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연구 논문

Blue Fox 담즙의 Tauroursodeoxycholic acid가 마우스의 급성 알코올 관련 간 손상에 미치는 영향 및 메커니즘

738 조회수

⸱

DOI:

10.3791/68763

⸱

2025년 10월 17일

 ,  , 
1School of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Medicine

이 논문에서

요약

이 연구는 생쥐의 알코올 유발 간 손상에 대한 푸른 여우 담즙의 간 보호 효과를 평가했습니다. TUDCA, UDCA, 빌리루빈 및 TCDCA를 함유한 청여우 담즙은 간 손상 지표를 감소시키고 AGE-RAGE 경로, AKT1 및 PPARG를 통해 작용하여 항염증 및 항산화 특성을 입증했습니다.

초록

곰 담즙과 같은 동물 담즙은 치료적 이점을 위해 전통 의학에서 오랫동안 사용되어 왔습니다. 곰 담즙과 유사한 푸른 여우 담즙은 특정 전통 관행에서 간 보호 특성을 가지고 있다고 믿어집니다. 본 연구는 생쥐의 알코올 관련 간 손상에 대한 푸른 여우 담즙의 성분과 효과를 조사하였다. 30마리의 푸른 여우로부터 담즙을 채취하여 건조 분말로 가공했습니다. 푸른 여우 담즙의 화학 성분은 고성능 액체 크로마토그래피 및 사중극자 비행 시간 질량 분석법과 결합된 초고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 분석되었습니다. 알코올 관련 간 손상과 관련된 잠재적인 생리 활성 화합물, 표적 및 경로를 식별하기 위해 네트워크 약리학을 사용했습니다. 알코올 관련 간 손상의 마우스 모델은 저용량 및 고용량으로 청여우 담즙 분말을 투여한 Kunming 마우스를 사용하여 확립되었습니다. 혈청 알라닌 아미노전이효소, 아스파르테이트 아미노전이효소 및 총 콜레스테롤 수치를 측정했습니다. 간 조직은 헤마트실린 및 에오신 염색 및 말론디알데히드 분석으로 평가되었습니다. 활성 화합물과 핵심 표적 사이의 결합 친화도를 예측하기 위해 분자 도킹을 수행했습니다. 푸른 여우 담즙에는 타우로르소데옥시콜산(TUDCA), 우르소데옥시콜산, 빌리루빈 및 타우로케노데옥시콜산이 함유되어 있는 것으로 밝혀졌습니다. 조직병리학적 분석 결과 청여우 담즙분말 경구투여 후 주요 장기에서 유의미한 이상이나 독성 효과가 나타나지 않았습니다. 푸른 여우 담즙의 핵심 표적에는 단백질 AKT1, PPARG, IGF1, MMP9 및 CASP3가 포함되었습니다. Blue Fox 담즙 치료는 알코올 관련 간 손상의 마우스 모델에서 혈청 ALT, AST, 콜레스테롤 및 MDA 수치를 감소시켰습니다. 네트워크 약리학 및 분자 도킹은 푸른 여우 담즙의 간 보호 효과가 진행성 당화 최종 산물 신호 전달 경로에 대한 진행성 당화 최종 산물 수용체와 관련이 있을 수 있음을 시사합니다. 전반적으로 곰 담즙과 유사한 TUDCA 함량을 가진 푸른 여우 담즙은 AKT1 및 PPARG와 같은 단백질을 표적으로 하여 알코올 관련 간 손상 관리에서 잠재적인 항염증 및 항산화 효과를 보여줍니다.

