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방법 논문

질병 진단 및 치료에 개별 sEV의 표면 강화 라만 산란 기반 생체감지 적용 탐구

405 조회수

⸱

DOI:

10.3791/69258

⸱

2026년 3월 13일

 ,  ,  , 
1Department of Materials Science and Engineering, University of California Los Angeles, 2Cornea Division, Stein Eye Institute, University of California Los Angeles

* These authors contributed equally

이 논문에서

요약

여기서는 라벨 없는 표면 증강 라만 분광법(SERS)을 사용하여 개별 작은 세포외 소포(sEV)를 분석하는 프로토콜을 제시하여, 최소 침습 질환 진단과 sEV의 치료 전달 매개체 평가를 가능하게 합니다.

초록

이 프로토콜은 표면 강화 라만 분광법(SERS)과 머신러닝(ML)을 통합하여 진단 및 치료적 응용 분야에서 개별 작은 세포외 소포(sEV)를 검출하고 분자적으로 프로파일링하는 포괄적이고 라벨이 없는 플랫폼을 제시합니다. 이 방법은 크기 배제 크로마토그래피 또는 초원심분리를 이용한 sEV 분리로 시작합니다. 분리된 소포는 단일 소포 감도를 가진 설계된 플라즈모닉 금 나노피라미드 2D 배열 기판에서 분석됩니다. 내재적인 라만 생화학적 지문을 활용하여 외부 라벨 없이도 고특이성 검출을 가능하게 합니다. 스펙트럼 획득 후 데이터는 전처리를 거치고 학습된 머신러닝 알고리즘(예: LDA, SVC)을 사용하여 질병 상태를 분류하며, 조직, 혈장, 타액에서 sEV를 사용해 위암과 건강한 대조군을 90.1%, 70.9%, 60.7%의 분류 정확도로 성공적으로 구분합니다. 또한, 단일 sEV에서 독소루비신 부하를 정량화함으로써 치료적 응용이 입증되었으며, 이는 그래핀 코팅 기판을 내부 표준으로 사용하여 더욱 강화된 측정 결과입니다. 이 접근법은 조기 질병 발견과 단일 소포 수준에서의 약물 적재 효율 이해에 필수적인 집단 이질성을 포착하는 고처리량 분석을 가능하게 합니다.

서론

작은 세포외 소포(sEV)는 일반적으로 직경 30에서 200 nm 사이이며, 세포에서 자연적으로 생물체액으로 분비되며, 기원세포를 나타내는 단백질, 지질, 핵산을 운반합니다 1,2,3. 타액, 소변 및 기타 체액에서 비침습적 바이오마커로 4는 조기 질환 진단, 예후 및 치료 모니터링에 특히 종양학 분야에서 가능성을 지니고 있습니다 5,6,7. 그러나 이들의 임상 번역은 높은 이질성과 복잡한 생물학적 행렬에서의 낮은 존재 비율로 인해 제한됩니다8. 이러한 도전을 극복하기 위해 이 프로토콜은 표면 강화 라만 분광법(SERS)을 활용하는데, 이는 플라즈모닉 기판 9,10,11을 통해 라만 산란을 최대 1010-10 11배까지 증폭할 수 있는 강력한 분석 방법입니다. SERS는 개별 sEV의 내재 분자 "지문" 스펙트럼을 몇 초 만에 포착하여, 긴 분석 시간을 피하면서 초민감도 단일 소포 분석을 가능하게 합니다.

