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방법 논문

Alu RNA 형질감염된 일차 마우스 망막 색소 상피: 연령 관련 황반변성에 대한 병리학적으로 관련된 시험관 내 모델

563 조회수

⸱

DOI:

10.3791/68570

⸱

2025년 10월 17일

 ,  ,  ,  , 
1Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, 2Department of Ophthalmology, Shanghai General Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, 3National Clinical Research Center for Eye Diseases, 4Shanghai Key Laboratory of Ocular Fundus Diseases

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 프로토콜에서 우리는 Alu RNA 형질감염을 사용하여 일차 마우스 망막 색소 상피(RPE) 세포에서 연령 관련 황반 변성(AMD)에 대한 병리학 관련 모델을 확립하는 전체 프로세스를 설명합니다.

초록

연령 관련 황반변성(AMD), 특히 비삼출성 AMD에는 인간 병리를 더 잘 복제하는 실험 모델이 필요합니다. 현재의 생체 내 모델은 기술적으로 까다롭고 시간 집약적인 반면, 기존의 시험관 내 시스템은 질병 특이적 병리학적 유발 요인을 요약하지 못합니다. 여기에서는 지리학적 위축 병리학에 직접적으로 관여하는 레트로트랜스포존인 Alu RNA로 형질감염된 일차 마우스 RPE 세포를 사용하여 망막 색소 상피(RPE) 변성 모델을 확립하는 방법을 제시합니다.

이 프로토콜은 1차 마우스 RPE 세포의 효소 분리에 이어 RPE 변성을 유도하기 위한 Alu RNA 형질감염에 대해 자세히 설명합니다. 검증은 형태학적(육각형 구조), 기능적(극성 손실 및 마우스 단백질 ZO-1 파괴) 및 분자 분석(정량적 PCR)을 통합합니다. 그 결과, 우리는 Alu RNA 형질감염에 의해 유발된 다인성 변화를 관찰했습니다: 염증성 사이토카인 분비(마우스 유전자 Ifn-β, Il-6, Tnf-α; p < 0.05) 및 세포 노화(마우스 유전자 p21 및 p53 상향 조절; p < 0.05). 기존의 급성 스트레스 모델과 비교하여 이 시스템은 표준화된 기술을 통해 AMD의 만성 염증-퇴행성 캐스케이드를 요약하여 재현성을 보장합니다. 단순화된 시험관 내 분석과 복잡한 생체 내 모델의 측면을 결합함으로써 이 접근법은 레트로트랜스포존 구동 메커니즘을 탐색하고 잠재적인 치료 후보를 스크리닝하기 위한 예비 플랫폼 역할을 할 수 있습니다.

서론

연령 관련 황반변성(AMD)은 전반적인 시각 장애의 주요 원인입니다. 그러나 비삼출성 AMD에 대한 효과적인 치료법은 여전히 제한적입니다. 따라서 질병 메커니즘을 밝히고 치료 표적을 식별하기 위한 재현 가능하고 효율적인 연구 모델이 시급히 필요합니다 1,2. 이러한 노력의 중심에는 브루흐막(맥락막)과 광수용체(망막) 사이에 위치한 단층인 망막 색소 상피(RPE)가 있으며, 이는 광수용체 기능을 지원하고 혈액-망막 장벽을 조절하며 노폐물 제거를 촉진함으로써 망막 항상성을 유지하는 데 중추적인 역할을 합니다 3,4.

RPE 세포의 기능 장애 또는 손실은 많은 망막 퇴행성 질환, 특히 AMD에서 RPE 기능 장애가 진행의 초기에 중요한 단계를 나타내는 두드러진 특징입니다 2,4,5. 특히, AMD의 진행 단계인 지리적 위축(GA)을 나타내는 환자에서 마이크로RNA 처리 효소 Dicer 1 리보뉴클레아제 III(DICER1)의 수치가 감소하면 RPE 변성과 직접 연결되고 인간 병리학과 관련된 레트로트랜스포존 전사체인 Alu RNA의 독성 축적이 발생합니다6.

