연구 논문

습한 노출 화상 연고가 당뇨병 마우스의 상처 혈관신생 및 혈장 엑소좀 mir-31-5p에 미치는 영향

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DOI:

10.3791/68649

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2025년 8월 26일

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1Department of Endocrinology, The Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities, 2Department of Cardiology, General Hospital of Central Theater Command, 3Key Laboratory for the Prevention and Treatment of Diabetic Chronic Wounds in Baise City, 4Key Laboratory of Metabolic Diseases in Baise City

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

이 기사에서는 습기에 노출된 화상 연고가 당뇨병 상처 혈관신생과 혈장 엑소좀 mir-31-5p의 발현을 동적으로 조절하여 당뇨병 상처 복구를 촉진하는 방법을 설명합니다.

초록

습기 노출 화상 연고(MEBO)는 만성 당뇨병 상처를 치료하는 데 사용되는 한약입니다. 그러나 근본적인 메커니즘은 불분명합니다. 최근의 증거는 상처 혈관신생에서 엑소좀과 기능적 miRNA의 역할을 시사합니다. 여기에서는 당뇨병 마우스에서 상처 혈관신생 및 혈장 엑소좀 mir-31-5p(pExo-mir-31-5p) 발현에 대한 MEBO의 효과를 조사하는 것을 목표로 했습니다. 총 120마리의 C57BL/6 마우스를 무작위로 비당뇨병 대조군(n = 24)과 스트렙토조토신에 의해 유도된 당뇨병 그룹(n = 96)으로 나누었고, 이는 당뇨병 대조군, MEBO, 베이폭신 및 MHY1485 그룹(각각 n = 24)으로 무작위 배정되었습니다. 5개 그룹은 전층 피부 절제 모델로 설정되었으며, 각각 생리 식염수, 생리 식염수, MEBO, 베이폭신 및 MHY1485로 치료했습니다. 1일, 7일, 13일, 18일에 상처 봉합률, 미세혈관 밀도 및 pExo-mir-31-5p 발현 수준과 VPS4a 및 Rab27a mRNA 및 상처 조직의 단백질 수준을 각각 ImageJ, 헤마톡실린-에오신(HE) 염색, 정량적 실시간 중합효소 연쇄 반응(qPCR) 및 웨스턴 블롯(WB)을 사용하여 분석했습니다. 또한, VPS4a, Rab27a 단백질, pExo-mir-31-5p의 발현과 미세혈관 밀도 사이의 상관관계를 분석하였다. 우리는 MEBO가 당뇨병 마우스에서 상처 복구를 촉진한다는 것을 발견했습니다(p < 0.050). 상처 치유의 초기 및 중간 단계에서 상처 혈관신생을 강화했지만 후기 단계에서는 이를 억제했습니다(p < 0.050). MEBO는 치유의 초기 및 중간 단계에서 상처 조직에서 Vps4a 및 Rab27a mRNA 및 단백질 발현과 pExo-mir-31-5p를 상향 조절하는 반면 후기 단계에서는 하향 조절했습니다(p < 0.050). 또한, VPS4a, Rab27a 단백질, pExo-mir-31-5p 발현 및 미세혈관 밀도는 MEBO 처리된 마우스에서 양의 상관관계가 있었다(p < 0.050). 결론적으로, MEBO는 당뇨병 마우스에서 상처 혈관신생과 pExo-mir-31-5p 발현을 동적으로 조절하여 임상 적용에 대한 새로운 이론적 지원을 제공합니다.

