이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.

방법 논문

CD8+CD103+ 트레그는 CD4+ T 세포 매개 염증 억제와 쥐의 안구 표면 완전성 보호를 통해 안구건조증을 완화합니다

319 조회수

⸱

DOI:

10.3791/69110

⸱

2025년 11월 21일

 , 
1Department of Ophthalmology, Jinan Second People's Hospital

이 논문에서

요약

여기서는 CD8+CD103+ 조절 T 세포를 면역치료 개입으로 활용하여 병원성 CD4+ T 세포 반응을 포괄적으로 조절하여 건조성 스트레스성 안구 건조증을 완화하는 프로토콜을 제시합니다.

초록

CD8+CD103+ 조절 T 세포는 자가면역 질환에서 치료 잠재력이 입증된 특수화된 면역억제 집단을 대표합니다; 그러나 이들이 안구 표면 염증에서 차지하는 역할은 아직 밝혀지지 않았습니다. 이 프로토콜은 건조 스트레스에 노출된 쥐에서 CD8+CD103+ T 세포를 분리하고, 실험적 안구 건조증에서 입양 이식을 통한 치료 효능을 평가하는 체계적 접근법을 설명합니다. 이 방법론은 CD8+CD103+ T세포 정제를 위한 자기 활성화 세포 분류, 표준화된 건조 스트레스 유도, 그리고 눈물 생성 측정, 각막 장벽 투과성 검사, 염증 매개체의 분자 분석 등 포괄적인 기능 평가를 포함합니다. 대표적인 결과는 CD8+CD103+ T 세포 치료가 눈물 생성을 유의미하게 회복시키고, 결막 고블릿 세포 집단을 보존하며, 각막 상피 장벽의 완전성을 유지함을 보여줍니다. 치료는 기질 금속단백효소 발현의 상당한 억제, 세포 사망 감소, 그리고 사이토카인 프로필을 염증성 패턴에서 조직 보호 패턴으로 조절하는 데 기여했습니다. 이 프로토콜은 안구 조직 내 CD4+ T 세포 침윤을 효과적으로 줄이는 동시에 병원성 IL-17A 및 IFN-γ 생성을 억제하고 보호하는 IL-13 수치를 증가시켰습니다. 이 접근법은 안구 표면 질환에서 CD8+CD103+ T 세포 매개 면역조절을 연구할 수 있는 견고한 실험적 틀을 제공하며, 안구건조증 관리를 위한 새로운 세포 기반 치료법 개발의 기초 방법을 확립합니다.

서론

안구건조증(DED)은 전 세계 인구의 10-30%에 영향을 미치고 환자의 삶의 질, 업무 생산성, 심리적웰빙에 심각한 영향을 미치는 심각한 전 세계 건강 문제로 떠오르는 널리 퍼져 있고 쇠약하게 만드는 안표면 질환입니다. DED의 병태생리학은 눈물막 불안정, 안구 표면 염증, 신경감각 이상 간의 복잡한 상호작용을 포함하며, 이들이 조직 손상과 기능 장애의 악순환을 지속시킵니다. 분자 수준에서 눈물 과삼투압은 중심 병원성 기전으로서 연쇄적인 염증 사건을 유발하여 스트레스 반응 경로를 활성화하고, 염증 촉진 매개체 방출을 유도하며, 궁극적으로 안구 표면 미세환경의 섬세한 항상성 균형을 저해합니다 5,6,7.

DED의 면역학적 환경은 적응 면역 반응이 지배적이며, CD4+ T 세포 매개 면역은 안구 표면 손상과 만성 염증 지속에 중요한 역할을 합니다8. CD8+ T 세포는 안구 조직 내에서 정상적인 항상성 면역 세포 집단의 필수 구성 요소로, 생리학적 조건 하에서 면역 감시와 조직 완전성을 유지합니다9. 획기적인 연구들은 건조 스트레스(DS)가 항원 제시 세포를 활성화시키고, 이후 CD4+ T 세포를 병원성 표현형으로 유도하며, 이로 인해 T세포 결핍 누드 마우스에 이식될 때 자가면역 눈막결막염(KCS)을 유도하여 인간 DED10,11의 주요 특징을 재현할 수 있음이 입증되었습니다.

