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방법 논문

마우스의 2차 중대뇌동맥 폐색 모델에서 허혈성 뇌졸중 재발성 손상 조사

918 조회수

⸱

DOI:

10.3791/68806

⸱

2025년 9월 16일

 ,  ,  , 
1Department of Pharmacology, University of California, Davis, 2Department of Nutrition, China Medical University, 3Division of Neurosurgery, Department of Surgery, College of Medicine and Hospital, National Taiwan University, 4Institute of Toxicology, College of Medicine, National Taiwan University, 5Department of Medical Research, China Medical University Hospital, China Medical University, 6Department of Pediatrics, College of Medicine and Hospital, National Taiwan University

* These authors contributed equally

이 논문에서

정오 공지

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

요약

여기에서는 재발성 허혈성 뇌졸중의 진행을 조사하기 위해 마우스의 이차 중대뇌동맥 폐색 방법을 제시합니다. 수술 절차, 수술 후 관리, 신경 병리학적 변화 및 생존율이 설명되어 있습니다.

초록

뇌졸중은 전 세계적으로 사망 및 장애의 두 번째로 큰 원인이며, 재발성 뇌졸중은 불량한 결과와 신경학적 부담 증가에 크게 기여합니다. 급성 임상 뇌졸중 관리의 발전에도 불구하고 재발성 허혈성 뇌졸중에 대한 실험 모델은 절차의 복잡성과 높은 사망률로 인해 여전히 제한적입니다. 본 연구에서는 마우스 모델에서 재발성 허혈성 뇌졸중을 확립하고 2단계 중대뇌동맥폐색(MCAO) 프로토콜을 사용하여 뇌의 병리학적 변화와 기능적 결손을 평가하는 것을 목표로 했습니다. 성인 수컷 C57BL/6J 마우스는 레이저 도플러 혈류 모니터링 하에서 일시적인 MCAO를 받았습니다. 뇌졸중 재발을 시뮬레이션하기 위해 초기 수술 후 14일 후에 2차 MCAO를 수행했습니다. 수술 후 평가에는 운동 활동 분석, 6점 채점 시스템을 사용한 신경행동 결손 점수, 저산소증 유도 인자-1α(HIF-1α) 및 종양 괴사 인자-α(TNF-α)를 포함한 염증 표지자, 조직병리학적 평가가 포함되었습니다. 재발성 MCAO 투여 후, 마우스는 대조군에 비해 운동 활동이 유의하게 감소하고, 이동 속도가 감소하고, 신경 행동 점수가 감소하고, 염증 표지자가 증가했습니다. 조직병리학적 검출 결과 재발성 MCAO 마우스의 피질과 해마에서 중등도에서 중증의 신경 세포 괴사, 신경필 공포화 및 국소 출혈이 나타났습니다. 염증 표지자는 또한 이 재발성 MCAO 절차에서 유도되었습니다. 이 2단계 MCAO 마우스 모델은 일관된 신경학적 및 병리학적 결과로 재발성 허혈성 뇌졸중을 효과적으로 시뮬레이션하고 수술 후 생존율을 향상시키는 방법을 처음으로 제시합니다. 이 모델은 기계론적 연구를 위한 신뢰할 수 있는 플랫폼을 제공할 수 있으며 재발성 뇌졸중에 대한 신경 보호 요법의 향후 평가에 적용될 수 있습니다.

서론

뇌졸중은 전 세계적으로 사망 및 장기 장애의 주요 원인으로 남아 있으며 상당한 임상적, 사회경제적 부담을 초래하고 있습니다. 전 세계적으로 3천만 명 이상의 사람들이 뇌졸중과 이동성 상실, 인지 장애, 혈관 질환 위험 증가 등의 결과로 영향을 받습니다 1,2. 혈전용해술 및 혈관내 혈전제거술과 같은 급성 치료의 발전에도 불구하고 많은 생존자들은 여전히 뇌졸중 재발 위험이 높으며, 이는 예후 악화, 장애 증가 및 사망률 증가와 관련이 있습니다. 재발성 뇌졸중은 1차 사건 발생 후 90일 이내에 환자의 약 10-20%에서 발생하며, 일과성 허혈 발작 또는 경미한 뇌졸중 기간 동안 위험이 가장 높습니다3. 더 중요한 것은 재발성 뇌졸중이 종종 혈관 영역에 영향을 미치고 뇌 혈역학적 장애4, 급성 및 만성 면역 조절 장애, 피질하 신경 괴사와 같은 더 광범위한 경색 및 심각한 손상을 초래한다는 것입니다.5 이는 뇌가 더 취약해지고 초기 허혈성 손상 후 더 많은 합병증을 유발할 수 있음을 시사합니다.

