방법 논문

이중 양식 분자 지도 제작: 다중 mRNA 검출과 단백질 이미징 질량 세포 분석의 통합

DOI:

10.3791/68616

⸱

2025년 11월 14일

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Gynecologic Oncology and Reproductive Medicine, The University of Texas MD Anderson Cancer Center, 2Department of Hematopoietic Biology & Malignancies, The University of Texas MD Anderson Cancer Center, 3Department of Leukemia, The University of Texas MD Anderson Cancer Center

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 프로토콜은 포르말린 고정 파라핀 포매 조직 절편에서 단백질 이미징 질량 세포 분석을 통한 다중 mRNA 검출 방법론을 자세히 설명합니다.

초록

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동일한 분석에서 단백질과 mRNA를 검출하는 기능은 세포가 도착을 위해 어떻게 준비하고 있는지, 그리고 세포가 자신이 처한 환경에서 이동하고 상호 작용할 때 어떤 신호를 받는지 이해하는 데 도움이 됩니다. 고층 이미징을 통해 이제 공간적으로 분해된 mRNA(공간 전사체학)와 단백질(공간 단백질체학)의 특성화를 동시에 수행할 수 있습니다. 중복성을 피하기 위해 이러한 분석물은 단일 조직 절편에서 분석할 수 있습니다. 많은 단백질과 적은 mRNA 또는 그 반대를 허용하는 많은 기술이 있지만 중심 작용 분석물은 단백질이기 때문에 이 원고는 금속 프로브를 활용하는 단백질 이미징 질량 세포 분석(IMC)과 mRNA in situ hybridization(ISH)을 통합하는 데 중점을 둡니다. 이를 통해 세포가 미세 환경에서 통신할 때 어떤 메시지를 프라이밍하거나 세상에 빠르게 보내고 있는지 이해할 수 있습니다. 또한 일반적으로 항체만을 사용하여 정량화하고 시각화하기 어려운 분비된 단백질 또는 까다로운 마커의 검출과 관련된 한계를 극복합니다. 이 프로토콜은 또한 금속 프로브 기반 검출 시스템에는 형광 스펙트럼 유출이 없고 조직 특이적 자가형광 고려 사항도 없기 때문에 고층 형광 기반 방법에서 볼 수 있는 보상 또는 후처리의 필요성을 최소화합니다.

서론

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암은 다양한 환자에서 구조적, 기능적 다양성을 나타냅니다. 정상 세포와 악성 세포로 구성된 종양 미세환경(TME)은 환자들 사이에서 이질적입니다. 전이는 원발성 종양의 잔류물이 세포 클러스터 및 단일 세포로 혈류로 빠져나가는 결과이며, 이는 질병 진행 및 치료 반응에 대한 단서를 제공합니다 1,2. 이러한 미세 환경의 복잡성을 이해해야 합니다1. 종양은 충분한 세포 유형으로 구성되어 있지만 임상 표준은 조직학적으로 단일 마커를 기반으로 하며 이는 변화하기 시작합니다 1,2. 다중 이미징 기술은 병리학에 새로운 방향을 제시했습니다. 인간 암의 공간적으로 분해된 단백질체학, 유전체학, 대사체학 및 지질체학은 이제 단일 세포 분해능 또는 그 근처에서 가능합니다 3,4,5,6.

이러한 기술은 종양의 이질적인 세포 위치와 상호 작용을 해부할 수 있습니다. 적절한 단일 세포 바이오이미징 방법론을 활용하면 환자 생검에서 많은 질병 관련 단백질 바이오마커의 프로필을 생성하여 암 치료법 설계를 알릴 수 있습니다. 공간 세포 지도의 통찰력은 표적이외, 저항성 및 재발이 감소한 암을 효율적으로 제거할 수 있는 병용 요법에 대한 선택을 안내할 수 있습니다1. 문제는 일반적으로 조직의 동일한 부분에서 조화롭게 작동하지 않는 이러한 다양한 기술을 노조화할 수 있는 능력입니다7. 그림 1에 시각적으로 설명된 이 프로토콜은 동시 형광 단백질+RNA-ISH8로 가능한 것보다 더 높은 플렉시티에서 동일한 조직 절편 및 동일한 세포에서 단백질체학과 mRNA의 표적 하위 집합을 동시에 공간적으로 검사할 수 있는 기회를 제공합니다. 이것은 또한 데이터 분석을 디콘볼루트하는 것을 목표로 병렬 분석(3,4,6)을 위한 브리지 역할을 할 수 있다. 이중 검출이 존재하는 동안 mRNA 생산이 빠르게 시작되었지만 직접 표지된 1차 항체 방법에 내재된 제한된 민감도와 신호 증폭 부족으로 인해 분비된 단백질이 검출되지 않는 세포도 검사할 수 있어 분비 분자의 검출이 특히 어렵습니다. 다음 프로토콜은 IMC에서 동시 검출을 위해 티올 환원 변형 프로브를 통한 금속 기반 검출에 적용할 수 있도록 12-플렉스 형광/발색 검출에서 채택되었습니다.