DED 발병기전에서 조절 이상이 된 CD4+ T 세포 반응이 중심적인 역할을 하는 점을 고려할 때, 병원성 T 세포 면역 조절을 표적으로 하는 치료 전략이 이 질환 관리에 유망한 접근법으로 떠오르고 있습니다. 이와 관련하여, CD8+ 조절 T 세포(Treg), 특히 CD8+CD103+ 하위 집합은 다양한 자가면역 및 염증 질환에서 강력한 면역억제 능력과 조직 보호 기능으로 인해 큰 주목을 받고 있습니다. 이 특수화된 조절 집단은 사이토카인 매개 억제, 직접 세포 간 접촉 억제, 효과 림프구 기능의 대사 조절 등 여러 메커니즘을 통해 면역 반응을 조절합니다 12,13,14. 인테그린 αEβ7(CD103)은 점막 조직 전반에 걸쳐 상피 내 림프구 위치를 촉진하는 중요한 귀환 수용체 역할을 하며, CD8+CD103+ Treg가 염증 부위에서 국소적인 면역조절 효과를 발휘할 수 있게 합니다15.

CD8+CD103+ Treg가 자가면역 점막 질환16, 17, 18 등 다양한 질환에서 유해 면역 반응을 완화하는 데 있어 상당한 치료 잠재력을 가진다는 증거가 점점 늘고 있습니다. 이 세포들은 점막 부위에 선호적으로 축적되는 독특한 수송 패턴을 보이며, 조직 파괴성 면역 반응을 효과적으로 상쇄하고 치유와 항상성을 촉진할 수 있습니다. 최근 연구들은 CD8+CD103+ T 세포가 안구 표면 면역에서 어떤 역할을 하는지 밝히기 시작했으며, DS 노출 후 자궁경부 림프절에서 수치 확장과 결막 조직으로 이동하는 능력이 19,20,21,22로 나타났음을 입증했습니다. 그러나 이러한 흥미로운 관찰에도 불구하고, CD8+CD103+ T 세포가 안구 건조증 병인에 미치는 구체적인 기능적 기여와 CD4+ T 세포 매개 안구 표면 손상 조절에서의 치료 잠재력은 아직 완전히 이해되지 않았습니다.

CD8+CD103+ Tregs의 채택 전달은 인공 눈물, 항염증제, 면역억제제 등 기존 DED 치료법에 비해 뚜렷한 진보를 보여주며, 단순히 증상 증상을 다루는 것이 아니라 근본적인 병원성 면역 기전을 표적으로 삼는 것입니다23. 전신 면역억제 치료가 면역 기능을 광범위하게 억제하는 것과 달리, CD8+CD103+ Treg 기반 중재는 병원성 CD4+ T 세포 반응을 표적으로 조절하면서 보호 면역을 유지합니다24. 이 접근법은 중간엽 줄기세포 적용과 CD4+CD25+ Treg 이식과 같은 기존 세포 기반 치료법을 보완하며, CD103 매개 귀환 기전을 통해 점막 조직의 특이성을 향상시킨다25.

CD8+CD103+ T 세포가 안구 건조 발병 기전에 영향을 미칠 수 있는 조절 기전에 관한 중요한 지식 공백은 이 쇠약한 상태에 대한 표적 면역치료 개입 개발에 중요한 장애물이 됩니다. 더불어, 안구 표면 염증에서 조절 및 효과 T 세포 집단 간의 복잡한 상호작용은 새로운 치료 표적을 식별하고 치료 전략을 최적화하기 위한 체계적인 연구가 필요합니다. 본 연구는 잘 확립된 안구 건조증 마우스 모델에서 CD8+CD103+ T 세포 매개 CD4+ T 세포 매개 병원성 과정을 포괄적으로 특성화하는 것을 목표로 합니다. 핵심 방법론적 혁신은 CD8+CD103+ 조절 세포의 순차적 분리, 이후 채택 전달과 기능적, 조직학적, 분자 지표의 종합 평가를 통해 치료 효능을 확립하고 기전을 밝히는 것입니다. 궁극적인 목표는 안구 표면의 면역 반응에 대한 이해를 높이고, 인간에서 DED 관리를 위한 잠재적 치료 전략을 발견하는 것이었습니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

프로토콜

동물을 이용한 모든 실험 절차는 안과 및 시각 연구에서 동물 사용을 위한 ARVO 선언에 엄격히 따라 수행되었으며, 지난 제2인민병원 실험동물윤리위원회의 승인을 받았습니다. 3Rs 원칙(대체, 감소, 정제)에 따라 동물 고통을 최소화하고 동물 수를 줄이기 위한 모든 노력이 이루어졌습니다.