우리 방법은 라벨 없는 기반 SERS를 시너지 효과로 결합하여 개별 sEV12, 13, 14, 15, 16의 신속하고 초민감한 특성 분석을 달성합니다. 라벨 없는 SERS는 내재적인 생화학적 서명을 포착하며, LDA, SVC와 같은 머신러닝 모델과 결합하면 건강한 세포와 병든 세포에서 유래한 sEV를 높은 특이도로 구별하는 것으로 나타났습니다13. 우리 플랫폼의 재현성과 정량적 역량을 더욱 높이기 위해, 본 방법은 그래핀 코팅 라만 기판16과 완전히 호환됩니다. 단층 그래핀은 플라즈모닉 핫스팟을 안정화하고 분자 흡착을 향상시키는 화학적으로 균일한 표면을 제공하며, 더 중요한 것은 단층 그래핀이 SERS 신호의 "내장" 게이지 역할을 하여 검출된 분자의 정량화 능력을 가능하게 한다는 점입니다. 라만 레이저 빔 직경(~ 1 μm)이 일반적인 sEV보다 크지만, 우리 플랫폼은 물리적·통계적 메커니즘의 독특한 상호작용 덕분에 효과적인 단일 소포 해상도를 달성합니다. 준주기적 금 나노피라미드 기판은 100 nm보다 작은 크기의 매우 국소적인 플라즈모닉 '핫스팟'을 생성하여 라만 신호를 초선형적으로 증폭합니다12. 그 결과, 빔 내에서 가장 강한 핫스팟에 가장 가까운 확률적으로 sEV에서 나오는 신호가 스펙트럼을 지배하게 됩니다. 또한 SEM 영상은 sEV가 1 μm 간격으로 잘 >배치되어 스펙트럼 중복을 최소화하는 것을 확인하며, 라만 강도 맵은 개별 소포 크기와 일치하는 신호 국소화를 보여줍니다13,14. 이러한 특징들은 수집된 각 스펙트럼이 주로 단일 sEV에 대응하도록 보장하여 통계적으로 견고하고 라벨이 없는 단일 소포 분석을 가능하게 합니다. 웨스턴 블롯, 질량분석법, 일반 라만 산란과 같이 대용량 샘플이 필요하고 단일 소포20을 해상하지 못하는 기존 접근법과 비교할 때, 우리의 단일 소포 SERS 플랫폼은 우수한 감도, 처리량, 분자 해상도를 제공합니다. 이 워크플로우는 최소 침습 고해상도 진단 도구를 개발하거나 개별 치료 연구에서 sEV의 이질성과 약물 투여 효율성을 탐구하려는 연구자에게 적합합니다. 이 프로토콜에서는 SERS 플랫폼이 단일 sEV를 활용하여 특히 암 분야에서 소포 분리, 플라즈모닉 기질 준비, 라만 획득, 머신러닝을 통한 데이터 분석 등 전체 워크플로우를 가능하게 하는 방식을 보여줍니다.

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프로토콜

인간 표본 채취는 헬싱키 선언에 따라 수행되었으며 UCLA 기관심사위원회(IRB)의 승인을 받았습니다. 모든 기증자는 연구 참여 전에 서면 동의서를 제공했습니다.

참고: 총 4개의 세포주(AGS(CRL-1739), A549(CCL-185), NCI-N87(CRL-5822), Hs 738.St/Int(CRL-7869)가 모두 상업 공급업체로부터 구입하여 이 연구에서 사용되었습니다. 이 세포주들은 판매자의 지침과 시약에 따라 엄격히 배양 및 배설되었습니다. 가공된 배지는 -20°C에서 수집되어 저장된 후 처리되었습니다. 한국 삼성의료센터에서는 기증자들이 자발적으로 조직, 혈장, 타액 샘플을 기증했습니다. 위암 조직은 외과적 절제 과정에서 채취되었고, 비암 대조군의 생검은 내시경을 통해 수집되었습니다. 혈장은 표준 임상 프로토콜에 따라 EDTA 튜브에 채취되었습니다. 각 피험자로부터 약 5mL의 자극되지 않은 전체 침을 채취한 후, 4 °C에서 2,600 × g에서 15분간 원심분리했습니다. 세포외 RNA를 보존하기 위해 상출액에 20 U/mL의 SUPERase-In RNase 억제제를 보충하였습니다. 모든 표본은 추가 가공 전까지 -80°C에서 보관되었습니다. sEV는 설정된 프로토콜에 따라 조건 배지 및 임상 표본에서 분리되었습니다.