최근 일부 연구에서는 실험 동물에서 허혈성 또는 출혈성 뇌졸중 모델을 수행했으며 인간의 임상 조건에 맞는 영역별 손상 패턴, 중단된 신경혈관 반응 및 다양한 내인성 복구 메커니즘을 밝혔습니다 6,7. 그러나 재발성 뇌졸중의 연구 모델은 절차가 복잡하고 사망률이 높기 때문에 아직 확립되지 않은 상태로 남아 있습니다. 일부 이전 연구에서는 재발성 허혈성 뇌졸중을 연구하는 데 유용한 도구로 등장한 광혈전성 마우스 모델을 확립했습니다 8,9,10. 그들은 재발성 뇌졸중이 있는 마우스에서 악화된 신경 손상, 장기간의 염증 반응 및 인지 저하를 입증하고 다발성 경색 치매 및 염증성 프라이밍을 포함한 기본 메커니즘을 탐색했습니다 8,9,10.

또 다른 연구에서는 양측 선조체에 재발성 뇌내출혈이 발생한 새로운 노인 마우스 모델이 콜라게나제를 두 번 주사하여 운동 기능의 회복을 지연시키고 재발성 마우스에서 인지 상실 및 신경학적 손상을 유발한 것으로 나타났습니다11. 광혈전성 및 출혈성 뇌졸중 마우스 모델이 재발성 뇌졸중 동안 고유한 해부학적 영역에 병변을 자주 유발한다는 점은 주목할 가치가 있습니다. 이러한 변이는 신경 손상의 이질적인 패턴을 생성하고, 미세순환 역학을 방해하며, 말초 면역 반응에 다양한 영향을 미칩니다11,12. 대조적으로, 허혈성 뇌졸중의 가장 대표적인 설치류 패러다임으로 널리 알려진 MCAO 모델은 절차적 안정성의 이점을 제공하고 대뇌 폐색의 부위와 기간 모두를 정밀하게 제어할 수 있습니다. 그럼에도 불구하고 MCAO와 재발성 MCAO는 또한 상당히 높은 사망 위험을 입증했으며13,14 이는 실험 연구에서 광범위한 적용 가능성에 상당한 제한을 가합니다. 본 연구에서는 재발성 뇌졸중을 모방하는 안정적이고 재현 가능한 2단계 MCAO 마우스 모델을 확립하는 것을 목표로 했습니다. 우리는 관련 신경 손상, 기능 장애 및 조직병리학적 변화를 평가했습니다. 이 모델은 또한 안정적인 생존율을 입증하여 재발성 뇌졸중 병태생리학 및 신경 보호 치료 전략에 대한 향후 연구에 적용 가능성을 시사합니다.

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프로토콜

모든 동물 실험은 국립 대만 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)(연구 계획 ID20230335)의 검토 및 승인을 받았으며 실험 동물의 관리 및 사용에 대해 확립된 윤리 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 동물 준비

  1. 55% 상대 습도 및 12시간 빛/12시간 어두운 주기로 22 ± 1°C의 통제된 환경 조건에서 체중 20-25g의 8주 된 수컷 C57BL/6J 마우스를 수용합니다. 음식과 증류수를 무료로 이용할 수 있는 인도적인 보살핌을 제공하십시오.
  2. 28마리의 수컷 마우스를 가짜(n = 8), MCAO(n = 10) 및 재발성 MCAO(n = 10)의 세 그룹으로 무작위로 할당합니다. 2주 동안 동물을 격리합니다(-d14). -d7에서 순응, 계량 및 그룹화를 수행합니다. d0에 MCAO를 관리합니다. D0, D2, D14 및 D16에서 행동 테스트를 수행합니다. d14에 재발성 MCAO 수술을 수행합니다.