1. 동물 준비 및 실험 설계

  1. 특정 병원체가 없는 건강 상태를 가진 승인된 실험동물 시설(품종 코드: 027)에서 6-8주 된 암컷 C57BL/6 마우스를 확보하세요.
  2. 동물을 통제된 환경에서 키우며, 12시간의 밝고 어둠 주기(조명 06:00-18:00), 온도 22± 2°C, 상대 습도 50-60%를 환경 모니터링 시스템을 사용해 유지합니다.
  3. 실험 절차 전 1주일간 동물이 적응할 시간을 주고, 표준 실험실 식사와 물을 자유롭게 제공하세요.
  4. 컴퓨터 생성 무작위 배정을 사용하여 32마리의 쥐를 네 개의 실험군(n=8개)으로 무작위화하는데, 비스트레스 대조군(NS), 건조 스트레스 단독(DS), 차량 대조군과 건조 스트레스(DS + VC), 그리고 CD8+CD103+ T 세포 처리(DS + CD8+CD103+)를 포함한 건조 스트레스입니다.
    참고: 동물의 고통 징후를 매일 모니터링하세요. 예를 들어 활동 감소나 체중 감소가 10%를 초과하는 경우입니다.

2. 건조 응력 유도

  1. 사용 직전에 0.5 mg을 0.2 mL의 멸균 인산염 완충 생리식염수(PBS)에 용해하여 스코폴라민 하이드로브로마이드 용액을 제조하여 최종 농도는 2.5 mg/mL로 만듭니다.
  2. 스코폴라민을 체중 0.5 mg/kg 용량(약 0.04 mL/20g 마우스)으로 하루 4회 8:00, 12:00, 15:00, 18:00 연속으로 5일 연속 27G 바늘을 투여합니다.
  3. 가변 속도 팬을 배치하여 표준 속도 15 m/s의 연속 공기 흐름을 생성하고, 디지털 풍속계 보정을 사용해 케이지 수준에서 측정합니다.
  4. 활성 실리카겔(Grade 40, 6-12 mesh)이 포함된 건조제 챔버를 사용해 주변 습도를 40% 이하로 유지하고, 디지털 습도계로 환경을 지속적으로 모니터링하세요(정확도±2% RH).
  5. 정밀 환경 제어 시스템을 사용해 전체 노출 기간 동안 22 ± 1 °C의 온도를 유지하고 지속적으로 모니터링합니다.
  6. 탈수, 체중 감소(>15% 제외), 또는 과도한 미용이나 활동 감소 등 고통스러운 행동 징후를 하루 두 번 관찰하세요.

3. CD8+CD103+ T 세포 분리 및 정제

  1. 승인된 안락사 프로토콜에 따라 CO₂ 질식과 자궁경부 탈구로 인해 건조 스트레스를 겪은 기증자 쥐를 희생시키십시오.
  2. 생물학적 안전 캐비닛 내 멸균 기구를 사용해 멸균 조건에서 비장과 경부 표면 림프절을 채취하며, 조직을 얼음처럼 차가운 RPMI-1640 배지에 넣고 10% 태아 소 혈청을 보충합니다.
  3. 멸균 주사기 플런저를 사용해 70 μm 세포 체를 통해 조직을 기계적으로 파괴하고, 2% FBS와 1 mM 에틸렌디아미네테트라아세트산(EDTA)을 포함한 PBS로 세포를 두 번 세척하여 단일 세포 현탁액을 준비합니다.
  4. 제조사 지침에 따라 항CD8 항체가 결합된 자기 미세비드를 이용한 자기 활성화 세포 분류를 사용하여 CD8+ T 세포를 분리합니다.
  5. 트리판 블루 배제 분석법(0.4% 용액)을 사용하여 세포 생존성을 평가하며, 자동 세포 계수기를 사용해 생존 가능 및 비생존 세포를 세고, 95% 이상의 제제만 진행합니다.
  6. 1:100 희석 상태로 항-CD103-APC 항체를 순차적으로 배양하여 4 °C에서 어두운 환경에서 30분간 CD103+ 발현을 증축합니다.
  7. LS 컬럼과 함께 항알로피코시아닌(anti-APC) 마이크로비즈를 사용해 2차 자기 분리를 수행하여 제조사 프로토콜에 따라 CD8+CD103+ 이중 양성 세포를 얻습니다.
  8. 유동 세포분석을 이용해 알리코트를 항-CD8-FITC 및 항-CD103-APC 항체로 염색하여 >90% CD8+CD103+ 이중 양성 세포 집단을 확보한 후 진행 절차를 진행합니다.