요오드산나트륨(NaIO3) 모델 및 아밀로이드-β(Aβ) 모델과 같은 전통적인 생체 내 모델은 전신 질환의 복잡성을 유지하지만 심각한 한계에 직면해 있습니다. NaIO3 모델은 망막 산화 스트레스 및 RPE 손상을 빠르게 유도하지만, 급성 독성은 RPE와 광수용체를 모두 파괴하여 AMD의 만성 병리 관련 진행을 모방하지 못하고 미묘한 RPE 기능 장애에 대한 치료 평가를 모호하게 합니다7. 유사하게, Aβ 모델은 질병 특이적 스트레스 요인을 도입하지만 시험관 내 접근 방식에 비해 광범위한 기술 전문 지식과 연장된 일정이 필요합니다 8,9. 반면에 H2O2 및 하이드로퀴논 노출 모델과 같은 기존의 시험관 내 RPE 모델은 병리학적 관련성이 부족하여 독성 단백질 응집체 또는 염증 유발 요인과 같은 질병 특이적 스트레스 요인을 요약하지 못합니다1.

여기에서, 우리는 GA 병인에 직접적으로 관여하는 레트로트랜스포존 유래 비코딩 RNA인 Alu RNA를 사용하여 일차 마우스 RPE 세포에서 RPE 변성 모델을 확립하기 위한 상세한 프로토콜을 제공합니다6. Alu RNA는 염증 경로를 활성화하고 RPE 장벽 무결성을 손상시켜10,11 비삼출성 AMD와 관련된 병리학적 특징을 모방합니다. 이 방법은 RPE 세포의 효소 분리 및 배양을 사용한 후 Alu RNA를 사용하여 RPE 변성을 유도합니다. 또한 이 변성 모델을 평가하기 위해 형태학적(육각형 구조), 기능적(장벽 무결성 및 극성 손실) 및 분자(염증 및 노화 마커) 판독값을 결합한 포괄적인 검증 시스템을 제공합니다.

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프로토콜

이 연구는 Shanghai Jiao Tong University School of Medicine 부속 Shanghai General Hospital의 동물 윤리 위원회의 승인을 받았습니다. 이 프로토콜은 실험 동물에 관한 사무 관리 규정(국가 과학 기술 위원회에서 발행)과 시력 및 안과 연구 협회(ARVO)에서 제정한 안과 및 시력 연구에서 동물의 윤리적 사용에 대한 지침을 엄격히 준수합니다. 이 프로토콜에 사용된 재료와 관련된 자세한 내용은 재료 표 를 참조하십시오.