2. 첫 번째 외과적 MCAO 투여

  1. 모든 수술 기구를 고압멸균하여 멸균하고, 각 마우스의 무게를 측정하고, 초기 절개 1시간 전에 카프로펜을 5mg/kg으로 경구 투여하고, 산소 혼합 가스에서 3% 이소플루란으로 마취를 유도한다.
  2. 호흡수(100-120호흡/분, BPM)를 모니터링하고 눈꺼풀과 삼킴 반사를 확인하여 마취 깊이를 평가합니다. 피사체를 전자 가열판 위에 올려 체온을 37°C로 유지합니다.
  3. 머리 근처의 등과 목을 면도하고 진공청소기를 사용하여 쥐의 털과 부스러기를 제거합니다. 설치류 생존 수술을 위해 안과용 연고를 바르고 피부를 문지르고 무균 절차로 소독합니다.
  4. 가위와 피부 겸자를 사용하여 귀 사이에 초기 0.5cm 절개를 하여 중앙 유합선의 왼쪽과 두개골의 전염 후방을 노출시킵니다. 겸자를 사용하여 두개골 상단의 연조직을 제거합니다.
  5. 레이저 도플러 어댑터를 마우스의 뇌 중앙에 놓고 왼쪽 측면 3mm, 머리뼈 꼬리 2mm 위치에 조직 접착제로 부착하여 어댑터 가장자리가 두개골 기저부에 맞게 미리 트리밍되었는지 확인한 다음 레이저 도플러 캡을 접착제로 고정하여 지속적인 혈류 모니터링을 가능하게 합니다.
    참고: 이 단계에서는 레이저 도플러 캡을 조직 접착제를 사용하여 브레그마에 단단히 부착하고 두개골의 상정중선에 있는 관상 봉합사와 시상 봉합사의 교차점에 배치하여 뇌 혈류를 안정적으로 모니터링합니다.
  6. 절편 부위에 확신이 있으면 마이크로피펫을 사용하여 조직 접착제를 뽑고 어댑터 바닥 주위에 접착제를 바릅니다.
  7. 치과용 시멘트를 준비하고 도플러 캡을 둘러싸기에 충분한 양을 도포하여 시술 전반에 걸쳐 안정성을 보장합니다.
  8. 동물을 바로 누운 자세로 회전시키고 목 정중선을 따라 흉부 입구에서 턱을 향해 1cm 피부 절개를 합니다.
  9. 둔기 해부를 계속하여 이복부, 흉골설골 및 흉개유돌근의 뒤쪽 배를 분리한 다음 견인기를 사용하여 근육을 부드럽게 당겨 총동맥(CCA), 외경동맥(ECA) 및 내경동맥(ICA)을 노출시키고 CCA 주위에 6-0 실크 섹션을 배치합니다.
    참고: 이 단계에서는 CCA와 ECA의 분기점을 쉽게 분리하기 위해 침샘을 위쪽으로 돌려야 합니다. ICA는 CCA보다 우월합니다. 피부 겸자를 이용한 둔기 해부술은 혈관 파열을 예방하고 주변의 연조직과 신경을 분리하는 데 사용됩니다.
  10. ECA에서 돌출된 작은 가지(상갑상선 동맥, STA)를 찾습니다. 양극성 소작기를 사용하여 이 작은 가지를 태우십시오. 불에 탄 용기를 자르십시오. 이렇게 하면 ECA가 더욱 격리됩니다.
    참고: STA는 일반적으로 설골의 큰 뿔 수준 아래에서 나타나는 ECA의 첫 번째 가지입니다. 부상을 방지하려면 양극성 소작기를 사용하여 혈관 가지를 태워 지혈을 달성하십시오.
  11. ECA 주위에 6-0 실크 봉합사의 두 부분을 배치합니다. ECA의 말단부에 영구적인 매듭을 만들고 분기 부위에 느슨한 매듭을 만듭니다.