4. 채택 전송 프로토콜

  1. CD8+CD103+ T 세포 현탁액을 5 × 106 세포/mL 농도로, 멸균 인산염 완충 식염수에서 세포를 300 × g에서 원심분리하여 5분간 적절한 부피에 재현탁하여 준비 합니다.
  2. 건조 스트레스 시작 시점과 비교해 2일, 0일, +2일에 멸균 PBS 200 μL × 106개의 세포를 복강 내 주입하며, 각 주사 전에 부드럽게 혼합하도록 합니다.
  3. 동일한 주사 일정과 기법을 사용하여 실험 일관성을 유지하기 위해 차량 대조군에 동일한 양의 멸균 PBS를 투여합니다.
  4. 최적의 생존력과 기능을 유지하기 위해 세포 준비를 얼음 위에 유지하고, 격리 후 2시간 이내에 이식을 완료하세요.
  5. 주사 부위를 좌우 하복부 사이에 회전시켜 국소 염증을 최소화하고, 주사 후 24시간 동안 동물의 부작용을 관찰하세요.

5. 기능 평가 절차

  1. 찢어진 생성 측정
    1. 눈물 생성의 생체 변동을 반영하기 위해 오후 8시에 일관되게 측정을 수행하세요.
    2. 마취 없이 적절한 구속 장치를 사용해 자연스러운 눈물 생성 메커니즘에 방해가 되지 않도록 부드럽게 쥐를 제지하세요.
    3. 페놀 레드 함침 면실을 하부 결막 포르닉스에 정확히 15초간 가는 핀셋을 사용해 놓습니다.
    4. 표준 형광등 조건에서 정밀 디지털 캘리퍼스(정확도 ± 0.01mm)를 사용하여 젖은 나사 길이를 즉시 측정하세요.
  2. 각막 장벽 기능 평가26
    1. 추적 물질 적용 중 2% 이소플루란 흡입으로 마우스를 잠시 마취하여 정확한 주입을 보장합니다.
    2. 정밀 마이크로피펫(양방향 팁)을 사용해 50 mg/mL 오리건 그린덱스트란 용액 0.5 μL을 중앙 각막 표면에 주입합니다.
    3. 1분 배양 후 과도한 추적자를 제거하기 위해 각막을 멸균 식염수로 5번 꼼꼼히 헹구고, 표면 형광을 완전히 제거하세요.
    4. 형광 현미경을 사용해 형광 현미경을 사용하고, Fluorescein isothiocianate(FITC) 필터 세트(여기 490 nm, 방출 525 nm)와 표준화된 노출 매개변수를 사용하여 각막을 즉시 촬영합니다.
    5. ImageJ 소프트웨어를 사용하여 일관된 관심 영역 선택 및 배경 감산 프로토콜을 사용하여 형광 강도를 정량화합니다.
      1. 이미지를 8비트 그레이스케일로 변환하고, 각막 중앙 3mm 직경을 포함하는 표준화된 원형 관심 영역(ROI)을 정의합니다.
      2. 평균 회색값을 측정하고, 인접한 비각막 영역에서 측정한 배경 형광을 빼고, 결과를 보정 총 형광(CTF)으로 표현합니다: CTF = 통합 밀도 - (ROI 면적× 평균 배경 형광)22.