서론

노인 환자의 당뇨병 유병률은 높으며 매년 증가하고 있습니다. 이 질병은 환자의 건강, 기능 및 전반적인 삶의 질에 해로운 영향을 미치는 만성 당뇨병성 상처(CDW)와 관련이 있습니다1. 일반적으로 상처 봉합에는 지혈, 염증, 증식 및 재상피화의 네 가지 단계가 포함됩니다2. 이 중 증식기가 가장 중요합니다. 초기 증식 단계에서 모세혈관 내피 세포는 증식하여 상처로 이동하여 새로운 혈관을 발아시키고 복잡한 네트워크를 형성합니다3. 그러나 상처 복구 후기 단계에서 대부분의 모세혈관 루미나는 폐색을 겪고 소수는 작은 동맥과 정맥으로 전환됩니다. CDW 환자의 경우 조직 손실, 괴사 및 괴저, 다양한 수준의 염증 및 고혈당증은 혈관신생과 항혈관신생 사이의 동적 균형을 방해하여 특히 혈관신생이 손상된 경우 상처 치유를 지연시킵니다 4,5,6. 습기 노출 화상 연고(MEBO)는 CDW 치료에 사용되는 한약이지만 그 메커니즘은 아직 불분명합니다. 최근 여러 연구에서 엑소좀 화물 miRNA가 혈관신생을 촉진하여 당뇨병 상처 치유를 촉진할 수 있음이 입증되었습니다 7,8. 그러나 MEBO와 엑소좀 운반 miRNA 사이의 연관성을 조사한 연구는 거의 없습니다. 따라서 MEBO가 CDW에서 혈관신생을 자극하는 메커니즘을 엑소좀 및 기능적 miRNA의 관점에서 밝힐 필요가 있습니다.

엑소좀은 살아있는 세포에서 방출되는 구형 막 소포로, 크기는 30-200nm, 밀도는 1.1-1.2g/mL이며 CD81 및 종양 감수성 101(TSG101)9와 같은 마커 단백질을 함유하고 있습니다. 엑소좀 생산 및 분비는 수송에 필요한 엔도좀 분류 복합체(ESCRT) 의존성 및 비ESCRT 의존성 경로로 분류됩니다. 이러한 경로 내에서 가장 중요한 조절자는 액포 단백질 분류 4 상동체 a(VPS4a) 및 Ras 관련 단백질 Rab-27a(Rab27a)10,11,12입니다. Vps4a는 ATPase 역할을 하여 엑소좀의 크기와 엑소좀 형성 속도를 조절하는 ESCRT 의존성 막 리모델링 과정을 촉매합니다13,14. Rab27a는 원형질막에 대한 다소포체의 도킹을 조절하는 필수 소형 GTPase입니다15. 엑소좀 분비는 라파마이신17의 ATP 구조 도메인에 대한 MHY1485 경쟁적 결합에 의해 활성화되는 라파마이신 복합체 1(mTORC1)16의 포유류 표적에 의해 음으로 조절됩니다. 전반적으로 MHY1485 엑소좀의 합성과 분비를 간접적으로 억제할 수 있습니다. 엑소좀은 거의 모든 체액에서 검출될 수 있습니다. 혈장 엑소좀은 다른 체액에서 유래한 엑소좀보다 더 생산적입니다18. 더욱이, 엑소좀은 그들이 운반하는 핵산을 분해로부터 보호합니다19.

MiRNA는 세포 활동을 조절하는 작은 비암호화 RNA 분자입니다20. 엑소좀은 상처 혈관신생을 향상시키는 데 중요한 수많은 miRNA, 특히 mir-126, mir-125a 및 mir-31-5p에서 풍부하게 발견되었습니다. 이전 연구에서는 미르-126 과발현 골수 중간엽 줄기세포에서 유래한 엑소좀이 미르-126을 이식하여 시험관 내에서 인간 제대 정맥 내피 세포의 증식, 이동 및 관 형성을 촉진한다는 것을 입증했습니다21. 또 다른 연구에서는 인간 지방 유래 중간엽 줄기 세포에서 분비된 엑소좀이 mir-125a를 내피 세포로 전달하고 상처에서 혈관신생 억제제 델타 유사 4를 억제하여 혈관신생을 촉진하는 것으로 나타났습니다9. Yan et al. 우유 엑소좀에 로드된 mir-31-5p가 시험관 내에서 내피 세포 기능을 개선하고, 혈관신생을 촉진하며, 생체 내에서 당뇨병 상처 치유를 향상시켰다고 보고했습니다 22. 이러한 miRNA 중에서 mir-31-5p는 정상 마우스 상처에 비해 당뇨병 마우스 상처에서 유의하게 하향 조절된 유일한 miRNA였습니다22.

