방식을 제공하여 침습적 절차의 필요성을 줄일 수 있습니다. 종양 세포 이식을 위해서는 마우스 코호트(n = 12)가 필요하며, 치료 테스트를 위한 표준화된 모델을 확립하기 위해 발광 강도를 측정합니다. 종양 부피는 일반적으로 길이 및 너비 측정 또는 너비만 사용하여 계산됩니다.
현재의 방법론은 일관된 종양 확립을 보장하는 동시에 변동성을 최소화하여 궁극적으로 전임상 평가의 신뢰성을 향상시킵니다. 이 연구의 결과는 약물 테스트를 위한 종양 모델을 개선하고 임상 응용 분야에서 전임상 연구의 중개 잠재력을 향상시키는 데 기여할 것입니다. 본 연구는 첨단 이미징 기술과 재현 가능한 실험 설계를 사용하여 대장암 치료를 위한 생체 내 약물 평가의 정확성과 효율성을 향상시키는 것을 목표로 합니다.
서론
대장암(CRC)은 전 세계적으로 가장 흔하고 치명적인 악성 종양 중 하나로, 전 세계적으로 가장 흔하고 치명적인 악성 종양 중 하나입니다1. 기존의 체외 분석법은 살아있는 시스템에서 종양 성장 및 약물 반응의 복잡성을 완전히 포착하지 못하기 때문에 신뢰할 수 있는 전임상 모델을 개발하는 것은 새로운 치료 접근법을 평가하는 데 필수적입니다. 생체 내 모델, 특히 쥐 모델은 종양 생물학에 대한 귀중한 통찰력을 제공하는 데 사용되어 연구자들이 통제된 환경에서 잠재적 치료의 효능을 평가할 수 있도록 합니다.
쥐 모델에서 발광 CRC 세포를 사용하는 것은 전임상 연구의 상당한 발전을 의미하며, 종양 진행에 대한 실시간 비침습적 모니터링을 가능하게 합니다2. 이 연구는 종양 성장을 동적으로 추적하기 위해 피하 종양 유도 및 IVIS 이미징에 대한 표준화된 프로토콜을 수립하는 것을 목표로 합니다. 피하 주사 모델은 기술적 단순성, 재현성 및 종적 종양 모니터링의 용이성 때문에 선택되었습니다. 생물발광 이미징을 활용함으로써 연구자들은 여러 시점에서 동....
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프로토콜
동물은 Instituto Murciano de Investigación Biosanitaria ( IMIB, Murcia) 윤리 위원회(No A13240502)에서 수립한 지침에 따라 특정 병원체가 없는 조건에서 유지되었습니다. 검사는 R. D. 1201/2005에 따라 자격을 갖춘 직원에 의해 매주 수행되었습니다.
1. 동물
참고: 모든 동물은 주사 전에 안전하고 안전하게 제지되어야 합니다. 면역 결핍 마우스(즉, Crl: NU(NCr)-Foxn1nu와 같은 누드 흉선 마우스)로 작업하는 경우 무임 상태를 유지하는 것이 필수적입니다. 현재 연구는 실험 시작 시 5주령(암컷의 경우 20-22g, 수컷의 경우 22-26g)인 12마리의 흉선 누드 마우스(50% 수컷)를 사용했습니다. 모든 마취 및 실험 절차는 기관 윤리 위원회(프로토콜 번호 A13240502)의 승인과 스페인 법률(R.D. 1201/2005)에 따라 센터의 Guía de Ética y Buena Práctica en Investigación 에서 수행되었습니다.
- 분석을 시작하기 전에 4....
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결과
이 프로토콜은 면역결핍 마우스 모델에 인간 세포를 도입할 수 있도록 하여 생체 내보다 항상 생리학적으로 더 관련성이 높은 생체 내에서 이러한 종양 세포의 성장을 가능하게 합니다. 실험 조건이 가능한 한 재현 가능한지, 종양에 비슷한 수의 생존 가능한 세포가 포함되어 있는지, 비교 가능하고 지속적으로 접근 가능한 위치에 이식되었는지 확인하는 것이 중요합니다.
생체 내에서 생물 발광 HCT-116 세포주의 감도를 테스트하기 위해 2 × 106 세포를 누드 마우스에 피하 주입했습니다(n = 12). 최적화된 프로토콜은 방출된 빛과 종양 부피(P > 0.05) 측면에서 실행 가능한 수의 세포를 균일하게 주입할 수 있습니다(그림 1 및 그림 2). 생물 발.......