1. 일차 마우스 RPE 세포의 분리

  1. 코팅판 준비
    1. 150μL의 마트리겔과 13mL의 DMEM/F12(최종 농도 약 1.14%)의 비율로 마트리겔을 희석합니다.
    2. 희석된 마트리겔(48웰 플레이트의 경우 약 150μL)으로 플레이트 바닥을 고르게 코팅합니다. 37°C에서 밤새 배양하여 겔을 형성합니다.
  2. 용액 준비
    1. 10% 태아 소 혈청(FBS) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신으로 보완된 Dulbecco의 변형 독수리 배지/영양 혼합물 F-12(DMEM/F12)를 사용하여 완전한 RPE 배양 배지를 준비합니다.
    2. 4.5mL의 Earle's Balanced Salt Solution(EBSS)을 파파인 바이알(100단위/바이알)에 첨가하여 파파인 믹스를 준비합니다.
    3. DNase I 바이알(1,000 단위/바이알)에 500 μL의 EBSS를 첨가하여 DNase I 혼합물을 준비합니다.
    4. 250μL의 DNase I Mix를 4.5mL의 파파인 믹스에 첨가하여 파파인 소화 용액을 준비하고(최종 파파인 농도 22IU/mL를 달성하기 위해 공급업체에서 제공한 프로토콜을 조정함) 최종 부피를 4.75mL로 만듭니다.
  3. 안락사 및 조직 수집
    1. 150-200 mg/kg 체중의 5% 펜토바르비탈나트륨을 복강내 주사하여 2-3주 된 마우스를 안락사시킵니다. 심장 박동과 호흡의 정지를 확인하여 깊은 마취와 사망을 확인합니다.
    2. 표면 오염 물질을 제거하기 위해 적출하기 전에 안구 부위에 70% 에탄올을 철저히 분사합니다 12,13,14. 안와 주위 테두리를 부드럽게 눌러 지구를 돌출시킵니다. 그런 다음 집게를 사용하여 안구를 추출하고 시신경을 보존하여 쉽게 해부할 수 있습니다.
      참고: 모든 도구(예: 집게, 가위)는 고압멸균되며 무균 상태를 유지하기 위해 층류 후드 아래에서 절차가 수행됩니다.
    3. 안구를 37°C로 예열된 멸균 완전 RPE 배양 배지에 즉시 담급니다.
  4. 효소 소화
    알림: 효소 소화 및 후속 절차를 포함한 모든 단계는 멸균성을 유지하기 위해 층류 후드 아래에서 수행되어야 합니다.
    1. 안구를 접시로 옮기고 겸자를 사용하여 실체현미경으로 부착된 결합 조직과 잔여 외안근을 제거합니다.
    2. 예냉된 Dulbecco's Phosphate Buffered Saline(D-PBS; Ca2+/Mg2+ 없음, 4°C)으로 눈을 부드럽게 2회 헹굽니다.
      참고: 잔류 완전 RPE 배양 배지는 파파인 효소 활성을 손상시킬 수 있습니다.
    3. 1mL의 파파인 소화 용액에 눈을 완전히 담그고 37°C에서 45분 동안 배양합니다.
  5. RPE 세포 분리
    1. 소화 후 완전한 RPE 배양 배지로 효소 활성을 중화합니다.
    2. 안구를 접시에 옮기고 실체현미경으로 각막, 홍채, 수정체를 절제하고 후방 안컵을 보존합니다.
      참고: RPE 세포는 전체 공정 동안 (단일 세포로 해리되지 않고) 온전한 시트로 분리 및 유지되었습니다.
    3. 맥락막에서 망막-RPE 복합체를 분리한 다음 완전한 RPE 배양 배지에서 연속 시트로 망막에서 RPE 층을 벗겨냅니다. 분리된 RPE 층을 혼합물로 신선한 완전 RPE 배양 배지에 균일하게 수집한 다음 Matrigel 코팅 표면에서 배양합니다.
  6. 세포 배양
    1. 혼합물을 Matrigel 코팅 24웰 플레이트(면역염색을 위해 커버슬립의 웰당 8-10개의 안구), Matrigel 코팅된 48웰 플레이트(qPCR의 경우 웰당 6-8개의 안구) 또는 Matrigel 코팅된 96웰 플레이트(웰당 5-6개의 안구).
    2. 37°C에서 5% CO와 함께 배양합니다2. 완전한 RPE 배양 배지를 사용하여 48시간 후에 첫 번째 배지 교체를 수행합니다. 첫 번째 교체 후 48시간마다 배지를 교체하십시오.
      참고: RPE 세포의 극성을 최대한 유지하려면 반복적인 계대배양이 분화 및 기능적 무결성의 손실로 이어질 수 있으므로 가능하면 계대를 피하십시오.
  7. 세포 형태 모니터링
    1. 세포가 특징적인 육각형 형태를 가진 단층을 형성하도록 합니다. 거꾸로 된 세포 배양 현미경으로 형태를 모니터링합니다.

2. RPE 변성 모델의 유도

  1. Alu RNA 합성 및 검증
    1. 시험관 내 전사 시스템을 사용하여 Alu RNA를 합성합니다.
      참고: 본 연구에 사용된 Alu RNA의 합성은 Ambati Lab6에서 설명한 프로토콜을 기반으로 했습니다.
    2. RNA를 정제하고 미세 분광 광도계를 사용하여 품질을 확인합니다.
  2. Alu RNA 형질감염
    참고: 1차 RPE 세포 파종일을 0일로 지정했습니다. 5일째에 부착된 일차 RPE 세포는 균일한 형태를 나타내고 50% 이상의 세포 합류에 도달했으며, 이 시점에서 제조업체의 지침에 따라 양이온성 지질 기반 형질감염 시약을 사용하여 Alu RNA 형질감염을 수행했습니다.
    결과를 검증하기 위해 두 개의 대조군이 포함되었습니다: i) Alu RNA나 형질감염 시약이 모두 첨가되지 않고 저혈청 배지를 대체물로 사용한 음성 대조군(NC); ii) 리포솜 대조군(LC), Alu RNA는 생략되었지만 동일한 양의 형질감염 시약을 저혈청 배지와 혼합하여 세포에 적용하여 지방 유체 관련 효과를 제어했습니다. 다음 단계는 Alu RNA 형질감염 절차를 간략하게 설명합니다.
    1. 형질감염 절차 전에 기존 배지를 웰(48웰 플레이트)당 300μL의 완전 RPE 배양 배지로 교체합니다.
    2. 저혈청 배지에서 Alu RNA 및 양이온성 지질 기반 시약을 사용하여 형질감염 복합체를 준비합니다.
      1. 1.2 μL의 양이온성 지질 기반 시약 및 18.8 μL의 저혈청 배지로 Mix 1을 준비합니다. 부드럽게 혼합하고(소용돌이치지 않음) 실온에서 5분 동안 배양합니다.
      2. 6 μL의 Alu RNA(100 μg/mL) 및 14 μL의 저혈청 배지로 Mix 2를 준비합니다.
      3. 20 μL의 Mix 2를 20 μL의 Mix 1에 적가하여 형질감염 복합체를 준비합니다.
        참고: Alu RNA는 웰당 1.2 μL의 양이온성 지질 기반 시약(시약 1.2 μL: 0.6 μg RNA 비율)을 사용하여 웰당 0.6 μg의 최종 농도로 형질감염되었습니다.
      4. 부드럽게 넘겨 섞습니다. 그런 다음 실온에서 20분 동안 그대로 둡니다.
    3. 24웰 플레이트의 각 웰에 40μL/웰의 형질감염 복합체를 추가합니다. 플레이트를 37°C/5% CO2 인큐베이터에 48시간 동안 넣습니다.
    4. 형질감염 후 48시간 후에 qPCR, 면역염색 및 기타 실험 절차를 수행합니다.