서론

알코올 관련 간 질환(ALD)은 무증상 검사실 이상부터 간경변증을 동반한 진행성 간 질환, 그리고 가장 심각한 형태의 다기관 부전을 동반한 생명을 위협하는 말기 간 질환에 이르기까지 다양한 간 손상을 포함합니다1. 알코올 관련 지방간 질환을 포함한 ALD의 유병률은 상대적으로 경미하고 잠재적으로 가역적인 형태의 ALD1을 나타냅니다. 알코올 관련 간염은 염증을 특징으로 하며, 무증상 지방간염에서 급성 황달을 나타내고 단기 사망률이 높은 간부전으로 진행될 수 있는 급성 알코올성 간염에 이르기까지 다양한 임상 양상을 보입니다1. 알코올과 그 대사산물은 미토콘드리아 지방산 β 산화 억제 및 지방 생성 자극을 포함한 여러 메커니즘을 통해 지질 대사를 변화시키고 지질 축적(지방증)을 촉진합니다2. 에탄올은 트랜스페린 수용체 1의 발현을 상향 조절하여 간 철분 흡수를 증가시킵니다2. 알코올과 아세트알데히드는 모두 간세포를 직접적으로 손상시켜 산화 스트레스 증가, s-아데노실메티오닌 재생 억제, 손상 관련 분자 패턴(DAMPS) 방출, 문맥 순환에서 박테리아 내독소에 대한 노출 및 단백질 부가물 형성을 유발할 수 있습니다2. ALD의 관리는 관련된 수많은 병원성 경로로 인해 여전히 어렵습니다3. 조사 중인 향후 전략에는 경험적 프로바이오틱스, 성장 인자, 항산화제, 염증 관련 인자를 표적으로 하는 단클론 항체 및 기술 강화 행동 개입이 포함됩니다. 그러나 추가적인 포괄적인 치료 전략은 아직 탐구되어야 합니다.

새로운 증거는 동물 담즙이 항염증 및 항산화 특성으로 인해 알코올 관련 간 질환(ALD) 관리에 치료 잠재력이 있을 수 있음을 시사합니다 4,5. 동물 담즙은 중국 전통 의학(TCM)의 중요한 구성 요소입니다6. 한의학에서 동물 담즙은 간과 담낭 기능을 강화하고 통증, 발열, 기침 및 염증을 완화하는 데 사용됩니다. 간경변증을 포함한 간 질환 관리에 사용되었습니다6. 동물 담즙은 항염증 및 항산화 특성6을 가지고 있으며 염증 및 산화 스트레스는 ALD의 병인에서 중심적인 역할을 합니다7. 담즙산 보충은 또한 간 지방증을 개선하는 것으로 보고되었습니다8. 현재 곰 담즙은 우르소데옥시콜산(UDCA)과 타우로콜산(TUDCA)을 주요 활성 성분으로 하는 가장 널리 사용되는 담즙 유래 의약품입니다 6,9. 특히, TUDCA는 양, 소, 닭, 뱀과 같은 다른 동물의 담즙에는 없습니다6. TUDCA는 급성 간 손상 치료에 대한 치료 가능성을 입증했습니다10. 현재 TUDCA는 곰 담즙 배수(동물 복지 문제를 야기함), 화학적 합성(비용이 많이 든음) 또는 닭 담즙 분말을 곰 담즙에 상응하는 물질(진짜 곰 담즙과 동등하지 않음)으로 생변형하여 얻습니다11,12. 북극여우라고도 알려진 푸른 여우(Alopex lagopus)는 주로 털을 위해 사육됩니다. 중국은 전 세계 3대 모피 의류 수출국 중 하나이며, 수확한 푸른여우의 내장은 일반적으로 폐기됩니다13. 이는 담낭을 잠재적인 의료 자원으로 평가할 수 있는 기회를 제공합니다. 푸른여우와 곰은 모두 육식동물로 소화 생리학, 신진대사, 식이요법에서 유사점을 공유하므로 담즙 구성과 효과도 유사할 수 있음을 시사합니다. 그러나 이 가능성은 아직 탐구되지 않았습니다.

따라서 본 연구는 ALD 모델에서 푸른여우 담즙의 약리학적 작용과 기본 메커니즘을 조사하는 것을 목표로 했습니다. 이번 연구 결과는 곰 담즙 대체물 개발을 위한 새로운 연구 길을 제공하고, 푸른여우 담낭을 의료 자원으로 활용하기 위한 과학적 근거를 확립하고, 산업 폐기물을 가치 있는 제품으로 전환하고, 향후 치료법 개발에 정보를 제공할 수 있습니다.

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프로토콜

연구 프로토콜은 헤이룽장성 중의학 대학의 동물 실험 윤리 위원회(승인 #2023021101)에서 검토 및 승인되었습니다. 모든 동물 실험은 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 ARRIVE 지침(Animal Research: Reporting of Vivo Experiments) 지침 및 관련 국가 및 기관 지침에 따라 수행되었습니다. 이 연구는 동물 실험을 포함했기 때문에 정보에 입각한 동의가 적용되지 않았습니다. 모든 동물 사육 및 모피 수확 절차는 야생 동물 사육 관리를 위한 중국 기술 규정을 엄격히 준수했습니다. 이 연구는 중국 헤이룽장성 중의과대학 동물실험 윤리위원회의 승인을 받았습니다(승인 #2023021101).