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프로토콜

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이 프로토콜은 고급 장액성 난소 암종에 대한 1차 세포감소 수술을 받는 이전에 치료받지 않은 환자로부터 수집한 포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 조직을 사용합니다. 모든 임상 데이터는 텍사스 대학교 MD 앤더슨의 임상시험검토위원회(Institutional Review Board)가 승인한 프로토콜에 따라 부인과 종양학 및 생식의학과의 저장소에서 얻었습니다. 환자로부터 서면 동의서를 얻었고 공인된 윤리 지침에 따라 연구를 수행했습니다.

1. 주의사항 및 준비

  1. 항상 뉴클레아제가 없는 물(NFW)을 사용하여 필요한 모든 시약을 준비하십시오.
  2. 유리에 대한 금속 결합 및 금속 오염을 줄이기 위해 유리를 사용하지 않고 플라스틱 용기를 사용하여 모든 단계를 수행합니다.
  3. 작업 영역을 매우 깨끗하게 유지하고 표면과 피펫에 RNase 오염 제거 용액을 뿌린 다음 NFW로 준비한 70% 에탄올을 뿌립니다.
  4. Schulz etal 7에 의해 설명된 바와 같이 말레미드 링커를 통해 티올화된 mRNA 검출 프로브(T1-T12)를 적절한 금속에 접합시키며, protocol.io 에 자세히 설명되어 있습니다.
    참고: 단백질 표적은 조직 내에서 세포의 위치(구조 마커)를 나타내고, 어떤 세포가 존재하는지(표현형 마커) 및 세포가 하는 일(기능적 마커)을 식별하기 위해 선택해야 합니다. 일부 기능적 마커는 일시적으로 발현되기 때문에 mRNA 표적을 포함하면 이러한 표적을 생성하는 세포를 식별할 수 있습니다.

2. 시료 준비 및 전처리

  1. 조직 절편을 60°C의 건조 오븐에서 밤새 굽습니다.
  2. 탈파라핀화 수행: 각 라운드 5분 동안 자일렌을 3회 투여하고 10회 재수화(100% 에탄올(EtOH) x2, 95% EtOH x2, 70% EtOH x2, 50% EtOH x2, 30% EtOH x2)를 각 라운드 3분 동안 실시합니다. 1x 트리스 완충 식염수(TBS)로 2분 동안 한 번 세척합니다. 동시에 처리되는 샘플 수에 따라 50mL 원뿔형 튜브(최대 슬라이드 2개) 또는 350mL IHC 염색 카세트(최대 슬라이드 24개)를 사용합니다.
    참고: 이 탈랍 단계는 권장되지만 선택 사항이며 조직 유형에 따라 다릅니다.
  3. 조직 절편을 덮기에 충분한 PFA 용액과 함께 50mL 튜브에서 조직 슬라이드를 배양하여 3.7% 파라포름알데히드(PFA) 용액을 10분 동안 도포합니다.
  4. 마이크로파를 사용한 열 유도 항원 회수(HEIR): 온도 모니터링 전자레인지를 사용하여 한 트레이에 pH 6 HEIR 항원 회수 완충액(350mL)을 채우고 나머지 트레이에 NFW를 채웁니다. 조직 절편을 현미경 슬라이드용 염색 선반에 넣고 항원 회수 완충액이 있는 트레이에 추가합니다.
    참고: 항원 회수를 수행할 때 사용하기 전에 항원 회수 완충액이 실온(RT)에 있는지 확인하십시오.
  5. 107°C에서 15분 동안 항원 회수를 수행한 다음 조직 슬라이드를 화학 후드에서 20분 동안 RT에서 식힙니다.
  6. 항원 회수 시 가습지를 물로 헹구고 습도 조절 슬라이드 염색 트레이에 넣고 트레이를 60°C의 하이브리드화 오븐에 넣습니다.
  7. RNase가 없는 TBS에서 슬라이드를 3분 동안 헹구고 슬라이드를 3분 동안 건조시킵니다.