1. sEV 분리 및 특성 분석

  1. sEV 샘플을 준비하세요
    1. 투명한 세포 배양 상원액을 상온에서 완전히 녹입니다.
    2. 상청액을 멸균된 0.22 μm 주사기 필터를 통과시켜 이물질과 큰 오염물질을 제거합니다.
    3. 35nm 크기-배제 크로마토그래피(SEC) 컬럼을 1× PBS 용액으로 평형을 맞추세요.
    4. 여과된 샘플 500 μL을 컬럼에 도포합니다.
    5. 제조사 지침에 따라 1x PBS로 샘플을 희출하세요.
    6. EV 농축 분획을 수집하여 −20°C의 깨끗한 바이알에 보관합니다.
  2. 입자 농도와 크기 결정
    1. 멸균된 DPBS에서 sEV 샘플을 희석하여 최종 입자 농도는 107-10 9 입자/mL로 만듭니다.
    2. 나노입자 추적 분석 장비를 사용해 샘플당 60초 영상 다섯 개를 녹화하세요. 카메라 레벨은 14, 유량은 일정한 25로 설정하세요.
    3. 기기 소프트웨어로 영상을 분석하며, 희석 계수를 적용하여 최종 입자 농도(입자/mL)와 평균 직경(nm)을 결정합니다.
  3. 테트라스패닌 발현 특성
    1. 인간 테트라스패닌 칩(1cm × 1cm 크기, 안티-CD9, 안티-CD63, 앤티-CD81이 미리 코팅된 상태로 사전 스캔하여 기준선 신호를 설정합니다.
    2. 희석된 sEV 샘플을 밀폐된 24웰 플레이트에 담아 칩에 적재하고 실온에서 하룻밤 배양합니다.
    3. 35 μL 검출 항체(항-CD9 CF488, 항-CD63 CF647, 항-CD81 CF555)를 추가하고 상온에서 1시간 배양합니다.
    4. 칩은 제조사 프로토콜에 따라 세척하세요.
    5. 바이오마커 특성화 리더기와 관련 스캐닝 소프트웨어를 사용하여 소포성 테트라스패닌 발현을 측정합니다.
  4. TEM으로 sEV 형태를 확인하기
    1. ~100 μL sEV를 4% 파라포름알데히드 ~100 μL 투여 후 30분 고정합니다.
    2. 약 100μL 고정 sEV를 300메시 구리 그리드에 적재하고 5분간 인큐베이팅합니다.
    3. 그리드를 탈이온수로 헹구세요.
    4. 증류수에 1% 우라닐 아세테이트(~ 20 μL) 용액으로 그리드를 염색합니다.
    5. 마지막으로 물로 세척한 후 격자를 완전히 자연 건조시키세요.
    6. 투과 전자현미경(TEM) 을 통해 샘플을 영상화하여 sEV 크기와 형태를 확인한다.

2. SERS 플라즈모닉 기판 제작 12, 18, 19

  1. 나노스피어 단층 생성
    1. 랭뮤어-블로젯 트로프 내 수면에 직경 500nm의 폴리스티렌 구체를 펼칩니다.
    2. 구체를 부드럽게 압축하여 밀집된 육각형 단층을 만듭니다.
    3. 구형 단층을 4인치 Si 웨이퍼(~50 nm 열 SiO2 포함)에 웨이퍼를 담근 후 천천히 위로 끌어올려 옮깁니다.
  2. 에칭 나노스피어 배열
    1. 산소 플라즈마(산소 2 가스 흐름, 100 sccm, 50초, 200W 출력)를 이용한 반응성 이온 식각 시스템을 사용하여 구체 직경을 500 nm에서 ~250 nm로 줄입니다. 제작 과정에 대한 자세한 내용은 이전 연구12, 18, 19의 출판물을 참고하시기 바랍니다.
    2. 수축된 구형 배열 위에 전자빔 증발 을 통해 초당 1.5 Å의 50 nm Cr층을 침착합니다.
    3. 폴리스티렌 구체를 아세톤으로 들어 올려 SiO2 표면에 천공된 Cr 마스크를 남깁니다.
    4. Cr 구멍의 노출된 SiO2 층을 25 sccm Ar, 25 sccm CHF3, 그리고 200W RIE 전력으로 2분간 에칭합니다.
  3. 역피라미드 제작
    1. 웨이퍼를 60 °C의 60 wt% KOH에 2분간 담근 후 실리콘에 역피라미드 핏을 식각합니다.
    2. Cr 에챈트로 5분간 Cr 마스크를 제거하세요.
    3. SiO2 층을 6:1 완충 산화물 에찬트에 넣어 완전히 제거할 때까지 제거하세요.
    4. 전자빔 증발을 이용해 200nm Au 필름을 역피라미드 위에 정형으로 증착합니다.
  4. 플라즈모닉 기판을 최종화합니다
    1. 빠른 경화 에폭시(~1 mL)를 별도의 SiO2/Si 기판에 적용합니다. 금으로 코팅된 웨이퍼를 에폭시 위에 눌러 샌드위치 구조를 만들고, 금층이 가운데에 있습니다.
    2. 에폭시가 완전히 경화된 후 에폭시를 실리콘 몰드에서 떼어내어 독립형 Au 플라즈모닉 기판을 만듭니다.