푸른 여우 담즙 샘플 준비
푸른 여우 담즙의 자원은 재료표에 나와 있습니다. 총 30마리의 푸른 여우(Vulpes lagopus)가 전기 충격으로 안락사된 후 모피를 채취하고 담낭을 채취했습니다. 푸른 여우 담낭은 타원형이며 윗부분이 좁고 아랫부분이 부어오릅니다. 외부 표면은 주름이 보이는 짙은 갈색이며 캡슐막은 얇습니다. 담즙은 1mL 멸균 일회용 주사기를 사용하여 즉시 흡인되었고 짙은 검정색 또는 짙은 녹색으로 나타났습니다. 그런 다음 담낭을 37°C에서 48시간 동안 건조시켜 건조된 청여우 담즙 분말을 얻었습니다(그림 1). 생성된 담즙 분말은 반짝이고 부서지기 쉬운 질감을 가진 황갈색 색조를 나타냈습니다. 담낭당 건조 담즙 분말의 평균 수율은 약 0.82 ± 0.30g이었습니다. 샘플 준비를 위해 푸른 여우(위에서 설명한 대로) 또는 곰( 재료 표 참조)의 건조 담즙 분말 250mg을 70% 크로마토그래피 등급 메탄올 1mL에 용해시켰습니다. 용액을 초음파 처리 (40kHz, 300W)하고 0.22μm 멤브레인을 통해 여과하고 최종 부피 50mL(즉, 5mg/mL)로 희석한 다음 후속 분석을 위해 0.5mg/mL의 작동 농도로 추가로 희석했습니다. 전체 실험 워크플로는 보충 그림 1에 요약되어 있습니다.

본 연구에서 동물실험에 사용된 푸른여우담즙분말의 투여량범위는 선행의 독성 평가 및 약리학적 연구를 바탕으로 5-10g/kg이었으며, 이러한 농도에서 유의미한 부작용은 관찰되지 않았다14,15. 담즙 분말 제조 동안 담낭을 37°C에서 48시간 동안 건조시켰다. 그러나 건조 시간은 현지 습도와 시료량에 따라 달라질 수 있으므로 완전한 탈수를 위해 수분 함량을 확인해야 합니다. 용해의 경우 크로마토그래피 등급 메탄올의 농도 5mg/mL가 HPLC 및 UPLC-Q-TOF-MS 분석에 최적이었습니다. 불완전한 용해 또는 미립자 잔류물은 분석 정확도에 영향을 미칠 수 있으므로 추가 초음파 처리 또는 여과가 필요합니다. 알려진 한계는 푸른 여우의 계절적, 식이 및 개인의 생리학적 차이로 인한 담즙 구성의 가변성으로, 이는 TUDCA 및 UDCA와 같은 활성 화합물의 상대적 풍부도에 영향을 미칠 수 있습니다16. 따라서 일관된 성분 프로파일을 보장하기 위해 약리학적 사용 전에 크로마토그래피 프로파일링에 의한 배치 검증이 권장됩니다.

네트워크 약리학적 분석
푸른 여우 담즙의 화학 조성은 고성능 액체 크로마토그래피( 재료 표 참조) 및 사중극자 비행 시간 질량 분석법(UPLC-Q-TOF-MS)과 결합된 초고성능 액체 크로마토그래피를 사용하여 분석되었습니다. HPLC는 0.03M 인산이수소나트륨(인산을 사용하여 pH를 4.4로 조정)으로 A상으로, 메탄올( 재료 표 참조)을 B상으로 구성한 이동상과 함께 SB-C18 컬럼(4.6mm x 150mm, 5μm)을 사용하여 수행했습니다(표 1). 검출 파장은 210nm, 이동상 유속은 1.0mL/min, 컬럼 온도는 40°C로 설정되었습니다. 주입량은 10μL였습니다. UPLCTM HSS T3 컬럼을 사용하여 UPLC-Q-TOF/MS 분석을 수행했습니다( 재료 표 참조). 이동상은 아세토니트릴(A)-0.1% 포름산 수용액(B, 재료 표 참조)으로 구성되었습니다. 그래디언트 용출 프로그램은 다음과 같습니다: 4 mL/min의 유속에서 0-25.0분, 98%-2% A 및 25.0-28.0분, 2%-2% A. 컬럼 온도는 35°C로 유지되었습니다. 질량 분석법은 용매 가스 유량 650L/h, 용매 가스 온도 350°C, 콘 가스 유량 50L/h, 이온 소스 온도 120°C, 모세관 전압 2.8kV(양이온 모드) 및 2.0kV(음이온 모드), 25V의 원뿔 전압 및 6eV의 충돌 에너지. 스펙트럼은 0.02초 간격으로 0.2초마다 수집되었습니다. 류신-엔케팔린( 재료 표; [M+H]+=556.2771)을 40 fmol/μL의 농도 및 15 μL/min의 유속으로 기준 보정 용액으로 사용했습니다17.