3. 프로테아제 처리

  1. 소수성 장벽 펜으로 각 조직 절편 주위에 소수성 장벽을 그립니다. 장벽을 약 2분 동안 완전히 건조시킵니다.
  2. 스윙 cl을 열어 마른 슬라이드를 습도 트레이의 슬라이드 홀더에 넣습니다.amp.
  3. 조직 절편을 완전히 덮을 수 있을 만큼 충분한 프로테아제 방울을 추가합니다. 하이브리드화 오븐에서 예열된 습도 조절 트레이(60°C, 2.6단계)를 제거하고 슬라이드 홀더를 습도 조절 트레이에 삽입합니다. 습도 조절 트레이를 다시 밀봉하고 하이브리드화 오븐에 다시 넣습니다. 40°C에서 30분 동안 배양합니다.
  4. 이 배양 동안 RNA-ISH 분석 재료를 준비합니다.
    1. 50x 스톡을 NFW로 희석하여 500mL의 1x RNA-ISH 세척 완충액을 준비합니다. RT에서 최대 1개월까지 보관하십시오.
      참고: 50x 세척 완충액에서 침전이 발생하면 1x 세척 완충액을 준비하기 전에 완충액을 10-20분 동안 40°C로 가열하여 재현탁합니다.
  5. 1L의 DPBS-T에 5mL의 Tween을 첨가하여 NFW에서 1L의 DTBS-T(0.5% Tween)를 준비합니다.
  6. RNA-ISH ZZ-paired 표적 프로브를 준비합니다.
    1. mRNA 프로브 스톡과 RNA-ISH 희석액을 40°C에서 건조 오븐에서 10분 동안 데웁니다. 프로브를 소용돌이치고 벤치탑 미니 원심분리기에서 회전시킵니다.
    2. 스톡 50x 프로브를 RNA-ISH 희석액으로 희석하여 1x 혼합물(최대 12개 프로브, 표 1)을 준비하고 전체 조직 절편을 덮을 수 있는 충분한 최종 부피가 있는지 확인합니다.
    3. 웰텍스를 잘 소용돌이치고 혼합 프로브와 RNA-ISH 희석제를 사용할 때까지 RT에서 그대로 둡니다.
  7. 하이브리드화 오븐에서 습도 조절 트레이를 제거하고 슬라이드 홀더를 제거합니다. 트레이를 오븐에 다시 넣습니다.
  8. 슬라이드를 NFW로 미리 세척된 투명 슬라이드 홀더에 놓습니다. NFW에서 슬라이드를 5분 동안 약간 교반하면서 세척합니다.
  9. 신선한 NFW로 5분 동안 세척 단계를 반복합니다.

4. 표적 프로브 하이브리드화

  1. 슬라이드에서 여분의 액체를 제거합니다. 오븐에서 습도 조절 트레이를 제거하고 슬라이드 홀더를 트레이에 넣습니다.
  2. 각 조직 절편을 완전히 덮을 수 있을 만큼 적절한 프로브 혼합물을 충분히 추가합니다. 트레이를 닫고 40°C에서 2시간 동안 오븐에 삽입합니다.
  3. RNA-ISH 증폭기 1(꼬리 T1에서 T4까지의 ZZ 꼬리 트리) 시약을 넣어 배양 종료 30분 전에 RT에서 평형을 이루고 5.2단계에서 사용합니다.
  4. 배양이 완료되면 하이브리드화 오븐에서 습도 조절 트레이를 제거하고 슬라이드 홀더를 제거합니다. 트레이를 오븐에 다시 넣습니다.
  5. 슬라이드를 NFW로 미리 세척된 투명 슬라이드 홀더에 놓습니다. 슬라이드를 1x 세척 완충액으로 2분 동안 약간 교반하면서 세척합니다.
  6. RT에서 2분 동안 신선한 1x 세척 완충액으로 세척 단계를 반복합니다.

5. RNA-ISH 증폭기 1 혼성화

  1. 슬라이드에서 여분의 액체를 제거하고 슬라이드를 습도 트레이의 슬라이드 홀더에 놓습니다. 슬라이드 홀더를 습도 조절 트레이에 삽입합니다.
  2. Vortex RNA-ISH Amplifier 1을 추가하여 각 섹션을 완전히 덮습니다. 트레이를 닫고 40°C에서 30분 동안 하이브리드화 오븐에 삽입합니다. RNA-ISH 증폭기 2(꼬리 T5 내지 T8용 ZZ 꼬리 트리) 시약을 RT에 놓아 6.2단계에서 사용합니다.
  3. 하이브리드화 오븐에서 습도 조절 트레이를 제거하고 슬라이드 홀더를 제거합니다. 트레이를 오븐에 다시 넣습니다.
  4. 슬라이드를 NFW로 미리 세척된 투명 슬라이드 홀더에 놓습니다. 슬라이드를 1x 세척 완충액으로 2분 동안 약간 교반하면서 세척합니다.
  5. RT에서 2분 동안 신선한 1x 세척 완충액으로 세척 단계를 반복합니다.