6. 조직학적 처리 및 분석

  1. 안락사 직후 눈과 주변 구조물을 제거한 후 4% 파라포름알데히드에 24시간 고정하거나, 동결 절편을 위해 최적의 절단 온도(OCT) 화합물에 삽입하여 시상 절편 절편을 위한 올바른 방향을 보장합니다.
  2. 표준화된 해부학적 랜드마크(시신경을 기준점으로 삼음)를 사용하여 모든 표본에서 일관된 절편면을 위해 시상 절개(냉동 시 6 μm, 파라핀 시 5 μm)를 준비합니다.
  3. 적절한 양성 및 음적 대조군을 포함한 표준화된 프로토콜을 사용하여 주기산-쉬프(PAS) 염색을 수행하여 고블릿 세포 정량화를 수행합니다.
  4. 1차 항체(anti-MMP-3 (1:200), anti-MMP-9 (1:100), 항활성화 카스파제-3(1:300), 항활성화 카스파제-8 (1:200), 항-CD4 (1:100) 사용으로 4 °C에서 하룻밤 잠복하여 면역형광 염색을 수행합니다.
  5. 체계적인 샘플링 방법을 사용하여 결막 길이 1mm당 고블릿 셀을 정량화하고, 각 단면당 겹치지 않는 5개의 고출력 필드에서 세포를 세고 결과를 평균화합니다.

7. 분자 분석

  1. 검증된 추출 프로토콜을 사용하여 결합된 결막 및 각막 조직에서 총 RNA를 추출합니다.
  2. cDNA 합성과 실시간 정량 PCR28
    1. 총 RNA 1 μg, 올리고-dT 프라이머(50 μM), 무작위 헥사머 프라이머(100 μM), 역전사효소 효소, 반응 버퍼, 그리고 누클레아제가 없는 물을 최종 20 μL 용량에 포함한 역전사 반응 혼합물을 준비합니다.
    2. 반응 혼합물을 37°C에서 열 사이클러에서 15분간 배양하여 첫 가닥 cDNA 합성을 가능하게 합니다.
    3. 역전사효소를 85°C에서 5초간 가열하여 비활성화한 후 4°C까지 냉각하고 cDNA를 -20°C에 저장하여 사용한다.
    4. 이후 PCR 반응에서 템플릿으로 사용하기 위해 뉴클레아제가 없는 물과 함께 희석한 cDNA 1:10을 합성했습니다.
    5. 희석된 cDNA 주형 1 μL, 순방향 및 역방향 프라이머(각 최종 농도 0.2 μM), SYBR 그린 마스터 믹스, 뉴클레아제 무첨가수를 포함한 실시간 PCR 반응 혼합물(최종 부피 20 μL)을 준비합니다.
    6. 시료는 3회로 96웰 광학 반응판에 적재되며, 각 프라이머 쌍에 대해 무주형 제어 제어 장치를 포함합니다.
    7. 열 사이클러에 다음 조건을 적용하여 프로그래밍합니다: 95 °C에서 10분간 초기 변성, 이어서 40회 변성(95 °C에서 15초), 어닐링(60 °C에서 30초), 확장(72 °C에서 30초).
    8. 증폭 직후 해리 곡선 단계를 포함하는데, 95 °C에서 15초, 60 °C에서 1분, 이후 0.3 °C/s 속도로 점진적으로 온도를 95 °C까지 올려 단일 생성물 증폭을 검증합니다.
    9. 계측기 소프트웨어를 사용해 증폭 곡선과 사이클 임계값(Ct) 값을 분석하여 모든 프라이머 쌍의 증폭 효율을 90-110% 사이에 보장합니다.
    10. 2-ΔΔCt 방법을 사용하여 하우스키핑 유전자 GAPDH에 표적 유전자 발현(IL-17A, IFN-γ, IL-13, MMP-3, MMP-9)을 정규화합니다.
    11. 표 1 에 명시된 프라이머 서열을 모든 표적 및 참조 유전자에 대해 사용하세요.
  3. 적절한 표준 곡선과 품질 관리를 갖춘 시중판 ELISA 키트를 사용하여 조직 추출물 내 사이토카인 단백질 수준을 정량화합니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

결과

이 프로토콜의 성공적인 구현은 CD8+CD103+ T 세포 매개 면역조절을 통해 건조성 스트레스 유발 안표면 병리를 포괄적으로 개선하는 결과를 가져왔습니다. 긍정적인 결과는 눈물 생성이 유의미하게 회복되었음을 보여주며, 비스트레스 대조군에 비해 일반적으로 60-80% 회복을 이루는 반면, 차량 치료 동물은 지속적인 유액 결손을 보입니다(그림 1A).