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토론
흉선 누드 마우스 모델에서 발광 결장직장암 세포의 피하 유도를 위한 프로토콜은 종양 형성 및 실시간 모니터링을 위한 표준화되고 재현 가능한 접근 방식을 제시합니다. 첫째, 이러한 연구는 일반적으로 28일에 걸쳐 수행되며, 발광 측정은 종양 유도 당일에 수행되고 이후에는 매주 수행된다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. 반대로, 종양 부피의 캘리퍼 측정은 세포 현탁액이 아직 캡슐화되지 않았기 때문에 첫날에 수행되지 않습니다. 종양 측정은 첫 주부터 시작되어 매주 수행됩니다. 종양 성장은 피하 주사 당일부터 종양이 약 300mm³의 부피에 도달할 때까지 캘리퍼스 측정을 사용하여 모니터링되었으며, 이는 이전 연구에서 설명한 공식을 사용하여 계산되었습니다9.
이 방법에서 가장 중요한 단계 중 하나는 ECM에서 종양 세포 현탁액을 준비하는 것인데, 이는 세포 생존력과 증식을 지원하는 EC.......
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공개 사항
저자들은 이 연구에서 보고된 연구에 영향을 미칠 수 있는 경쟁적인 재정적 이해관계나 개인적 관계가 알려진 바가 없다고 선언합니다.
감사의 글
ACS와 CNN은 "Health Sciences PhD Program, Universidad Católica de Murcia (UCAM), Campus de los Jerónimos nº 135, Guadalupe 30107, Murcia, Spain"에 속해 있으며 UCAM의 박사 학위 보조금을 보유하고 있습니다. 저자들은 전임상 분석이 수행된 IMIB(Instituto Murciano de Investigación Biosanitaria, Murcia)의 동물 시설 플랫폼에 감사를 표합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
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| 1 mL 불투명 마이크로튜브 | 에펜도르프 | 30125215 | D-루시페린 저장 |
| 15 mL 원뿔형 튜브 | 팔콘, 써모피셔 사이언티브 | 11507411 | 세포 배양 물질 |
| 고급 두베코 s 개조 이글 미디엄 (DMEM) | 써모피셔 사이언티브 | 1152046 | 세포 배양 시약 |
| 무서디크 누드 마우스 | 찰스 강 | CRL:NU(NCr)-Foxn1nu | 면역결핍 누드 마우스 |
| 생물발광 인간 대장암세포 HCT116 | ATCC | CCL-247-LUC2 | HCT 116-Luc2는 생체 내 생물발광에 이상적입니다 |
| D-루시페린 피어스 | 써모피셔 사이언티브 | 15215733 | 생물발광 측정을 위해 |
| 세포외 기질 (ECM) | 코닝 | 356231 | 세포 침범을 위한 매트리젤 매트릭스 |
| 태아 소 혈청 | 써모피셔 사이언티브 | 10500064 | 세포 배양 시약 |
| 필터 피펫 팁 | 핀팁, 써모피셔 사이언티픽 | 94056710 | 기포 형성을 방지하기 위해 |
| 인슐린 주사기 25 G 1 mL | 이베로메드 | JERINRAYS29 | 세포주 HCT-116 착상을 위한 |
| 인슐린 주사기 30G 0.5 mL | DH 머티브 메디코 | 9.41652E+15 | D-루시페린 투여를 위해 |
| Living Image 소프트웨어가 적용된 IVIS 이미지 시스템 | 퍼킨엘머/리브비티 | 128201 | 생물발광 및 형광 영상 스캐너 |
| 바늘 스테리칸 헤파린 | VWR | 612-0153 10 | D-루시페린 투여 및 HCT-116 이식 |
| 인산염 완충 식염수(PBS) | VWR | 392-0042P | HCT-116 박리 및 주입을 위한 세포 현탁액 |
| 트립신-EDTA | 써모피셔 사이언티브 | 11590626 | 세포 배양 시약 |
| T-75 플라스크, TC-처리됨 | 스타랩 | CC7682-41 | 세포 배양 물질 |
참고문헌
- Brough, D., Amos, H., Turley, K., Murkin, J. Trends in subcutaneous tumour height and impact on measurement accuracy. Cancer Inform. 22, 11769351231165181(2023).
- Hossain, M. S., et al. Colorecta....
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재인쇄 및 허가