3. 플라즈모니 기판으로의 그래핀 전달

  1. 그래핀 필름 준비
    1. 1 M FeCl3 용액을 준비합니다(1 M 무수철 염화철 용액은 81 g FeCl3 를 탈이온수에 녹인 후 최종 500 mL로 희석하여 만듭니다) PMMA 코팅된 단일층 그래핀 시트에서 구리 기판을 에칭합니다.
    2. 그래핀 코팅된 구리판을FeCl3 용액 표면에 뒤집어 구리가 완전히 녹을 때까지 놓으세요.
  2. 그래핀 필름 린스
    1. 깨끗한 유리 슬라이드를 사용해 떠다니는 그래핀 필름을 조심스럽게 탈이온수에 옮겨 에챈트 잔류물을 헹구세요.
    2. 이 헹구는 과정을 세 번 반복하세요.
  3. 그래핀을 기판으로 옮기기
    1. 최종 DI 수조에서 그래핀 필름 아래에 SERS 플라즈모닉 기판을 띄웁니다.
    2. 바닥재를 부드럽게 들어 올려 그래핀이 표면에 고르게 자리 잡게 하세요.
    3. 그래핀 코팅된 기판을 실온에서 1시간 자연 건조하세요.
    4. 진공 챔버로 옮겨 180°C에서 감압 하에서 1시간 건조합니다.
  4. 깨끗한 최종 기판
    1. 건조된 기판을 50°C의 아세톤 욕조에 1시간 담가 PMMA를 용해합니다.
    2. 기질을 이소프로필 알코올로 세 번 헹구세요.
    3. 사용 전에 세척된 그래핀 전달 플라즈모닉 기판을 건조기에서 건조하세요.

4. SERS 샘플 준비 및 스펙트럼 획득

  1. 기질 위에 샘플을 준비하세요
    1. 약 5 μL 샘플을 적절한 플라즈모니 기판에 피펫 주입합니다.
      참고: 약물 가재 sEV의 정량화를 위해서는 금-그래핀 기판에 소포를 도포하십시오. 다른 모든 실험은 일반 금 플라즈모닉 기판을 사용하세요.
    2. 기질을 건조기에 넣고 방울이 완전히 마를 때까지 기다려 주세요(~15분).
  2. 라만 시스템 보정
    1. 기질을 공초점 라만 현미경으로 옮기세요.
    2. 기기 소프트웨어(WiRE 버전 4.4)를 사용하여 데이터 수집을 시작하세요.
    3. 여기 레이저를 5 mW에서 785 nm로 설정하세요.
    4. 실리콘 기준 피크를 520 cm-1에 맞춰 시스템을 보정합니다.
  3. 금 기판에서 스펙트럼 획득 (진단)
    1. 300 μm × 300 μm 영역에서 정적 모드로 단일 소포를 찾기 위해 정찰 스캔을 수행하세요: 50% 출력, 0.1초 노출, 10 μm 스텝 크기.
    2. sEV를 찾은 후, 5 × 5 그리드 내에서 1 μm 스텝 크기, 50% 파워, 포인트당 0.2초 노출을 사용하여 정적 모드로 고해상도 매핑을 수행합니다.
  4. 그래핀 기판에서 스펙트럼 획득 (치료제)
    1. 300 μm × 300 μm 영역에서 정적 모드로 각 소포를 탐색하여 다음 설정으로 수행합니다: 50% 레이저 출력, 0.1초 노출, 10 μm 스텝 크기.
    2. 확장 모드에서 2 × 2 그리드로 다음 설정으로 고해상도 매핑을 수행합니다: 1 μm 스텝 크기, 1% 레이저 파워, 10초 노출.