성공적인 치료는 결막 고블릿 세포 집단을 비스트레스 대조군에서 관찰된 수준에 근접하게 유지하며, PAS 염색과 정량적 세포 열거를 통해 결막 길이 1밀리미터당 고블릿 세포 밀도가 정규화됩니다(그림 1B, C). 최적의 결과...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

토론

본 연구는 CD8+CD103+ 조절 T 세포가 CD4+ T 세포 매개 병원성 반응을 포괄적으로 조절하여 스트레스 유발 안구 건조증을 건조시키는 강력한 치료제임을 확립합니다. 연구 결과는 CD8+CD103+ T 세포의 입양 이식이 눈물 생성의 기능적 회복, 점막 구조 보존, 상피 장벽 기능 유지, 염증 조직 손상 억제 등 안구 표면 완전성을 다면적으로 보호한다는 것을 보여줍니다.

이 연구는 CD8+CD103+ Tregs가 CD4+ T 세포 유발 발병 기전에서 억제 역할을 함을 보여주며, 안구 표면에 영향을 미치는 스트레스에 대한 적응 면역 반응의 조절 계층 구조에 대한 이해가 발전하는 것을 뒷받침합니다31. CD8+CD103+ T 세포 치료가 국소 결막 CD4+ T 세포 침윤과 배액 림프절에서의 전신 CD4+ T 세포 확장을 효과적으로 감소시킨다는 입증은 이러한 조절 세포가 여러...

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

공개 사항

저자들은 이 원고에 묘사된 작업에 부적절하게 영향을 미칠 수 있는 재정적 또는 기타 상반된 이해관계가 없다고 선언한다.

감사의 글

우리는 실험 기간 내내 최적의 주거 환경을 유지한 지난 제2인민병원 실험실 직원과 동물 관리 시설 직원들의 기술 지원에 감사드립니다.

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
항-CD103-APC 항체바이오레전드클론 2에피소드 7유동 세포 분석 및 세포 분류
안티-CD8 자기 마이크로비즈밀텐이 바이오텍-자기 셀 분리
각막 오리건 그린덱스트란인비트로젠D7172분자량 70,000
ELISA 키트 IFN-및 감마;e바이오사이언스BMS606사이토카인 정량
ELISA 키트 IL-13e바이오사이언스BMS6015사이토카인 정량
ELISA 키트 IL-17Ae바이오사이언스BMS6001사이토카인 정량
이미지J국립보건원(NIH)버전 1.53k
페놀 레드 면 실존-퀵, 요코타-찢어진 생성 측정
스코폴라민 하이드로브로마이드멜론파마MB5860무스카린 길항제