6. RNA-ISH 증폭기 2 혼성화

  1. 슬라이드에서 여분의 액체를 제거합니다. 오븐에서 습도 조절 트레이를 제거하고 슬라이드 홀더를 트레이에 넣습니다
  2. Vortex RNA-ISH Amplifier 2를 추가하여 각 섹션을 덮습니다. 트레이를 닫고 40°C에서 30분 동안 하이브리드화 오븐에 삽입합니다.
  3. RNA-ISH 증폭기 3(꼬리 T9 내지 T 12용 ZZ 꼬리 트리) 시약을 RT에 놓고 7.2단계에서 사용합니다. 트레이에서 슬라이드 홀더를 제거합니다. 트레이를 오븐에 다시 넣습니다.
  4. 슬라이드를 NFW로 미리 세척된 투명 슬라이드 홀더에 놓습니다. 슬라이드를 1x 세척 완충액으로 2분 동안 약간 교반하면서 세척합니다.
  5. RT에서 2분 동안 신선한 1x 세척 완충액으로 세척 단계를 반복합니다.

7. RNA-ISH 증폭기 3 혼성화

  1. 슬라이드에서 여분의 액체를 제거합니다. 오븐에서 습도 조절 트레이를 제거하고 슬라이드 홀더를 트레이에 넣습니다
  2. Vortex RNA-ISH Amplifier 3을 추가하여 각 섹션을 완전히 덮습니다. 트레이를 닫고 40°C에서 30분 동안 하이브리드화 오븐에 삽입합니다.
  3. 배양하는 동안 8단계를 위해 금속 올리고 혼합물을 준비합니다. 각 올리고는 1:15의 농도로 사용됩니다(10uM 스톡에서 전체 조직 절편을 덮을 수 있는 충분한 최종 부피가 있는지 확인). 소용돌이치고 혼합 금속 올리고를 사용할 때까지 RT에 그대로 둡니다. 오븐에서 습도 조절 트레이를 꺼낸 다음 트레이에서 슬라이드 홀더를 제거합니다. 그런 다음 트레이를 오븐에 다시 넣으십시오
  4. 슬라이드를 NFW로 미리 세척된 투명 슬라이드 홀더에 놓습니다. 슬라이드를 1x 세척 완충액으로 2분 동안 약간 교반하면서 세척합니다.
  5. RT에서 2분 동안 신선한 1x 세척 완충액으로 세척 단계를 반복합니다.

8. 금속 올리고 혼성화

  1. 슬라이드에서 여분의 액체를 제거합니다. 오븐에서 습도 조절 트레이를 제거하고 슬라이드 홀더를 트레이에 넣습니다. 7.3단계(사용 전 와류)에서 제조한 혼합 금속 올리고를 첨가한다.
  2. 트레이를 닫고 40°C에서 45분 동안 혼성화 오븐에 삽입합니다.
  3. 하이브리드화 오븐에서 습도 조절 트레이를 제거하고 슬라이드 홀더를 제거합니다. 트레이를 오븐에 다시 넣습니다.
  4. 슬라이드를 NFW로 미리 세척된 투명 슬라이드 홀더에 놓습니다. 슬라이드를 1x 세척 완충액으로 2분 동안 약간 교반하면서 세척합니다.
  5. RT에서 2분 동안 신선한 1x 세척 완충액으로 세척 단계를 반복합니다.

9. 금속 접합 항체

  1. 비특이적 부위를 차단하려면 전체 조직 절편을 덮을 수 있을 만큼 충분한 양의 차단 완충액을 적용하고 RT에서 30분 동안 배양합니다.
  2. 배양하는 동안, 항체 희석액 완충액에서 항체(표 1)를 희석하여 10.1단계에서 사용할 항체 혼합물을 준비한다.