5. 데이터 전처리

  1. 스펙트럼 품질 관리 수행
    1. 초기 원시 스펙트럼을 스크리닝하여 매우 노이즈가 큰 신호나 비정상적인 형태의 스펙트럼을 차단합니다.
    2. 임계값 기반 검출 또는 국소 편차 필터링을 사용하여 고립된 우주선 스파이크를 제거합니다.
  2. 필터링 및 정규화 스펙트럼
    1. 각 스펙트럼에 Savitzky-Golay 필터를 적용하여 형광 배경을 줄이고 데이터를 부드럽게 만듭니다.
    2. 각 스펙트럼의 신호 대 잡음비(SNR)를 계산하며, 일반적으로 피크 대 기준선 비율 또는 표준편차 방법을 사용합니다. 더 설명하자면, 일반적으로 각 스펙트럼의 SNR은 대표적인 라만 밴드에서 피크 강도(기준선 뺄셈 후)와 잡음의 표준편차의 비율로 계산되었습니다. 이 잡음은 원래 스펙트럼에서 Savitzky-Golay 평활화된 스펙트럼(창 크기 = 11, 다항식 차 = 3)을 빼고 얻은 잔류 스펙트럼에서 추정하여 고주파 변동을 분리했습니다. 적절한 SNR 임계값을 경험적으로 결정하기 위해 모든 스펙트럼을 SNR의 상승순으로 순위화하고, 특징적인 생화학적 피크의 지속 여부—특히 페닐알라닌 밴드(~1002 cm-1 , 아미노산), 아마이드 I 밴드(~1650 cm-1 , 단백질), CH2 변형 밴드(~1440 cm-1 , 지질)—의 지속성을 평가하였다. 임계값은 이 진단 피크 중 어느 하나가 지속적으로 베이스라인 노이즈 속으로 사라지는 지점에 설정되었습니다. 우리의 금-나노피라미드 SERS 기판 및 획득 매개변수(785 nm 여기, 5 mW 레이저 출력, 0.2초 적분)에서 경험적으로 SNR 임계값 28에 해당합니다.
    3. 위 5.2.2에 따라 결정된 SNR 임계값 이하로 떨어지는 스펙트럼은 제외합니다. 우리의 워크플로우에서는 SNR 28 미만의 스펙트럼을 훈련 데이터셋에서 제외했는데, 이 임계값을 이 수준으로 설정하면 고품질 스펙트럼만 유지되어 하위 분석과 모델의 견고성 향상을 위해 유지되기 때문입니다.
    4. 각 스펙트럼을 최대 피크 강도 또는 곡선 아래 전체 면적으로 정규화합니다.

6. 머신러닝을 이용한 스펙트럼 분석

  1. 모델 훈련
    1. 각 스펙트럼 측정값에 기원지에 해당하는 라벨을 할당하세요(예: 위암 환자 vs. 건강한 대조군).
    2. 스펙트럼 데이터를 선형 커널을 가진 지지 벡터 분류기(SVC)에 입력합니다.
    3. 5배 교차 검증을 위해 층화된 셔플 스플릿을 사용하세요.
    4. 각 폴드의 정확도 지표를 평균화하여 모델 성능을 평가합니다.
  2. 차원을 줄이고 분류한다
    1. 선형 판별 분석(LDA)을 사용하여 축소된 차원에서 고차원 SERS 데이터를 시각화합니다.
    2. LDA 모델을 사용하여 샘플 그룹 간 직접 분류를 하세요.
  3. 모델 평가
    1. 실제 진단 시나리오를 시뮬레이션하기 위해 임시 상태의 환자 샘플 집합에 대해 학습된 모델을 평가합니다. 자세한 내용은 저희 그룹의13, 15, 22 출판물을 참고해 주시기 바랍니다.
      참고: 모든 과정을 깨끗한 도구로 먼지 없는 환경에서 수행하세요. 단층 그래핀은 구리 기판 위에서 재배되거나 공급되었으며, 이송 과정에서 보호하기 위해 PMMA 층으로 코팅되었습니다.

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결과

단일 소포 SERS 프로토콜의 성공적인 구현은 개별 sEV에서 뚜렷한 라만 스펙트럼을 얻어 후속 진단 분류와 치료 약물 적재 모니터링을 가능하게 합니다. 그림 1 은 위암 진단 연구와 약물 가중 sEV 모니터링 애플리케이션의 워크플로우를 각각 여기에서 보고한 프로토콜을 보여줍니다.

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그림 1: 연구의 흐름도. (A) 위암의 단일 소포 SERS 기반 진단 워크플로우. 임상 소포는 분리되어 플라즈모니 기판에 침착되고, 개별적으로 라만 ...