화학 성분 분석 및 표적 예측
푸른 여우 담즙의 활성 성분은 오로콜산과 타우로우르소데옥시콜산나트륨( 재료 표 참조)을 내부 표준으로 사용하여 HPLC 및 UPLC-Q-TOF/MS를 사용하여 확인되었습니다18. 식별된 화합물의 구조식은 PubChem 데이터베이스(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)에서 검색되었습니다. 잠재적인 생리 활성 표적을 탐색하기 위해 PharmMapper 데이터베이스(http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/)에서 푸른 여우 담즙의 활성 성분을 쿼리하여 관련 유전자 표적을 식별했습니다.

알코올성 간손상과 알코올유발성 간손상을 키워드로 사용하여 GeneCards(https://www.genecards.org/) 및 OMIM(https://omim.org/) 데이터베이스에서 질병 관련 유전자를 얻었습니다. GeneCards 데이터베이스에서 관련성 점수에 따라 표적을 선별했으며 임계값은 ≥ 20으로 설정되었습니다. 일반적으로 사용되는 이 경험적 컷오프는 민감도와 특이성 사이의 균형을 보장하여 잠재적으로 관련된 유전자(높은 재현율)를 유지하는 동시에 관련성이 약하거나 시끄러운 유전자(높은 정밀도)를 필터링합니다. 대조적으로, OMIM 데이터베이스는 강력한 유전적 증거가 있는 표적을 캡처하여 GeneCards의 계산 관련성 점수를 보완하기 때문에 추가 필터링이 적용되지 않았습니다. 얻은 표적 데이터를 병합하고 복제하여 ALD와 관련된 표적을 식별했습니다. 유효성분 표적과 질병 표적은 시각화를 위해 Venny 2.1.0(https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html)을 사용하여 비교되었습니다. 교차점은 ALD에 대한 푸른 여우 담즙의 잠재적 표적으로 식별되어 STRING 데이터베이스(http://version10.string-db.org/)로 가져왔습니다. STRING 데이터베이스에서는 기본 매개변수(중간 신뢰도 점수 ≥ 0.4)로 상호 작용 네트워크를 구성하고 시각화 명확성을 높이기 위해 자유 노드를 숨겼습니다. Cytoscape 소프트웨어(버전 3.9.1)를 사용하여 시각화된 단백질-단백질 상호작용(PPI) 네트워크 다이어그램을 생성하기 위해 자유 노드를 숨겼습니다. 도값을 계산하기 위해 위상 분석을 수행했으며, 유의 임계값이 p < 0.05인 Database for Annotation, Visualization, and Integrated Discovery(DAVID, https://david.ncifcrf.gov/)를 사용하여 가장 높은 도값을 가진 6개의 대상을 식별했습니다. KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) 데이터베이스는 경로 농축 분석에 사용되었습니다.