  12. 레이저 도플러 바늘 프로브를 두개골의 프로브 어댑터에 넣습니다. 획득 소프트웨어에 대뇌 혈류(CBF) 판독값이 표시되는지 확인합니다. 기준선 판독값을 기록합니다.
    참고: 레이저 도플러로 얻은 CBF의 표준화된 측정은 관류 단위(PU)로 제시되었으며, 기준선 값은 일반적으로 350에서 450 범위 내에서 보정되었습니다. 감소된 관류 단위(PU) 값이 관찰되면 마우스에서 레이저 도플러 프로브 어댑터의 위치를 조정하여 정확한 측정을 보장합니다(2.5단계 참조).
  13. 미세혈관 혈관 클램프를 사용하여 ICA를 고정하고 CCA 주위의 6-0 실크 섹션을 사용하여 슬립 매듭을 만들어 CCA를 일시적으로 결찰합니다.
    알림: 이 단계에서는 레이저 도플러 모니터에서 CBF 감소가 감지됩니다.
  14. 실리콘 고무 코팅 나일론 모노필라멘트를 준비합니다. 실리콘 헤드 끝에서 9-10mm 떨어진 곳에 은색 샤피를 사용하여 필라멘트를 표시하고 미세 수술 가위를 사용하여 ECA의 단단한 봉합사와 느슨한 봉합사 사이에 작은 절개를 합니다.
    참고: 절개 부위의 잔류 혈액은 혈관 무결성을 보존하기 위해 인산염 완충 식염수(PBS)로 세척하고 헹구어야 합니다.
  15. 작은 절개를 통해 필라멘트(실리콘 헤드 먼저)를 ECA에 조심스럽게 삽입합니다.
    참고: 이 필라멘트 삽입 단계는 가짜 동물에서는 생략됩니다.
  16. 실리콘 헤드의 절반 정도가 삽입되면 동맥과 필라멘트 주변의 느슨한 봉합사를 약간 조이고 ICA의 클램프를 제거합니다.
  17. 첫 번째 단단한 매듭 아래의 ECA를 자르고 ECA 용기와 필라멘트를 조심스럽게 아래로(시계 반대 방향) 돌려 실리콘 헤드가 위쪽을 향하도록 한 다음 필라멘트 끝을 ICA 쪽으로 밀어 올립니다.
    알림: 이 단계는 매우 중요하며 혈관 파괴를 최소화하고 얽힘이나 파열의 위험을 줄이기 위해 시계 반대 방향으로 천천히 수행해야 합니다.
  18. 전체 실리콘 부분이 혈관에 들어가면 고정 봉합사를 약간 조이고 CCA의 슬립 매듭을 풀고 위치 안내를 위해 필라멘트의 은색 표시를 사용하여 필라멘트를 계속 밀어 넣습니다.
  19. 레이저 도플러 소프트웨어를 지속적으로 모니터링하고, CBF의 급격한 감소가 관찰되는 동안 저항으로 인해 적절한 힘으로 필라멘트가 더 이상 전진하지 못하면 원위 중대뇌동맥으로의 삽입을 종료합니다.
    참고: CBF를 허혈 전 상태의 30% 미만으로 감소시키는 것은 Longa의 방법15로 알려진 표준 절차입니다.
  20. 필라멘트를 MCA 내에 40분 동안 유지하여 뇌 허혈성 손상을 유도합니다.
  21. 지정된 40분의 허혈 기간 후에 필라멘트를 제거하여 CBF를 재설정하고, 조직 접착제를 도포하여 지혈을 달성하고, 해당 복원된 CBF 측정값을 기록하고, 모든 견인기를 분리하고, 두개골 장착 어댑터를 제거합니다.
  22. 상처 클립으로 혈관 근처의 피부 절개 부위를 봉합하고 체온을 37°C에서 지속적으로 모니터링하며 호흡수를 평가합니다. 160-200BPM 이내의 안정적인 혈압과 호흡을 확인한 후 마취를 중단하고 회복을 기다립니다.