MEBO는 CDW23,24와 같은 난치성 상처를 치료하는 데 사용할 수 있는 유성 연고입니다. 그러나 MEBO가 상처 치유를 촉진하는 메커니즘은 밝혀지지 않았습니다. 이전 연구에서는 MEBO가 당뇨병 쥐에서 혈관 내피 성장 인자 발현을 상향 조절하여 상처 혈관신생을 촉진하는 것으로 나타났습니다25. 그러나 엑소좀 운반 miRNA의 관점에서 이 문제를 다룬 연구는 소수에 불과합니다. 본 연구에서는 MEBO가 CDW에 미치는 영향을 조사하기 위해 스트렙토조토신(STZ)과 고지방 식이를 사용하여 당뇨병 마우스에서 전층 상처 모델을 유도했습니다. 우리는 MEBO가 당뇨병 마우스의 상처 치유를 유의하게 가속화한다는 것을 보여주었습니다. 또한, 상처 조직에서 VPS4a 및 Rab27a mRNA 및 단백질과 함께 미세혈관 밀도, pExo-mir-31-5p의 발현 수준에 대한 MEBO의 효과를 연구했습니다. 따라서 우리는 MEBO가 당뇨병 마우스의 상처 혈관신생을 조절하기 위해 pExo-mir-31-5p를 조절함으로써 상처 치유를 촉진한다는 가설을 세웠습니다. 연구 설계의 개략적인 개요는 그림 1에 나와 있습니다.

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프로토콜

모든 동물 실험 프로토콜은 중국 Baise(2018051501)에 있는 Youjiang Medical University for Nationalities의 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다. 특정 병원체 없는(SPF) 수컷 C57BL/6 마우스(7주령)를 Youjiang Medical College for Nationalities의 SPF 실험 동물 센터에 수용하고 일반 또는 고지방 식단과 깨끗한 물을 먹였습니다. 연구 기간 동안 동물 사료실의 온도는 23°C에서 25°C로 유지되었고, 습도는 40%에서 60%, 명암주기는 12시간이었습니다. 동물 관리는 미국 국립보건원과 중국 국립보건원(중국 베이징)의 지침에 따라 제공되었습니다. 모든 외과적 개입은 우리 실험실에서 확립된 표준화된 프로토콜을 사용하여 펜토바르비탈나트륨(0.3%, 50mg/kg)으로 마취하에 수행되었습니다. 사용되는 동물의 수를 줄이고 동물의 불편함을 최소화하기 위해 모든 노력을 기울였습니다. 이 보고서의 모든 섹션은 동물 연구 보고를 위한 ARRIVE 지침을 준수합니다.