분자 도킹
핵심 표적 단백질과 청여우 담즙의 생리 활성 성분 사이의 상호 작용을 평가하기 위해 분자 도킹을 수행했습니다. 핵심 표적 단백질의 3차원 구조는 구조생물정보학연구소(RCSB) 단백질 데이터 뱅크(https://www.rcsb.org/)에서 가져왔고, 담즙 성분의 구조는 PubChem 데이터베이스(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)에서 얻었습니다. 도킹 시뮬레이션은 MOE(Molecular Operating Environment) 소프트웨어(버전 2022.02)를 사용하여 수행되었습니다. AKT1의 경우 결정 구조(PDB ID: 4EKL)를 다운로드하고 MOE의 전처리에는 물 분자 및 원래 리간드 제거, 생리학적 pH(7.0)에서 양성자화를 통한 수소 첨가 및 에너지 최소화가 포함되었습니다. 리간드 구조(TUDCA, UDCA, TCDCA, TCA 및 빌리루빈)를 PubChem에서 검색하고 도킹 전에 에너지를 최소화했습니다. 도킹 과정에서 여러 리간드 형태가 생성되었고 각 형태는 다양한 공간 방향으로 수용체의 결합 포켓에 배치되었습니다. 도킹은 초기 배치를 위한 London dG와 채점 함수로 Affinity dG를 사용하여 유도 맞춤 프로토콜을 사용하여 수행되었습니다. 각 리간드에 대해 30개의 형태가 생성되었고 역장 최적화를 통해 최종 포즈가 개선되었습니다. 다른 모든 매개변수는 추가 미세 조정 없이 MOE 기본값으로 설정되었습니다. 각 리간드 형태와 수용체 사이의 친화도는 소프트웨어의 채점 기능을 사용하여 평가되었습니다. 도킹 결과는 자유 에너지 결합에 의해 평가되었으며, 가장 큰 클러스터에서 가장 음의 에너지 형태가 대표적인 결합 모드로 선택되었습니다. 시각화를 위해 가장 강한 친화력과 최적의 형태를 가진 결합 모드를 선택했습니다. -4.25kcal/mol 미만의 친화도 값은 리간드-표적 결합을 나타내고, -5.0kcal/mol 미만의 값은 중간 정도의 결합을 나타내며, -7.0kcal/mol 미만의 값은 강한 결합 친화력을 나타냅니다 19.

ALD의 마우스 모델
이 연구를 위해 30마리의 특정 병원체 없는(SPF) 쿤밍 마우스(18-22g, 6-8주령, 수컷 15마리, 암컷 15마리)를 구입했습니다. 동물들은 25 ± 2 °C, 상대 습도 60% ± 10%의 통제된 조건에서 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있도록 사육되었습니다. 실험 전에 마우스를 1주일 동안 적응시켰습니다.

ALD 모델은 다음과 같이 설정되었습니다. 70% v/v 에탄올 용액은 70.21mL의 무수 에탄올을 부피 플라스크에 계량하고 초순수를 100mL의 최종 부피로 첨가하여 제조하였다. 용액을 마그네틱 교반기로 1분 동안 교반하고 상 분리가 관찰되지 않을 때까지 5분 동안 그대로 두었습니다. 위관 용량은 2mL/kg 체중이었고 연속 7일 동안 1일 1회 투여했습니다. 최종 위관 투여 4시간 후인 7일째 아침에 추가 분석을 위해 혈액 샘플과 간 조직을 수집했습니다. 모델 확립은 간 손상의 전형적인 지표를 평가하여 확인되었습니다. 알라닌 아미노전이효소(ALT), 아스파르테이트 아미노전이효소(AST), 총 콜레스테롤(T-CHO) 및 말론디알데히드(MDA)의 혈청 수치를 측정했습니다. 또한, 간세포 형태, 세포질 공포화, 괴사 및 염증성 세포 침윤을 평가하기 위해 헤마톡실린 및 에오신(H&E) 염색을 사용하여 간 조직을 조직병리학적 검사를 실시하였다. 마우스는 5개 그룹(그룹당 n=6)으로 무작위로 배정되었습니다. 빈 대조군은 2mL/kg 증류수를 받았습니다. 모델 그룹은 치료 없이 2mL/kg 70% 에탄올을 투여받았습니다. 양성 대조군은 0.4g/kg의 간 보호 정제를 투여했습니다( 재료 표 참조). 고용량 Blue Fox 담즙 분말 그룹에는 10g/kg Blue Fox 담즙 분말을 투여했습니다. 저용량 Blue Fox 담즙 분말군은 5g/kg Blue Fox 담즙 분말을 투여했습니다. 블랭크 대조군을 제외한 모든 그룹은 알코올성 간 손상을 유도하기 위해 연속 7일 동안 1일 1회 70% 에탄올(2mL/kg)을 경구 투여했습니다. 에탄올 투여 후 4시간 후인 7일째에 각각의 치료제(간 보호정 또는 청여우 담즙 분말)를 투여하고 후속 실험을 실시하였다. 빈 대조군은 실험 내내 증류수를 받았습니다.