3. 2차 MCAO 관리

  1. 초기 MCAO 수술 후 14일 후에 상처 클립을 제거한 다음 2.1-2.9단계를 반복하여 두개골 준비를 완료하고 레이저 도플러 프로브 배치를 고정하고 CCA를 노출시킵니다.
  2. 주변 조직에서 CCA를 분리하고 CCA 주위에 6-0 실크 봉합사의 세 부분을 배치합니다.
  3. 레이저 도플러 프로브를 어댑터에 넣고 기준선 CBF를 기록합니다.
  4. CCA의 말단부에 슬립 매듭을 만들고, 근위 끝에 영구 매듭을 만들고, 그 사이에 느슨한 매듭을 만듭니다.
  5. 설명된 2.14단계에 따라 MCAO 투여를 위해 폐색 필라멘트의 실리콘 고무 코팅 나일론을 준비합니다.
  6. 영구 가까이에서 CCA를 작은 절개하고 필라멘트를 CCA에 삽입합니다.
    참고: 절개 부위의 잔류 혈액도 혈관 무결성을 보존하기 위해 PBS로 세척하고 헹구어야 합니다. 이것은 매우 중요합니다.
  7. 느슨한 매듭을 약간 조이고 슬립 매듭을 풀어줍니다. 필라멘트가 적절한 힘을 가하고 CBF의 현저한 감소가 감지될 때까지 필라멘트를 ICA로 전진시킵니다.
    참고: CBF를 허혈 전 상태의 30% 미만으로 줄이는 것도 표준 절차로 간주됩니다.
  8. 2.20단계에 지정된 대로 허혈성 손상을 유도하기 위해 필라멘트를 40분 동안 제자리에 유지합니다.
  9. 지정된 허혈 간격이 완료되면 초기 MCAO 수술의 2.21단계 및 2.22단계에 설명된 절차에 따라 필라멘트를 빼내고 피부 절개 부위를 닫습니다.

4. 수술 후 관리

  1. MCAO 수술 후 탈수를 예방하기 위해 따뜻한 생리 식염수를 10mL·kg-1·day-1 1일 2회 연속 3일 동안 피하 투여합니다. 10% 포비돈-요오드 용액을 수술 부위에 바르고 아목시실린(10mg/kg)을 투여하여 감염을 예방합니다. 수술 후 스트레스를 완화하고 첫 번째 및 두 번째 MCAO 시술 후 수의사의 감독 하에 회복을 촉진하기 위해 3일 동안 카프로펜(5mg/kg)을 경구 투여합니다.
  2. 생쥐의 건강 상태에 대한 일일 평가를 수행합니다. 첫 번째 및 두 번째 절차 동안 음식 및 물 소비뿐만 아니라 외관의 변화를 기록합니다.

5. 동물 운동 활동 및 신경생물학적 손상 평가

  1. 운동 궤적, 거리 및 속도를 평가하여 운동 활동을 평가합니다. 마우스를 테스트 상자(10 x 20 x 15cm) 내에 배치하고 낮은 광도 조건에서 구성합니다.
  2. 30분의 안정화 기간을 통해 마우스를 테스트 환경에 적응시킨 후 10분의 공식 평가를 진행합니다. 이동 거리(cm), 속도(cm/s), 이동 시간(s), 구역 내 총 지속 시간(s), 첫 번째 발생 잠복기(s) 및 방향 각도(시간)를 포함한 모든 매개변수를 기록하고 분석하여 운동 활동을 결정합니다.
  3. 수정된 운동 기능 점수 시스템(0-6점)16 및 mNSS 점수 참조(운동 기능 평가의 일부, 6점)를 사용하여 신경생물학적 손상을 평가합니다.17.
  4. 부상 수준을 다음과 같이 정의합니다: 신경학적 결손이 없는 경우 0점, 손목 또는 어깨에 영향을 미치는 전지 굴곡에 대한 점수 1, 측면 밀기에 대한 저항 감소를 동반한 전지 굴곡에 대한 점수 2, 결자 쪽을 향한 단방향 원의 경우 3점, 결자 쪽을 향한 세로 회전의 경우 4점, 발작 활동을 동반한 세로 회전의 경우 5점, 움직임의 완전한 상실에 대해 6점.