마우스 상처 모델 및 치료
총 120마리의 마우스를 비당뇨병 대조군(NDB-CTR; n = 24) 또는 당뇨병 그룹(n = 96) 그룹에 무작위로 배정했습니다. 인간 제2형 당뇨병을 시뮬레이션하기 위해 당뇨병 그룹의 마우스에게 4주 동안 고지방, 정제된 설탕 식단을 먹인 다음 16시간 동안 금식 후 연속 2일 동안 1일 1회 STZ(100mg/kg)를 복강내 주사(ip)했습니다. 공복 혈당 수치는 STZ 주사 후 5일과 6일에 측정되었습니다. 공복 혈당 값이 16.7mmol/L를 두 번 초과하고 다식증, 다갈증, 다뇨증 및 체중 감소와 같은 증상이 있는 마우스는 성공적인 당뇨병 모델로 간주되었습니다26. 1주일 후, 등모를 면도하고, 펜토바르비탈나트륨(0.3%, 50mg/kg)을 복강내 투여한 후 각 마우스의 등에 둥근 전층 피부 상처(직경 = 15mm)를 생성하였다. 당뇨병 그룹의 마우스는 MEBO, BFX(beifuxin), DB-CTR(당뇨병 대조군) 또는 MHY1485(MHY) 그룹에 무작위로 배정되었습니다. MEBO군과 BFX군의 마우스는 MEBO(0.2g/cm2)와 BFX 젤(0.2g/cm2)을 각각 1일 1회 상처에 도포하여 치료하였다. 소 염기성 섬유아세포 성장 인자 젤(bovine basic fibroblast growth factor gel)의 일반명을 가진 BFX 젤은 만성 상처 치료에 사용되는 국소 약물입니다27. NDB-CTR, DB-CTR 및 MHY 그룹의 마우스를 생리 식염수로 처리했습니다. MHY군도 연속 2일 동안 MHY1485(10mg/kg, ip)로 치료하였다. 당뇨병 마우스에게 혈당 수치를 조절하기 위해 하루에 한 번 2-4 IU/kg의 용량으로 인슐린을 피하 주사했습니다.

표본 수집
1일, 7일, 13일, 18일에 각 군의 쥐 6마리를 무작위로 선정하여 경추 탈구에 의한 안락사를 실시하고, 상처를 포함한 고리 모양의 표피 조직 샘플을 상처 가장자리에서 0.5cm 떨어진 곳에서 멸균 조직 가위로 채취하였다. 그런 다음 HE 염색, qPCR 분석 및 WB 분석을 위해 상처 조직을 수집했습니다. DB-CTR 및 MEBO 그룹의 마우스로부터 혈액 샘플을 나트륨 펜토바르비탈 마취 하에 후궤도 방법을 사용하여 채취했습니다. 혈액 샘플을 항응고제 튜브에서 헤파린과 혼합하고 혈장 상청액을 회수하기 위해 15분 동안 3,000 x g 으로 원심분리했습니다. 모든 샘플은 -80°C에서 보관되었습니다. 상처 봉합률을 계산하기 위해 디지털 카메라를 사용하여 고정된 시점과 측면에 눈금이 있는 동일한 거리에서 상처 치유 사진을 캡처했습니다. 상처 부위는 ImageJ 소프트웨어를 사용하여 측정되었습니다. 상처 봉합률은 다음과 같이 계산되었습니다.

상처 봉합률(%) = [W1-Wn] / W1 x 100%

여기서 W1과 Wn은 각각 1일과 n일의 상처 부위를 나타냅니다.

조직병리학적 분석
병리학적 상처 치유를 동적으로 관찰하기 위해 HE 염색을 수행했습니다. 4% 파라포름알데히드 용액으로 16시간 동안 고정한 후, 상처 조직을 탈수하여 파라핀에 포매시킨 후 3μm 절편으로 슬라이스하였다. HE 염색은 조직 슬라이드에서 수행되었습니다. 상처 조직의 미세혈관 밀도를 탐색하기 위해 광학 현미경을 사용하여 조직 슬라이드를 이미지화했습니다. 각 샘플의 미세혈관 밀도를 정량화하기 위해 10x 현미경에서 모세관 밀도가 가장 높은 영역을 선택한 다음 20x 현미경으로 겹치지 않는 3개의 영역을 선택하여 촬영했습니다. 미세혈관 밀도는 ImageJ를 사용하여 계산되고 평균화되었습니다.