참고문헌

  1. Tang, Q., et al. Selective decrease of donor-reactive T(regs) after liver transplantation limits T(reg) therapy for promoting allograft tolerance in humans. Sci Transl Med. 14 (669), eabo2628(2022).
  2. Harrell, C. R., Feulner, L., Djonov, V., Pavlovic, D., Volarevic, V. The molecular mechanisms responsible for tear hyperosmolarity-induced pathological changes in the eyes of dry eye disease patients. Cells. 12 (23), 2755(2023).
  3. Britten-Jones, A. C., et al. Epidemiology and risk factors of dry eye disease: considerations for clinical management. Medicina (Kaunas). 60 (9), 1458(2024).
  4. Bhujbal, S., Rupenthal, I. D., Steven, P., Agarwal, P. Inflammation in dry eye disease-pathogenesis, preclinical animal models, and treatments. J Ocul Pharmacol Ther. 40 (10), 638-658 (2024).
  5. Nieto-Aristizabal, I., Mera, J. J., Giraldo, J. D., Lopez-Arevalo, H., Tobon, G. J. From ocular immune privilege to primary autoimmune diseases of the eye. Autoimmun Rev. 21 (8), 103122(2022).
  6. Sheppard, J., Shen Lee, B., Periman, L. M. Dry eye disease: identification and therapeutic strategies for primary care clinicians and clinical specialists. Ann Med. 55 (1), 241-252 (2023).
  7. Rolando, M., Merayo-Lloves, J. Management strategies for evaporative dry eye disease and future perspective. Curr Eye Res. 47 (6), 813-823 (2022).
  8. Vereertbrugghen, A., et al. CD4+ T cells drive corneal nerve damage but not epitheliopathy in an acute aqueous-deficient dry eye model. Proc Natl Acad Sci U S A. 121 (48), e2407648121(2024).
  9. Yaman, E., et al. Mouse corneal immune cell heterogeneity revealed by single-cell RNA sequencing. Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (12), 29(2024).
  10. Niederkorn, J. Y., et al. Desiccating stress induces T cell-mediated Sjogren's syndrome-like lacrimal keratoconjunctivitis. J Immunol. 176 (7), 3950-3957 (2006).
  11. Ogawa, Y., Takeuchi, T., Tsubota, K. Autoimmune epithelitis and chronic inflammation in Sjogren's syndrome-related dry eye disease. Int J Mol Sci. 22 (21), 11820(2021).
  12. Flippe, L., Bezie, S., Anegon, I., Guillonneau, C. Future prospects for CD8+ regulatory T cells in immune tolerance. Immunol Rev. 292 (1), 209-224 (2019).
  13. Olson, K. E., Mosley, R. L., Gendelman, H. E. The potential for Treg-enhancing therapies in nervous system pathologies. Clin Exp Immunol. 211 (2), 108-121 (2023).
  14. Boonpiyathad, T., Sozener, Z. C., Akdis, M., Akdis, C. A. The role of Treg cell subsets in allergic disease. Asian Pac J Allergy Immunol. 38 (3), 139-149 (2020).
  15. Xu, W., Bergsbaken, T., Edelblum, K. L. The multifunctional nature of CD103 (αEβ7 integrin) signaling in tissue-resident lymphocytes. Am J Physiol Cell Physiol. 323 (4), C1161-C1167 (2022).
  16. Zhang, X., et al. CD8+CD103+ iTregs inhibit chronic graft-versus-host disease with lupus nephritis by the increased expression of CD39. Mol Ther. 27 (11), 1963-1973 (2019).
  17. Liu, Y., et al. Phenotypic and functional characteristic of a newly identified CD8+ Foxp3- CD103+ regulatory T cells. J Mol Cell Biol. 6 (1), 81-92 (2014).
  18. Chen, Q., et al. CD8+ CD103+ iTregs protect against ischemia-reperfusion-induced acute kidney injury by inhibiting pyroptosis. Apoptosis. 29 (9-10), 1709-1722 (2024).
  19. Kaneko, N., et al. Cytotoxic CD8+ T cells may be drivers of tissue destruction in Sjogren's syndrome. Sci Rep. 12 (1), 15427(2022).
  20. Kudryavtsev, I., et al. Circulating CD8+ T cell subsets in primary Sjogren's syndrome. Biomedicines. 11 (10), 2778(2023).
  21. Heidari, M., Noorizadeh, F., Wu, K., Inomata, T., Mashaghi, A. Dry eye disease: emerging approaches to disease analysis and therapy. J Clin Med. 8 (9), 1439(2019).
  22. Ibiayo, A. G., Varinthra, P., Nagarajan, M., Liu, I. Y. Coniferaldehyde reverses 3-nitropropionic acid-induced Huntington's disease pathologies via PKM2 restoration and JAK2/STAT3 inhibition. Mol Med. 31 (1), 271(2025).
  23. Loi, J. K., et al. Corneal tissue-resident memory T cells form a unique immune compartment at the ocular surface. Cell Rep. 39 (8), 110852(2022).
  24. Kennedy-Batalla, R., et al. Treg in inborn errors of immunity: gaps, knowns and future perspectives. Front Immunol. 14, 1278759(2023).