6. 헤마트실린 및 에오신 염색 프로토콜

  1. MCAO 및 재발성 MCAO 뇌 조직을 10% 포름알데히드 완충액에 고정하고 1mm 관상 마우스 뇌 슬라이서를 사용하여 표본을 4개의 동일한 부분으로 해부합니다. 병리학적 평가를 위해 세 번째 앞쪽 부분을 처리합니다.
  2. 파라핀 포매 샘플의 재수화를 수행합니다: 자일렌 10분, 95% 에탄올 10분, 75% 에탄올 10분, 50% 에탄올 10분, 증류수(ddH2O) 10분, PBS 10분.
  3. 샘플 염색: 헤마톡실린 염색을 45초 동안 염색하고 따뜻한 ddH2O에서 30°C에서 1분 동안 헹굽니다. 에오신 염색은 30초 동안, 차가운 ddH2O에서 45초 동안.
  4. 샘플을 75%, 95%, 100% 에탄올 및 자일렌에서 각각 45초 동안 탈수 및 건조하고 60초 동안 자연 건조합니다.
  5. 슬라이드를 장착하고 어두운 방에 보관하십시오.
  6. 5점 척도의 확립된 기준에 따라 병변 중증도를 평가합니다: 1 = 최소(<1%); 2 = 약간(1-25%); 3 = 보통(26-50%); 4 = 중등도에서 중증(51-75%); 5 = 심각(76-100%). 수의학 병리학자의 맹검 평가 하에 뇌 조직의 병리학적 검사를 수행합니다.

7. 웨스턴 블로팅 프로토콜

  1. 프로테아제 및 포스파타제 억제제(불화나트륨 30mM, 오르토바나데이트나트륨 30mM 및 피로인산나트륨 30mM)가 보충된 RIPA 완충액에서 MCAO 및 재발성 마우스의 뇌 조직을 균질화합니다.
  2. 원심분리기를 10,000 x g으로 용해하고 상청액을 수집합니다. 비신코닌산(BCA) 분석을 사용하여 상청액 단백질 농도를 정량화합니다.
  3. 앞서 설명한 바와 같이 웨스턴 블로팅을 수행합니다.18: 100°C의 끓는 물에서 끓여서 제조한 변성 총 단백질 20μg을 8-12% 나트륨 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔(SDS-PAGE)에 로드합니다.
  4. 100V로 90분 동안 옮겨 냉장실의 PVDF 멤브레인에 단백질을 분리하고 60분 동안 3% 소 혈청 알부민으로 멤브레인을 차단합니다.
  5. 종양 괴사 인자 알파(TNF-α, 1:1000 희석액), 글리세르알데히드-3-인산 탈수소효소(GAPDH, 1:2,000 희석액) 및 저산소증 유도 인자 1 알파(HIF-1α, 1:1,000 희석액)와 함께 4°C에서 하룻밤 배양합니다. 멤브레인을 적절한 2차 항체와 함께 1시간 동안 배양합니다.
  6. 향상된 화학발광 기질 키트(ECL)를 사용하여 단백질 발현을 검출하고 디지털 사진 이미징 시스템으로 시각화합니다.

8. 통계 분석

  1. 데이터를 평균의 평균 ± 표준 오차(SEM)로 제시하고 일원 분산 분석(ANOVA)을 사용하여 통계 분석을 수행한 다음 Tukey의 사후 테스트를 사용하여 여러 그룹 간의 차이를 결정합니다. p 가 0.05일 때 결과를 통계적으로 유의한 것으로 해석<.

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결과

첫 번째 및 재발성 MCAO 마우스의 운동 활동 및 신경 손상 평가
첫 번째 MCAO 절차에서는 실리콘 고무 코팅 나일론 모노필라멘트를 ECA, ICA에서 MCA로 40분 동안 삽입했습니다. 필라멘트가 MCA 영역에 머물고 있을 때 레이저 도플러 장비에 의해 뇌 혈류(CBF)가 눈에 띄게 떨어지는 것을 감지할 수 있었습니다(기준선의 <30%) 떨어짐). 이 절차에서 모든 마우스는 안정적으로 이 임계값을 달성하고 생존했습니다. 일부 이전 연구에서는 다른 실험에서 14일 동안 MCAO 수술 치료 후 체중 변화가 회복되고19 생존 조건이 안정적이라는 것을 나타냈습니다 2,20,21.