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토론

이 프로토콜의 핵심 요소는 기판 준비와 sEV 정제입니다. 라벨이 없는 SERS의 성능은 강한 증강 '핫스팟'을 가진 균일하고 고포각형 플라즈모닉 기판을 생성하는 데 크게 의존합니다. 마찬가지로, 크기 배제 크로마토그래피 를 통한 고순도 sEV 분리는 신뢰할 수 있고 재현 가능한 SERS 스펙트럼을 생성하는 데 필수적입니다. 단백질 응집체나 지단백과 같은 불순물은 소포 신호를 약화시킬 뿐만 아니라 스펙트럼 잡음을 도입하여 하위 머신러닝 분류를 혼란스럽게 할 수 있습니다.

우리 플랫폼의 큰 장점은 검증된 단일 소포 해상도로, 이는 sEV 이질성 문제를 극복하는 데 중요한 요소입니다. 레이저 스팟은 단일 소포보다 크지만, 금 나노피라미드 기하학에서 발생하는 초선형 신호 증폭 때문에 플라즈모닉 핫스팟에 가장 가까운 sEV가 신호를 지배합니다. 이와 함께 기질의 낮은 소포 밀도가 결합되어 각 스펙트럼은 개별 s...

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공개 사항

저자들은 이 연구와 관련된 이해 충돌이 없다고 선언합니다.

감사의 글

이 연구는 국립보건원(NIH) 국립 중개 과학 진흥 센터의 4UH3TR002978-03 및 1U18TR003778-01 지원과 캘리포니아 재생 의학 연구소(CIRM)의 보조금(보조금 번호 TRAN1-14649)의 지원을 받았습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
1배 PBS써모피셔 사이언티브J61196. AP
300메시 구리 그리드전자현미경 과학EMS200-Cu
4% 파라포름알데히드 용액시그마 올드리치1004960700
4&프라임; Si wafers MSE 서플라이WA0810(100) 지향적인...
A549 세포주ATCC<강>CCL-185 
AGS 세포주ATCCCRL-1739
원심분리기 로터 F-35-6-30, 5430에펜도르프<강>22654306
CHA 마크 40CHA 마크 40https://chaindustries.com/mark-40-system/전자빔 증발
크로컬 에챈트 해법시그마 올드리치651826-500ML
독소루비신  D-4000LC 연구소D-4000_3g
ExoView R100 시스템 및 ExoView 휴먼 테트라스패닌 키트나노뷰 바이오사이언스https://www.nowmedicalstudios.
com/portfolio/nanoview-
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FeCl3 솔루션시그마 올드리치451649
HF 솔루션시그마 올드리치695068-500ML
Hs 738.St/Int 세포주ATCCCRL-7869
공초점 라만 현미경을 통해레니쇼https://www.renishaw.com/en/<브레> invia-confocal-raman-microscope
--6260?srsltid=AfmBOoqbZlyW
qv2KDdcXV0UZnp8tdLNgYZ0
GbZvGOWI6z1OKi48rg5-b
KOH 솔루션시그마 올드리치417661
MaxQ 4000 벤치탑 인큐베이팅/냉장 셰이커써모 사이언티픽SHKA4000 (4320)
MCO-19AIC 인큐베이터산요8380-30-0035
밀렉스-GP 필터밀리포어 시그마SLGPM33RS그리고 nbsp; 0.22 & 마이크로; m
나노SEM 230 현미경FEISEM-FEI-014 
나노사이트 NS300말번 파날리티컬https://www.malvernpanalytical
.com/en/support/product-support
/nanosight-range/nanosight-ns300
NCI-N87 세포주ATCCCRL-5822
옵티마 TLX 초심분리기벡먼 쿨터8043-30-1197
옥스퍼드 플라즈마랩 80 플러스옥스퍼드 플라즈마랩https://plasma.oxinst.com/<브르/> 제품/RIE/플라즈마프로-800-RIE
폴리스티렌 구체알파 에이사르<강>AA42711AB500 nm
qEVoriginal/35nm아이존ICO-35
단층 그래핀MSE 서플라이ME0408
T-75 플라스크VWR156800
TF20 고해상도 전자기(EM)FEIhttps://eicn.cnsi.ucla.edu/project/fei-tf20-tem/
우라닐 아세테이트 용액전자현미경 과학22400-1

참고문헌

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