3. 퇴화 모델의 검증

참고: 포괄적인 모델 검증 실험은 7일째에 수행되었습니다.

  1. 극성 및 장벽 무결성 평가를 위한 면역형광 염색
    1. 배양된 RPE 세포를 4% 메탄올이 없는 포름알데히드로 실온에서 20분 동안 고정합니다. 1x PBS로 3 x 10분 세척합니다.
    2. 인산염 완충 식염수(PBS)에서 5% 소 혈청 알부민(BSA)으로 1시간 동안 비특이적 결합을 차단합니다.
    3. 1차 항체 항-ZO1(3% BSA에서 1:1,000 희석) 및 Phalloidin 488(3% BSA에서 1:1,000 희석)과 함께 빛을 피하고 밤새 4°C에서 배양합니다.
    4. PBS로 세포를 3 x 10분 부드럽게 세척합니다.
    5. 2차 항체(3% BSA에서 1:1,000 희석)와 함께 실온에서 1시간 동안 배양합니다.
    6. 샘플을 1x PBS로 3 x 10분 세척합니다.
    7. DAPI(PBS에서 1:1,000 희석)로 10분 동안 대조염색합니다.
    8. 샘플을 1x PBS로 3 x 10분 동안 세척합니다.
    9. 24웰 플레이트에서 커버슬립을 조심스럽게 제거하고 마운팅 매체 한 방울이 미리 로드된 유리 슬라이드 위에 놓습니다. 40x/0.95 대물렌즈를 사용하여 공초점 이미지를 캡처합니다.
  2. 노화 및 염증 표지자에 대한 정량적 PCR(qPCR)
    참고: 글리세르알데히드-3-인산 탈수소효소(마우스 유전자 Gapdh)를 임계값 주기(Ct) 값의 정규화를 위한 내부 참조 유전자로 사용했습니다. 모든 정량적 PCR(qPCR) 반응에는 실험군당 3개의 생물학적 반복이 포함되었습니다. 프라이머 서열은 보충 표 S1에 제공된다.
    1. RNA 추출
      1. 용해 완충액(Total RNA Kit)을 배양 플레이트(표면적 10cm²당 1mL)에 첨가하고 실온에서 5분 동안 배양합니다.
      2. 13,400 × g 에서 4°C에서 5분 동안 원심분리합니다. 상청액을 새로운 RNase가 없는 튜브로 옮깁니다.
        참고: 샘플에 파편(예: 투명 세포 용해물)이 없는 경우 이 단계를 건너뜁니다.
      3. 200μL의 클로로포름을 상청액에 첨가하고 15초 동안 소용돌이치고 실온에서 3분 동안 배양합니다.
      4. 13,400 × g 에서 4°C에서 10분 동안 원심분리합니다. 상부 수성상(~500μL)을 새 튜브로 옮깁니다.
      5. 수성상에 0.5부피의 에탄올을 첨가합니다. 피펫팅으로 부드럽게 섞습니다.
      6. 혼합물을 실리카 멤브레인 컬럼(Total RNA Kit에 포함됨)에 로드합니다. 13,400 × g 에서 30초 동안 원심분리합니다. 플로우스루를 버립니다.
      7. 500 μL의 단백질 제거 완충액(Total RNA Kit)을 컬럼에 추가합니다. 13,400 × g 에서 30초 동안 원심분리합니다. 플로우스루를 버립니다.
      8. 500μL의 세척 완충액(Total RNA Kit)을 컬럼에 추가합니다. 13,400 × g 에서 30초 동안 원심분리합니다. 플로우스루를 버립니다.
      9. 이전 단계 3.2를 반복합니다.
      10. 빈 컬럼을 13,400 × g 에서 2분 동안 원심분리하여 멤브레인을 건조시킵니다.
      11. 멤브레인에 30-100μL의 RNase가 없는 물을 첨가하여 RNA를 용리합니다. 실온에서 2분 동안 배양합니다. 13,400 × g에서 2분 동안 원심분리합니다.
    2. 상보적 DNA(cDNA) 합성
      1. 260nm 및 280nm에서 분광 광도계를 사용하여 RNA 농도를 측정합니다.
        참고: 1.8과 2.0 사이의A 260/A 280 비율은 허용 가능한 RNA 순도와 관련이 있는 것으로 간주됩니다.
      2. RNase가 없는 튜브에서 반응 혼합물을 준비합니다: RNA 주형(500-1,000ng): X μL(농도 관련), 5x 역전사 완충액: 4μL, RNase가 없는 물: 20μL까지.
      3. 다음 프로그램을 사용하여 열 순환기에서 반응 혼합물을 배양합니다: 37°C에서 15분, 85°C에서 5초, 4°C에서 무기한 유지.
    3. qPCR
      1. 각 반응에 대한 qPCR 마스터 믹스 준비(총 10 μL): TB Green(Premix Taq에 포함): 5 μL, ROX 염료(Premix Taq에 포함): 0.2 μL, 포워드 프라이머(1 μM): 0.2 μL, 리버스 프라이머(1 μM): 0.2 μL, RNase가 없는 물: 3.4 μL, cDNA 주형: 1 μL.
      2. 10 μL의 마스터 믹스를 96웰 플레이트의 각 웰에 첨가합니다.
      3. 접착식 광학 커버로 플레이트를 밀봉합니다. 300 × g 에서 1분 동안 원심분리합니다.
      4. 실시간 PCR 시스템에서 다음 프로그램을 실행합니다. 1단계: 30초 동안 95°C; 2단계: 40회 사이클: 95°C에서 5초, 60°C에서 30초; 3단계: 용융 곡선 분석.
      5. 2-ΔΔCt 방법15를 사용하여 표적 mRNA의 상대적 발현 수준을 계산합니다.