혈장 엑소좀의 분리 및 특성화
초원심분리는 약간의 수정이 있는 발표된 프로토콜에 따라 혈장 엑소좀을 분리하기 위해 수행되었습니다28. 간단히 말해서, 2mL의 혈장을 4°C에서 2,000 x g 로 30분 동안 원심분리했습니다. 상청액을 4°C에서 10,000 x g 로 45분 동안 다시 원심분리하여 더 큰 소포를 제거했습니다. 상청액을 0.45μm 필터막을 통해 여과하고 여과액을 수집하였다. 그런 다음 여과액을 4°C에서 100,000 x g 로 70분 동안 원심분리했습니다. 상청액을 제거한 후, 펠릿을 10mL의 예냉된 1x PBS로 재현탁하고 4°C, 100,000 x g에서 70분 동안 원심분리했습니다. 상청액을 제거하고 펠릿을 150μL의 예냉된 1x PBS로 재현탁하고 -80°C에서 보관했습니다. 위에서 수집한 혈장 엑소좀을 확인하기 위해 투과전자현미경(TEM)을 사용하여 엑소좀의 형태를 결정하고, 나노 유세포 분석 시스템을 사용하여 엑소좀의 크기와 농도를 분석하고, WB를 사용하여 엑소좀 마커 CD81 및 TSG101의 발현 수준을 검출했습니다.

RNA 추출, 역전사(RT) 및 qPCR
Vps4a, Rab27a 및 pExo-mir-31-5p의 mRNA 발현 수준을 정량화하기 위해 qPCR을 수행했습니다. RNA 추출 시약을 사용하여 총 RNA를 추출하기 위해 상처 조직을 수집했습니다. 400-700ng/μL 사이의 총 RNA 농도는 허용 가능한 것으로 간주되었습니다. RNA 샘플은 제조업체의 지침에 따라 dsDNase와 함께 역전사 효소를 사용하여 cDNA로 역전사되었습니다. qPCR은 SYBR Green qPCR Mix(ROX 없음)를 사용하여 수행되었습니다. mir-31-5p의 경우 미니 키트를 사용하여 혈장 엑소좀에서 RNA를 추출하고, First Strand cDNA Synthesis Kit를 사용하여 역전사하고, SYBR Green qPCR Master Mix를 사용하여 증폭했습니다. mRNA와 miRNA의 발현은 각각 β-액틴 및 셀-미르-39에 비해 2-ΔΔCt 방법을 사용하여 분석되었습니다. 사용된 프라이머는 표 1에 나와 있습니다.

웨스턴 블롯
WB 분석은 Vps4a 및 Rab27a 단백질의 발현 수준과 엑소좀 마커 CD81 및 TSG101의 수준을 검출하는 데 사용되었습니다. 상처 조직과 혈장 엑소좀의 총 단백질 수준을 RIPA 용해 완충액으로 추출하고, 단백질 농도는 Bicinchoninic Acid Protein Assay Kit로 측정하였다. 총 50μg의 단백질을 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드로 분리했습니다. 폴리비닐리덴 플루오라이드 멤브레인에 블로팅한 후, 멤브레인을 소 혈청 알부민으로 차단한 다음 Vps4a(1:3000), Rab27a(1:1000), 글리세르알데히드-3-인산 탈수소효소(GAPDH)(1:5000), CD81(1:3000), TSG101(1:3000)에 대한 항체와 함께 4°C에서 밤새 배양한 다음 2차 항체, 항-토끼 IgG 과산화효소 접합(1:3000)과 함께 37°C에서 1시간 동안 배양했습니다. 멤브레인은 향상된 화학발광 키트를 사용하여 시각화되었습니다.

통계 분석
이 연구에 제시된 모든 데이터는 SPSS 소프트웨어를 사용하여 통계적 유의성을 분석했습니다. 이러한 분석에서 얻은 모든 결과는 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 시각화되었습니다. 두 그룹 간의 차이는 독립 표본 t-테스트를 사용하여 조사되었습니다. 다중 그룹 비교의 경우 동종 분산 데이터에 일원 분산 분석이 사용되었고 이질적인 분산 데이터에 Welch's test가 적용되었습니다. 또한 등분산 데이터의 쌍별 비교에는 최소 유의 차이 검정을 사용하고 불등한 분산 데이터에 대해서는 Tamhane의 T2 검정을 사용했습니다. 정량적 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시됩니다. 상관관계는 비정규 분포 변수에 대한 Spearman의 상관 분석을 사용하여 분석되었으며 상관 계수 및 95% 신뢰 구간으로 설명되었습니다. P < 0.050은 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다. 모든 실험은 최소 3회 반복되었습니다.