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토론

뇌졸중은 전 세계적으로 사망 및 장애의 두 번째 주요 원인으로 남아 있으며 재발성 뇌졸중 위험이 높습니다. 현재 의료 기술과 전략의 발전에도 불구하고 뇌졸중 및 재발 예방은 개선하기에 충분하지 않습니다. 최근 수십 년 동안 뇌졸중에 대한 다양한 연구 모델이 허혈성 뇌졸중 손상 및 메커니즘에 대한 연구 조사에 널리 사용되었습니다. 그 중 MCAO 수술 방법은 신경학적 기전 탐색 및 보호 연구의 40% 이상에서 인간의 허혈성 뇌졸중 장애 및 합병증에 가장 가까운 것으로 간주됩니다24. 그럼에도 불구하고 외과적으로 두 번째 MCAO 절차의 복잡성과 다양성으로 인해 동물 실험에서 허혈성 재발성 뇌졸중을 조사하는 연구는 거의 없습니다. Qiao 등은 쥐25에서 두 번째 MCAO 모델을 연속적으로 확립했습니다.

우리의 연구 결과와 유사하게, 액포...

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공개 사항

저자는 선언할 이해 상충이 없습니다.

감사의 글

이 작업은 국립 실험 동물 센터 팀의 기술적 지원과 대만 국립 대만 대학 병원 재단(112-S0074), 대만 중국 의과대학 병원(CMU113-S-06) 및 대만 타이페이 국립 과학 기술 위원회(112-2314-B-002 -219)의 보조금으로 재정적으로 지원되었습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
6-0 실크 봉합  신테 주식회사 경고.ST1N-ST6
1mm 코로나 마우스 뇌 슬라이서서모피셔 사이언티픽, 미국V11335
동물 머리깎이어버너. 주식회사 경고MB033
코로나 마우스 뇌 슬라이서지빅 기구. 미국 주식회사;BSMAS001-1
디지털 사진 이미지 시스템Azure Biosystem, Inc., 더블린, 캘리포니아, 미국Azure -300
전자 바이폴라 소작기인디아마트아론 940
전자 히트플레이트렙티주AHM23
눈 연고로디 수의과. 우리17033-21-38
레이저 도플러 검출기무어 악기 영국  moorVMS-LDF1-HP
레이저 도플러 프로브 어댑터써모피셔 사이언티브 주식회사05-700-76
운동 활동 감지기 오키드 사이언티픽 주식회사모든 Maze 추적 소프트웨어입니다.
(모든 미로 시스템)오키드 사이언티픽 주식회사트라케지. 버전 7.39
미세혈관 클램프신테 주식회사 경고.ST-M104
미세외과 혈관 가위신테 주식회사 경고.ST-V108
호흡 속도 모니터SDR 사이티픽 Ltd. 미국SAR-830/AP
실리콘 고무 코팅 나일론 모노필라멘트피셔 사이언티픽NC1773962
피부 겸자신테 주식회사 경고.ST-H212
스킨 가위신테 주식회사 경고.ST-S014PK
멸균 면봉위너 메디컬401 003
전송 시스템반건식 시스템. 바이오-라디 연구소, 미국)1703940
<강>화학
10% 포비돈– 요오드 용액요시다 제약주식회사 JAPPVP– 나  10%
75% 에탄올 용액  시그마-올드리치. 미국111727
아목시실린시그마-올드리치, 미국;A5955
소 혈청 알부민시그마-올드리치, 미국.A2153
카프로펜플렉섹스 주식회사 영국MD150-2
GAPDH 항체산타크루즈 바이오테크놀로지, 캘리포니아, 미국SC-32233
H& E 해법바이오파이오니어 테크. CO. TWG1005
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Formal Correction: Erratum: Investigating Ischemic Stroke Recurrent Injury in a Secondary Middle Cerebral Artery Occlusion Model in Mouse
Posted by JoVE Editors on 1/01/1970. Citeable Link.

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