  25. Suffia, I., Reckling, S. K., Salay, G., Belkaid, Y. A role for CD103 in the retention of CD4+CD25+ Treg and control of Leishmania major infection. J Immunol. 174 (9), 5444-5455 (2005).
  26. De Paiva, C. S., et al. IL-17 disrupts corneal barrier following desiccating stress. Mucosal Immunol. 2 (3), 243-253 (2009).
  27. Rio, D. C., Ares, M. Jr, Hannon, G. J., Nilsen, T. W. Purification of RNA using TRIzol (TRI reagent). Cold Spring Harb Protoc. 2010 (6), (2010).
  28. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(−ΔΔC(T)) method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  29. Zareh, H., et al. Doxycycline versus curcumin for inhibition of matrix metalloproteinase expression and activity following chemically induced inflammation in corneal cells. J Ophthalmic Vis Res. 19 (3), 273-283 (2024).
  30. Yang, X., et al. IFN-gamma facilitates corneal epithelial cell pyroptosis through the JAK2/STAT1 pathway in dry eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 64 (3), 34(2023).
  31. Lollett, I. V., Galor, A. Dry eye syndrome: developments and lifitegrast in perspective. Clin Ophthalmol. 2018, 125-139 (2018).
  32. Zhang, X., et al. CD8+ cells regulate the T helper-17 response in an experimental murine model of Sjogren syndrome. Mucosal Immunol. 7 (2), 417-427 (2014).
  33. Zhou, H., Yang, J., Tian, J., Wang, S. CD8+ T lymphocytes: crucial players in Sjogren's syndrome. Front Immunol. 11, 602823(2020).
  34. Lu, Z., et al. Rapid and quantitative detection of tear MMP-9 for dry eye patients using a novel silicon nanowire-based biosensor. Biosens Bioelectron. 214, 114498(2022).
  35. Burgalassi, S., et al. Functionalized hyaluronic acid for "in situ" matrix metalloproteinase inhibition: a bioactive material to treat the dry eye syndrome. ACS Macro Lett. 11 (10), 1190-1194 (2022).
  36. Chen, X., et al. Tc17/IL-17A up-regulated the expression of MMP-9 via NF-kappaB pathway in nasal epithelial cells of patients with chronic rhinosinusitis. Front Immunol. 9, 2121(2018).
  37. Alam, J., et al. IL-17 producing lymphocytes cause dry eye and corneal disease with aging in RXRalpha mutant mouse. Front Med (Lausanne). 9, 849990(2022).
  38. Flores-Pliego, A., et al. Matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) is an endogenous activator of the MMP-9 secreted by placental leukocytes: implication in human labor. PLoS One. 10 (12), e0145366(2015).
  39. You, Y., et al. Investigation of conjunctival goblet cell and tear MUC5AC protein in patients with Graves' ophthalmopathy. Transl Vis Sci Technol. 12 (10), 19(2023).
  40. Tukler Henriksson, J., Coursey, T. G., Corry, D. B., De Paiva, C. S., Pflugfelder, S. C. IL-13 stimulates proliferation and expression of mucin and immunomodulatory genes in cultured conjunctival goblet cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (8), 4186-4197 (2015).
  41. Fang, Z., et al. Clinical ocular surface characteristics and expression of MUC5AC in diabetics: a population-based study. Eye (Lond). 38 (16), 3145-3152 (2024).
  42. Garcia-Posadas, L., et al. Interaction of IFN-gamma with cholinergic agonists to modulate rat and human goblet cell function. Mucosal Immunol. 9 (1), 206-217 (2016).
  43. Volpe, E. A., et al. Interferon-gamma deficiency protects against aging-related goblet cell loss. Oncotarget. 7 (40), 64605-64614 (2016).
  44. Gustafsson, J. K., Hansson, G. C. Immune regulation of goblet cell and mucus functions in health and disease. Annu Rev Immunol. 43 (1), 169-189 (2025).
  45. Lin, N., et al. Ectoine enhances mucin production via restoring IL-13/IFN-gamma balance in a murine dry eye model. Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (6), 39(2024).
  46. Ogawa, Y., Shimizu, E., Tsubota, K. Interferons and dry eye in Sjogren's syndrome. Int J Mol Sci. 19 (11), 3548(2018).
  47. Zhang, X., et al. Interferon-gamma exacerbates dry eye-induced apoptosis in conjunctiva through dual apoptotic pathways. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (9), 6279-6285 (2011).
  48. Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624(2025).

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

태그

TCD4 T
동영상 곧 제공
문의하기
사서에게 추천하기

개인정보

이용 약관

정책

저작권 © 2026 MyJoVE Corporation. 모든 권리 보유.