10. 금속 접합 항체와의 배양

  1. 차단 완충액 배양 후, 조직 슬라이드에서 차단 완충액을 버리고 전체 조직 절편을 덮을 수 있을 만큼 충분한 양의 Ab 혼합물(단계 9.2부터)을 분배합니다.
  2. 슬라이드를 습도 챔버에 놓고 4°C에서 밤새도록 배양합니다(~16시간).

11. DNA 염색

  1. 새로운 Ir-Intercalator 용액을 준비합니다.
    1. 500 μM 원액에서 RNase-free TBS에서 1:2000 작업 용액을 준비합니다. 작업 용액은 분취하여 -20°C에서 보관할 수 있습니다(동결-해동하지 않음).
  2. 슬라이드를 NFW로 미리 세척된 투명 슬라이드 홀더에 놓습니다. TBS-T 완충액에서 슬라이드를 5분 동안 약간 교반하면서 세척합니다.
  3. TBS-T에서 세척을 반복합니다.
  4. RT에서 5분 동안 Ir 작업 용액(단계 11.1.1부터)으로 슬라이드를 염색합니다.
  5. 슬라이드를 NFW로 미리 세척된 투명 슬라이드 홀더에 놓습니다. TBS-T 완충액에서 슬라이드를 5분 동안 약간 교반하면서 세척합니다.
  6. TBS-T에서 세척을 반복합니다.
  7. TBS에서 5분 동안 두 번 세척합니다(천천히 저어줍니다).
  8. 슬라이드를 ddH2O에 빠르게 담그어 조직의 TBS에 존재하는 염의 결정화를 방지합니다.
  9. 화학 후드 아래에서 슬라이드를 건조시키고(10분) 이미지 획득이 있을 때까지 4°C에서 보관합니다.

12. 이미지 획득

  1. 슬라이드를 IMC의 절제 챔버에 로드합니다.
  2. 파노라마 이미지를 캡처하여 관심 영역(ROI)을 식별합니다.
  3. 이미지 획득 소프트웨어에서 ROI를 매핑합니다.
  4. 획득 템플릿을 적용합니다.
  5. 샘플 유형에 따라 레이저 출력(절제 에너지)을 조정합니다. 기본값은 0dB로 설정되어 있습니다.
    참고: 여러 개의 작은 조직 영역(30μm x 30μm)으로 절제 에너지를 테스트하여 매번 1dB씩 전력을 높이는 것이 좋습니다. 슬라이드에 타지 않고 시편을 제거하는 가장 낮은 절제 에너지를 선택하십시오. 일반적으로 레이저 출력은 3-4dB입니다. 때때로 조직이 권장 것보다 두꺼우면 레이저 출력이 5dB로 증가합니다.
  6. 레이저 절제를 시작합니다. 이 시스템은 레이저를 ROI로 향하게 하고 금속 태그가 부착된 단백질을 제거하여 유도 결합 플라즈마(ICP) 토치로 전달되는 에어로졸 기둥을 생성하며, 여기서 기둥은 플라즈마에서 기화, 분무 및 이온화됩니다.
  7. 검출기에서 측정하고 데이터로 변환되는 각 동위원소의 양을 측정합니다.

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결과

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동일한 분석에서 단백질과 mRNA를 검출하는 기능은 세포가 도착을 위해 어떻게 준비되고 있는지뿐만 아니라 이동하고 환경과 상호 작용할 때 어떤 대기열을 받고 있는지 이해하는 데 도움이 됩니다. 대표적인 데이터에서 볼 수 있듯이 mRNA 및 단백질 검출은 라벨링, 검출기 및/또는 이미징 단계의 진행 방식에 따라 검출 하한이 상당히 어려울 수 있기 때문에 공간 생물학 연구에서 중요한 구성 요소입니다. 프로테아제를 포함하는 것만으로도 결합된 프로토콜에서 중요한 마커가 복잡해질 수 있으므로 중복성은 검증뿐만 아니라 명확화입니다.

이 프로토콜은 28개의 금속 접합 항체와 12개의 mRNA 프로브로 구성된 분석을 제시합니다(표 1). 그림 2에서 볼 수 있듯이 CD8 T 세포의 활성화 상태는 다양할 수 있으며 서로 다른 마커의 조합으로 평가할 수 ...