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결과

Alu RNA 형질감염 전 1차 마우스 RPE 세포
0일(그림 1)에 일차 마우스 RPE 세포를 분리하고 건강한 RPE 세포의 전형적인 특징적인 육각형 형태를 나타냈습니다. 이 세포는 잘 조직된 단층을 유지했습니다. 세포는 육각형 모양과 잘 정의된 경계에서 알 수 있듯이 초기 구조적 조직과 긴밀한 접합의 형성을 허용하도록 배양되었습니다. 이 형태는 RPE 변성의 후속 유도를 위한 기준선 역할을 했습니다. RPE 장벽의 무결성도 이 단계에서 보존되어 5일차에 Alu RNA 형질감염을 수행하기 전에 세포가 기능적 상태에 있는지 확인했습니다(그림 1). 이러한 관찰은 RPE 세포의 성공적인 분리 및 초기 배양을 확인시켜 Alu RNA 형질감염이 세포 형태 및 기능에 미치는 영향을 연구하기 위한 신뢰할 수 있는 기반을 제공합니다.

...

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토론

우리의 목표는 최소한의 자원 제약으로 고해상도 이미징 및 기계론적 분석을 가능하게 하는 재현 가능하고 접근 가능한 RPE 손상 모델을 확립하는 것이었습니다. 이 접근법은 공초점 Z-스택 이미징(0.5μm 스텝 크기)을 통해 정점 밀착 접합 단편화 및 기저 세포골격 파괴를 포함하여 대조군과 비교하여 Alu RNA 유도 구조 파괴를 명확하게 시각화했습니다. 시스템의 신뢰성을 보장하는 두 가지 중요한 단계인 효소 분해와 Alu RNA 형질감염입니다. 파파인 기반 분리(22 IU/mL, 37°C, 45분)를 사용하여 편광과 일치하는 구조적 특징을 관찰하고 특징적인 육각형 형태(그림 1A, B)에 의해 부분적으로 입증된 바와 같이 긴밀한 접합 무결성을 달성했습니다. 특히, 수정은 프로토콜 적응성을 향상시킬 수 있습니다. 최적이 아닌 RPE 수율을 위해서는 출생 후 연령에 따라 ±10분 이내에 효...