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결과

MEBO는 당뇨병 쥐의 상처 치유를 가속화합니다.
당뇨병성 상처에서 MEBO의 효능을 검증하기 위해 당뇨병성 상처 모델을 구축하고 1일, 7일, 13일, 18일에 사진을 촬영했습니다. 각 그룹의 상처는 시간이 지남에 따라 점차적으로 치유되었습니다(그림 2A). NDB-CTR 그룹의 상처는 18일째까지 완전히 치유되었습니다. MEBO 그룹의 상처는 당뇨병 상처 중 가장 빠르게 치유되어 7일째에 몇 개의 분홍색 육아 입자를 형성한 다음 13일째에 딱지가 벗겨진 후 밝은 빨간색 육아 조직의 넓은 영역이 자랐고 결국 복구되어 육아 조직이 크게 감소했습니다. BFX 그룹의 상처는 18일째까지 거의 치유되었습니다. DB-CTR 그룹은 BFX 그룹보다 더 느리게 치유되었습니다. MHY 그룹은 가장 긴 치유 시간을 보였습니다. 상처 치유를 정량적으로 분석하기 위해 사진을 ImageJ에 업로드하여 상처 봉합률을 계산했습니다. 그 결과 각 그룹의 상처 봉합률...

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토론

당뇨병의 합병증인 CDW는 상당한 사망률과 장애로 이어질 수 있으며 종종 혈관 장애와 관련이 있습니다29. MEBO는 CDW 치료에 효과적입니다. 그러나 그 기본 메커니즘은 불분명합니다30. 따라서 엑소좀과 기능성 miRNA의 관점에서 조사하는 것을 목표로 했습니다. 본 연구에서는 MEBO군의 상처 봉합률과 미세혈관 밀도가 당뇨병 마우스에서 역대 가장 높았다는 것을 발견했다. qPCR 및 WB 결과, MEBO군의 상처 조직 및 pExo-mir-31-5p의 VPS4a 및 Rab27a mRNA 및 단백질 발현 수준이 모든 시점에서 가장 높았고, 발현 수준은 증가 후 감소하는 경향이 있었으며, 7일째에 최고조에 도달하고, 13일째에 약간 감소하고, 18일째에 점차 감소하는 것으로 나타났습니다. 또한 상관관계 분석 결과 MEBO군에서 VPS4a, Rab27a, pExo-mir-31-5p 및 ...

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공개 사항

저자는 경쟁하는 이해관계가 없음을 선언합니다.

감사의 글

이 연구는 보조금[번호 81960875]에 따라 중국 국가 자연 과학 재단, 보조금[번호 2023GXNSFDA026008]에 따라 광시 자연 과학 재단, 보조금[번호 S2022134]에 따라 광시 의료 및 건강 적절한 기술 개발 및 응용 프로젝트, 광시좡족 자치구 서양 의학 자체 자금 연구 프로젝트[번호 20210234], 광시 한의학국 자체 자금 지원 보조금 [번호 GZZC2020255]에 따른 연구 프로젝트.