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토론

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멀티플렉스 멀티오믹스는 질병 진행 및 치료에 영향을 미치는 세포 간 및 세포 간 상호 작용을 표적으로 하는 수집된 데이터의 중요한 진화입니다. 동일한 샘플 및 동일한 세포에서 이 데이터를 분석하는 것은 많은 단백질 표적이 일시적으로 발현되거나 mRNA 및 단백질 발현 수준이 다르기 때문에 매우 중요하며, 따라서 단백질과 결합된 표적 mRNA 검출을 도입하면 검출하기 어렵거나 차등적으로 발현하는 표적을 수용할 수 있습니다21. RNA-ISH 기술과 IMC의 통합에 대한 최근의 발전으로 인해 동일한 조직 슬라이드 22,23,24,25에 다중 오믹스가 통합되어 단일 세포 해상도에서 전사체학과 단백질체학을 직접 통합할 수 있습니다.

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공개 사항

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Jared K. Burks는 Standard BioTools의 컨설턴트입니다.

감사의 글

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

이 연구는 M. D. Anderson의 암 센터 지원 보조금 P30 CA016672를 통해 국립 보건원(National Institutes of Health)이 부분적으로 지원하는 유세포 분석 및 세포 이미징 핵심 시설과 공동으로 수행되었습니다. 이 연구는 또한 MD Anderson's Cancer Center의 지원 보조금 개발 상, RNAscope, P30CA016672, NIH/NCI, PI - Pisters 를 통한 Imaging Mass Cytometry Spatial Transcriptomics의 부분적인 지원을 받았습니다. JKB의 노력은 P30 CA016672와 NCI 연구 전문가 1 R50 CA243707-01A1의 지원을 부분적으로 받았습니다. SFB의 노력은 난소암 연구 연합(OCRA 811621 및 891490), 난소암 연구를 위한 명예로운 Tina Brozman 재단, MDACC 난소암 포자 발달 연구 프로그램, NIH 1R01CA261952-01A1의 지원을 받았습니다. SFB, JKB 및 BG의 노력은 부분적으로 1U01CA294459-01 보조금의 지원을 받았습니다. 저자는 사용된 샘플을 절편화하고 제공한 Samuel Mok에게 감사를 표하고 싶습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
그리고 nbsp; https://www.protocols.io/view/oligonucleotide-polymer-conjugation-for-imaging-ma-dm6gpjz91gzp/v2.Protocols.IOdx.doi.org/10.17504/protocols.io.dm6gpjz91gzp/v2영상 질량 세포검사 V.2 를 위한 올리고뉴클레오타이드-폴리머 결합;
10배 TBS RNAse 프리서모 피셔 사이언티픽  J62780. K7단계 사이에 간헐적으로 세척이 일어나는 경우에
ACD HybEZ II 하이브리드화 시스템ACD 바이오테크네321711티슈 슬라이드를 굽는 오븐
항체 희석제다코S0809 항체 희석제 버퍼
항체: B7-H3베틸A700-025CF, A700-026CF클론: BLR025F, BLR026F
항체: B7-H4서모 피셔 사이언티픽  14-5949-82클론: H74
항체: BRD4(6F11)베틸A700-005CF클론: BL-151-6F11
항체: CCR6R& DMAB195-100클론: 53103
항체: CD11bAbcam AB209970클론: EPR1344
항체: CD25Abcam AB215378클론: EPR6452
항체: CD278/ICOSCST 89601BF클론: D1K2T
항체: CD31Abcam AB207090클론: EPR3094
항체: CD33Abcam AB238784클론: SP266
항체: CD3e CST85061BF클론: D7A6E
항체: CD4앱캠ab181724클론: EPR6855
항체: CD44서모 피셔 사이언티픽  MA1-10225클론: IM7
항체: CD45서모 피셔 사이언티픽  14-9457-82클론: CD45-2B11
항체: CD8aCST 85336BF클론: D8A8Y
항체: CXCL13R& DAF801클론: 폴리클론
항체: CXCR5R& DMAB190-100클론: CXCR5
항체: 감마-H2AX베틸A700-053CF클론: BLR053F
항체: 그란자임 B산타크루즈SC-8022 X클론: 2C5
항체: KAP1베틸A700-014CF클론: BL-248-2G6
항체: Ki67베틸A700-021CF클론: BLR021E
항체: LCK CST2984BF클론: D88
항체: MFAP5해당 없음해당 없음PMID: 31332047 / 클론: 130A  (참고: 맞춤 설계)  
항체: SMACST56856BF클론: 1A4
항체: VEGFSTB-플루이드디그m3163028D클론: G153-494
항체: VISTACST64953BF클론: D1L2G
AZ-AR1 엘레건스 시트라 바이오제네XHK546-XAK항원 회출 완충
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EZ & ndash; 리트리버 IR바이오제네XMW016-IRFFPE 조직 절제를 위한 항원 회수 시스템
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