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공개 사항

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

감사의 글

이 작업은 과학 기술 혁신 행동 계획 의료 혁신 연구 특별 프로젝트(23Y11901300), 중국 국가 자연 과학 재단(82171076) 및 상하이시 교육위원회(2023ZKZD18)의 부분 지원을 받았습니다. Alu RNA의 친절한 선물에 대해 L.Z 교수님께 감사드립니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1300 시리즈 클래스 II, 유형 A2 생물학적 안전 캐비닛써모 사이언티픽
37 ° C/5% CO2 인큐베이터써모 사이언티픽
4% 파라포름알데히드(PFA)서비스바이오G1101-500ML
인간 Alu RNAL.Z.가 선물한
항토끼 2차 항체, Alexa Fluor 568(염소)Invitrogen Thermo ScientificA11011
Applied Biosystems MicroAmp 접착식 광학 커버써모 피셔 사이언티픽
Applied Biosystems MicroAmp 광학 96웰 반응 플레이트써모 피셔 사이언티픽
Applied Biosystems ViiA 7 실시간 PCR 시스템써모 피셔 사이언티픽정량적 유전자 발현 분석을 위한 Real-Time PCR 시스템
소 혈청 알부민(BSA, 분획 V)비요틴ST023-50g
Carl Zeiss Primovert 도립 세포 배양 현미경자이스세포 형태 모니터링용
원심분리기 5424 R에펜도르프
클로로포름시그마RNA 추출의 상 분리.
공초점 레이저 스캐닝 현미경(LSM900+Cell discover 7)자이스면역형광 마커(예: ZO-1 및 F-액틴)의 고해상도 이미징.
Costar 24/48/96 웰 플레이트코 닝
커버슬립써모 피셔 사이언티픽면역형광 이미징을 위해 24웰 플레이트에 사용됩니다.
DAPI열62248
디지털 건식 목욕뮬랍
DMEM/F12깁코RPE 세포를 성장시키는 배지 
Dulbecco's Phosphate-Buffered(D-PBS)쉐어바이오SB-CR017
얼' s 균형 염 용액(EBSS)깁코RPE 분리 중 파파인 및 DNase I 희석에 사용되는 균형 염 용액.
에탄올(절대)시그마RNA 침전 및 컬럼 세척.
태아 소 혈청(FBS)시그마완전한 RPE 세포 배양 배지의 경우
집게해부용
Lipofectamine 3000 (양이온성 지질 기반 형질감염 시약)써모 피셔L300015Alu RNA를 RPE 세포로 형질감염시키기 위해
마트리겔코 닝356234RPE 접착 및 분극을 지원하는 코팅 플레이트용 매트릭스(1.14% 희석).
메탄올 프리 포름알데히드써모 사이언티픽면역형광에서 에피토프 보존을 위한 대체 고정제(4%)
마이크로피펫에펜도르프
Nanodrop 2000 분광 광도계써모 사이언티픽RNA 농도 및 순도 측정
Nikon ECLIPSE Ti-S 형광 도립 현미경니콘염색된 샘플의 형광 이미징
Olympus SZX16 실체현미경올림푸스마우스 안구 해부 및 RPE 분리용
옵티-MEM깁코형질감염 복합체 준비를 위한 저혈청 배지
파파인 해리 시스템워 딩 턴LK003150작용 효소용
페니실린-스트렙토마이신 깁코완전한 RPE 세포 배양 배지의 경우
펜토바르비탈 나트륨염시그마안락사 요원
팔로이딘 488 아브캠176753극성 평가용
PrimeScript RT 시약 키트타카라RR037AcDNA 합성을 위한 역전사 키트(qPCR 템플릿 준비)
RNAsimple 총 RNA 키트티앙겐DP419 시리즈RNA 추출용
TB 그린  Premix Ex Taq  (Tli RNaseH Plus)타카라RR420AqPCR의 경우
ZO-1 토끼 다클론 항체프로틴테크21773형태학적 평가용

참고문헌

  1. Malek, G., Busik, J., Grant, M. B., Choudhary, M. Models of retinal diseases and their applicability in drug discovery. Expert Opin Drug Discov. 13 (4), 359-377 (2018).
  2. Fleckenstein, M., Schmitz-Valckenberg, S., Chakravarthy, U. Age-related macular degeneration. JAMA. 331 (2), 141-157 (2024).
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Alu RNA 형질전환일차 마우스 망막색소상피망막색소상피 퇴행효소적 분리염증성 사이토카인 분비세포 노화정량적 PCR만성 염증

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