혈청 트랜스아미나제(ALT 및 AST) 및 총 콜레스테롤 키트(T-CHO) 측정
혈액 샘플을 4°C에서 15분 동안 1,000 x g 로 원심분리하여 혈청을 얻었다. 샘플은 분석까지 -20°C에서 보관되었습니다. 제조업체의 지침에 따라 ALT, AST 및 T-CHO 수준을 측정하기 위해 상용 키트를 사용했습니다( 재료 표 참조).

체중 모니터링
에탄올 투여 연속 7일 후, 7일째에 치료를 실시하였고, 아침 투여 후 4시간 후에 실험을 실시하였다. 체중은 관찰 기간 동안 매일 2회 기록되었습니다. 공복하지 않은 체중은 투여 후 1일, 2일, 3일, 5일, 7일, 10일 및 14일에 전자 분석 저울을 사용하여 측정되었습니다.

조직 샘플 처리
투여 후 14일째에 체중과 남은 음식 섭취량을 기록했습니다. 그런 다음 동물들은 오후에 물을 자유롭게 마실 수 있도록 금식했습니다. 다음날(12-16시간의 금식 기간 후), 자궁경부 탈구에 의한 안락사 전에 공복 체중을 측정했습니다. 심장, 간, 비장, 폐, 신장, 부신, 뇌, 위, 장, 고환, 전립선, 난소 및 자궁을 포함하되 이에 국한되지 않는 주요 장기의 형태학적 변화를 평가하기 위해 거시적 병리학적 검사를 수행했습니다. 심장, 간, 비장, 폐, 신장, 위 및 장의 조직 샘플을 블랭크 대조군(CN)과 저용량 푸른 여우 담즙 그룹(LH)에서 무작위로 채취하여 4% 파라포름알데히드에 고정하고 파라핀에 포매하고 절편하고 조직병리학적 평가를 위해 헤마톡실린 및 에오신(H&E)으로 염색했습니다. 조직 절편을 현미경으로 검사하고 영상화했습니다.

H&E 염색
간 표본을 인산염 완충 식염수(PBS)에 4% 파라포름알데히드로 고정하고 파라핀에 포매하고 절편했습니다. 절편을 자일렌 I 및 II에서 탈파라핀화하고, 내림차순 에탄올 농도(100%, 95%, 85% 및 75%)로 재수화하고, 물로 세척하고, 분화하고, 다시 세척하고, 블루잉 용액을 사용하여 블루드했습니다. 헹굼 후, 절편을 85% 및 95% 에탄올에서 각각 5분 동안 탈수하고, 에오신으로 5분 동안 염색하고, 무수 에탄올 I, II 및 III(각각 5분)에서 탈수했습니다. 마지막으로 절편을 자일렌 I 및 II(각각 5분)로 제거하고 중성 껌으로 장착했습니다. 이미지는 광학 현미경(100x)을 사용하여 획득되었습니다.

간 조직에서 말론디알데히드(MDA) 측정
간 표본은 조직 분쇄기를 사용하여 9부피의 생리 식염수에서 균질화되었습니다. 균질을 4°C에서 10분 동안 700 x g 로 원심분리했습니다. MDA 분석은 제조업체의 지침에 따라 상용 키트( 재료 표 참조)를 사용하여 상청액에 대해 수행되었습니다.

통계 분석
데이터는 표준 편차(SD)± 평균으로 표시됩니다. 그룹 비교는 분산 분석(ANOVA)에 이어 최하위 유의 차이(LSD) 사후 테스트를 사용하여 수행되었습니다. 양측 p-값<0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.