저자 기여:
Yuanyuan Xu: 글쓰기 - 원고, 소프트웨어, 방법론, 조사, 형식 분석, 개념화. Jianchang Xu: 자원, 방법론, 조사. Anbang Zhou: 조사, 형식 분석. Nimiao Cen: 시각화, Lina Huang: 감독. Biaoliang Wu: 글쓰기-검토 및 편집, 리소스, 프로젝트 관리, 방법론, 자금 조달, 데이터 큐레이션, 개념화.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1× PBS Solarbio(중국 베이징)#P1020완충 용액
4% 파라포름알데히드 용액Solarbio(중국 베이징)#P1110조직 고정
항토끼 IgG 과산화효소 접합 선호도#S00012차 항체
베이폭신 젤Essexbio(중국 주하이)#042404A06만성 상처를 치료하는 연고
CD81 항체Signalway 항체#417791차 항체
강화된 화학발광 키트&NBSP;에피자임(중국)#SQ101단백질 밴드용 화학발광 키트
글리세르알데히드-3-인산 탈수소효소(GAPDH) 항체선호도#AF70211차 항체
그래프패드 프리즘https://www.graphpad.com/prism/시각화
이미지J https://imagej.net/ij/상처 면적 측정 
인스턴트 비신코닌산(BCA) 단백질 분석 키트 에피자임(중국)#ZJ102단백질 농도 결정
LightCycler96 시스템로슈qPCR 장비
MHY1485MedChemExpress(미국)#326914-06-1포유류 라파마이신 복합체 1(mTORC1) 의 표적 활성화제;
miRNeasy 미니 키트 톈겐(중국)#217004RNA 추출(miRNA)
촉촉한 화상 연고Mebo(중국 산터우)#2403103B만성 상처를 치료하는 연고
MonAmp SYBR 그린 qPCR 믹스(ROX 없음) 모나드(중국)#MQ10101SqPCR 키트(mRNA)
MonScript RTIII 올인원 믹스(dsDNase 포함);모나드(중국)#MR05101S역전사 키트(mRNA)
나노 유세포 분석 시스템N30E(중국)엑소좀의 크기 및 농도를 분석하는 장비
광학 현미경올림푸스(일본 도쿄)조직 병리 형태 관찰
생리 식염수Kelun(중국 쓰촨성)#L24041709생리 식염수
폴리비닐리덴 플루오라이드 멤브레인밀리포어(미국)#IPVH00010웨스턴 블로팅 멤브레인
뇌관Generay Biotech Co., Ltd.(중국 상하이)
Rab27a 항체세포 신호 전달 기술#692951차 항체
RevertAid 퍼스트 스트랜드 cDNA 합성 키트써모피셔(미국)#K1622역전사 키트(miRNA)
RIPA 용해 완충액Solarbio(중국 베이징)#R0010총 단백질 추출
도데실 황산나트륨– 폴리아크릴아미드&NBSP;에피자임(중국)#PG222전기영동 완충액
펜토바르비탈나트륨Merck(중국 상하이)#P3761마 취
특정 병원체가 없는 수컷 C57BL/6 마우스Guangdong Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd(중국 광동성)실험 동물
스프스https://www.ibm.com/spss통계 분석
스트렙토조토신Solarbio(중국 베이징)#S8050당뇨병 마우스 모델 유도 
SYBR 그린 qPCR 마스터 믹스 Roche(스위스)#4943914001-SRqPCR 키트(miRNA)
투과전자현미경히타치(일본)HT-7700 시리즈엑소좀의 형태를 결정하는 장비
트리졸 Invitrogen (미국)#15596026CNRNA 추출(mRNA)
TSG101 항체아브캠# AB1250111차 항체
Vps4a 항체아브캠# ab1978961차 항체

참고문헌

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  4. Vikrant, R., Rebecca, M., Devendra, K. A. Stem Cells and Angiogenesis: Implications and Limitations in Enhancing Chronic Diabetic Foot Ulcer Healing. Cells. 11 (15), 2287(2022).
  5. Nour, S., Imani, R., Chaudhry, G. R., Sharifi, A. M. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
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  7. Ruo, L., et al. Exosome-cargoed microRNAs: Potential therapeutic molecules for diabetic wound healing. Drug discovery today. 27 (10), 103323(2022).
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