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결과

푸른 여우 담즙의 활성 화합물 식별
푸른 여우와 곰은 모두 육식 동물로 유사한 소화 생리학과 신진대사를 공유합니다20. 따라서 그들의 담즙은 비슷한 구성을 가질 수 있습니다. 위에서 설명한 크로마토그래피 조건을 사용하여 각 화합물을 잘 분리했습니다(그림 2). 이 실험에서는 TUDCA 표준물질21 의 머무름 시간을 사용하여 푸른 여우 담즙에서 TUDCA를 식별했습니다(그림 2). 약 10분, 12분 및 21분의 머무름 시간에서의 피크는 TUDCA로 확인되었으며, 일관된 머무름 시간(표 2)을 나타내며 푸른 여우 담즙에서 TUDCA의 존재를 뒷받침했습니다. 푸른 여우 담즙과 곰 담즙은 일관된 머무름 시간(상대 표준 편차(RSD)<2%)과 유사한 성분 비율을 가진 10개의...

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토론

2018년 세계보건기구(WHO)의 알코올과 건강에 관한 글로벌 현황 보고서에 따르면 중국의 1인당 알코올 소비량은 2005년 4.1L에서 2016년 7.2L로 76% 증가했습니다. 만성 알코올 섭취로 인한 ALD는 간 관련 이환율 및 사망률의 주요 원인으로 남아 있습니다22. Boet al. 생쥐에서 사염화탄소(CCl4) 유발 간 손상 모델을 확립하고 푸른 여우 담즙이 AST, ALT, T-CHO 및 MDA 수치를 유의하게 감소시키는 것을 관찰했습니다23. 일관되게, 현재 연구의 약리학적 실험은 푸른 여우 담즙이 생쥐의 ALD에 대해 치료 효과를 발휘한다는 것을 입증했습니다.

본 연구에서는 14일 동안 1일 2회 투여한 청여우담즙분말 농도 27.4%, 용량 40mL/kg의 급성 독성 평가에서 유리한 안전성 프로파일이...

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공개 사항

저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.

감사의 글

이 작업은 중국 청소년 과학 재단(NO.82204562)의 국가 자연 과학 재단의 지원을 받았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
0.03M 인산이수소나트륨해당 사항 없음해당 사항 없음HPLC 이동상 A
물에 0.1% 포름산Fisher Scientific, 미국해당 사항 없음UPLC용 이동상
0.22 &무; M 멤브레인 필터해당 사항 없음해당 사항 없음샘플 여과
4% 파라포름알데히드해당 사항 없음해당 사항 없음조직 고정
아세토니트릴, 크로마토그래피 등급Fisher Scientific, 미국해당 사항 없음UPLC용 이동상
ALT, AST, T-CHO 키트Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd., 중국해당 사항 없음혈청 생화학적 분석
분석 저울해당 사항 없음해당 사항 없음동물 체중 측정
아우로콜산중국 식품의약품 통제 연구소해당 사항 없음HPLC/MS의 내부 표준
곰 담즙 분말중국 식품의약품 통제 연구소, 베이징해당 사항 없음참고자료
빌리루빈지정되지 않음해당 사항 없음담즙에서 확인된 활성 화합물
푸른 여우Suihua Fox Farm, 헤이룽장성, 중국해당 사항 없음담즙의 공급원
푸른 여우 담즙 분말사내 준비해당 사항 없음성분 분석을 위한 샘플
C18 HPLC 컬럼애질런트 테크놀로지스, 미국ZORBAX SB-C18 (4.6× 150mm, 5 & 무; m)HPLC 분리
사이토스케이프https://cytoscape.org/버전 3.9.1네트워크 시각화 및 토폴로지 분석
다윗NIHhttps://david.ncifcrf.gov/GO/KEGG 농축 분석
유전자 카드바이츠만 연구소https://www.genecards.org/질병 관련 유전자 검색
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MDA 검출 키트Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd., 중국해당 사항 없음간 산화 스트레스 측정
메탄올, 크로마토그래피 등급Fisher Scientific, 미국해당 사항 없음시료 전처리용 용매
모화학 컴퓨팅 그룹교육부 2022.02분자 도킹 분석
오밈NIHhttps://omim.org/질병 관련 유전자 검색
광학 현미경해당 사항 없음해당 사항 없음조직학적 관찰
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RCSB 단백질 데이터 뱅크https://www.pdbus.org/해당 사항 없음단백질 3D 구조 소스
냉장 원심분리기해당 사항 없음해당 사항 없음혈청 및 조직 분리
타우루르소데옥시콜산나트륨(TUDCA)중국 식품의약품 통제 연구소해당 사항 없음HPLC/MS의 내부 표준
문자열엠블http://version10.string-db.org/단백질-단백질 상호작용 분석
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