만성 저산소증 마우스 모델에서 전기침술을 이용한 심뇌 보호

요약

이 연구는 전기침술의 심뇌 보호 효과를 조사하기 위해 12주 만성 저산소증 마우스 모델을 확립했습니다. 연구 결과는 인지 기능 개선에 흔히 사용되는 경혈 전기 침술 자극이 인지 기능 향상뿐만 아니라 심장 기능 장애를 완화하고 심근 조직의 병리학적 손상을 감소시켰음을 보여주었습니다.

초록

이 연구는 전기침술의 심뇌 보호 효과를 조사하기 위해 12주 만성 저산소증 마우스 모델을 확립하였습니다. 고압산소 치료나 특정 약물과 같은 기존 저산소증 관련 질환 치료법은 접근성이 낮거나 단일 표적 기전으로 인해 제약을 받는 경우가 많습니다. 이 격차를 해소하기 위해, 우리는 전통적으로 인지 향상을 위해 사용되던 경혈점에 EA 자극을 가하면 만성 저산소 상태에서 인지 기능과 심장 기능을 동시에 개선할 수 있다고 가설을 세웠습니다. 30마리의 수컷 C57BL/6J 마우스를 무작위로 세 그룹에 배정하였다: 대조군(Con), 만성 저산소 모델군(CH), 만성 저산소군과 전기침술 치료군(CH+EA). CH와 CH+EA 그룹은 12주 동안 매일 8시간 동안 저산소 환경(10.0% ± 0.5% O₂)에 노출되었으며, CH+EA 그룹은 마지막 2주 동안 GV20, GV24, 양측 ST36에서 매일 EA 자극을 추가로 받았습니다. 행동 검사, 심초음파 평가, 조직병리학적 분석 결과, EA는 불안과 유사한 행동을 유의미하게 완화하고 공간 기억을 개선했을 뿐만 아니라 여러 심장 기능 매개변수를 향상시키고 해마 신경 손상과 심근 재형성을 감소시켰습니다. 이 발견들은 EA가 전통 중의학의 '전체론적 개념'과 일치하는 심뇌 보호 효과를 부여함으로써 저산소증 관련 심뇌 동반 질환에 대한 새로운 비약물적 개입 전략을 제공함을 보여줍니다.

서론

저산소증은 고지대 환경, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 심대뇌혈관 질환뿐만 아니라 항공우주 및 다이빙 작업과 같은 특수 상황에서 흔히 발생하는 병리학적 도전 과제로, 다기관 기능 장애로 이어질 수 있습니다. 신체에서 산소 소비량이 가장 높은 기관인 뇌와 심장은 특히 저산소 손상에 취약합니다. 연구에 따르면 COPD 환자의 인지 장애 유병률은 32%에서 88^%까지 다양^{하며, 심장} 기능 장애 발생률은 최대 70%에 이릅니다^3. 연구에 따르면 만성 저산소증은 뇌 미토콘드리아 기능 장애를 유발하고, 이는 산화 스트레스, 칼슘 과부하, 신경염증을 유발하며, 궁극적으로 해마와 대뇌 피질의 신경 손상을 일으키고 학습 및 기억 기능을 저해합니다 ^4,5,6. 동시에 저산소증은 교감신경계와 레닌-안지오텐신-알도스테론계(RAAS)를 활성화시켜 혈관 수축, 혈압 상승, 심장 후부하 증가, 심근비대와 섬유증을 촉진하여 궁극적으로 심부전으로 이어집니다 ^7,8,9. 이러한 동행된 심뇌손상은 환자의 임상 관리의 난이도를 크게 높여, 효과적이고 접근 가능한 치료 전략 개발이 중요한 미충족 임상적 필요로 남게 만듭니다.

저산소증으로 인한 인지 장애 및 심장 기능 장애에 대한 현재 치료 전략은 주로 고압산소 치료, 뇌 대사 촉진제(예: 피라세탐, 옥시라세탐), 신경영양성 인자 요법^10,11, β 차단제(예: 메토프롤롤)¹²를 포함합니다. 하지만 이러한 접근법에는 상당한 한계가 있습니다: 고압산소 치료는 전문 장비가 필요하고 접근성이 부족합니다; 약리학적 개입은 종종 부작용을 일으키며 단일 병리 경로를 표적으로 삼는 경우가 많습니다; 신경영양 인자 치료는 혈액-뇌 장벽 침투와 안정성과 관련된 도전에 직면해 있습니다. 따라서 동시 심뇌 치료를 위한 효율적이고 접근 가능한 전략을 찾는 것이 핵심 연구 방향이 되었습니다.

침술은 전통 중의학(TCM)의 기본 요소로, 다목적 조절에 대한 요구와 일치하는 전체론적 치료 관점을 강조합니다. 이 연구는 신경학적 및 심혈관 질환 모두에 대해 독특한 치료 잠재력을 입증합니다. 전기침술(EA)은 전통적인 침술과 전기 자극을 통합한 현대적 침술의 진화형으로, 신경 전기생리학적 활동을 보다 정밀하게 조절할 수 있게 합니다^13,14. EA는 뇌 허혈-재관류 손상을 효과적으로 개선하고, 심근효소(GPBB, H-FABP) 분비를 줄이며, 상당한 심장 보호 효과를 발휘합니다^15,16. 요약하자면, 전통 침술의 현대적 혁신으로서 전기침은 다기전적이고 다표적 조절을 수행하며, 신경 및 심혈관 질환 치료에서 명확한 적용 가치와 임상적 잠재력을 보여주며, 한의학과 현대의학을 연결하고 있습니다.

그러나 현재 저산소성 인지 장애 및 심장 손상에 대한 EA 연구는 대부분 단일 장기/시스템 효과에 국한되어 있으며, 동시 심뇌 치료에서의 잠재력을 탐구하지 못하고 있습니다. TCM의 '전체론적 개념'과 장기 만성 저산소증으로 인한 심폐-뇌기능 장애 동반 질환의 임상적 현실을 바탕으로, 본 연구는 '동시 심뇌 치료'에서 EA의 효과를 조사하고, 저산소증으로 인한 신경 손상, 심근 비대/섬유증 및 관련 기능 장애를 동시적으로 개선하는 역할을 명확히 하며, 심폐-뇌 관련 질환을 위한 전체론적이고 표적화된 비약물학적 요법을 제공하는 것을 목표로 합니다 질병.

프로토콜

7-8주 생후 18-22g( 재료표 참조)의 수컷 C57BL/6J 쥐 30마리가 허베이이링 제약연구소 신약 평가센터의 SPF 시설에 수용되었습니다. 주변 온도는 20-26°C, 상대습도는 40%-70%로 유지되었으며, 12/12시간의 빛과 어둠 주기를 가졌습니다. 쥐들은 표준 실험실 설치류 밥과 깨끗한 물을 자유롭게 이용할 수 있었습니다. 1주일간의 적응 기간 후, 쥐들은 무작위로 세 그룹(n = 10)으로 배정되었습니다: 정상 대조군(Con), 만성 저산소 모델 그룹(CH), 만성 저산소 및 전기침술 치료군(CH+EA). 모든 실험 절차는 허베이이링 제약연구소 동물 연구 윤리 위원회(승인 번호: TTN-2025001)의 승인을 받았으며, 실험동물 관리 및 사용 지침에 엄격히 따라 수행되었습니다.

만성 저산소증 마우스 모델 구축 (그림 1)

만성 저산소 마우스 모델은 이전에 설명한 방법을 수정하여 구축되었습니다¹⁷. 자동 가스 제어 및 공급 시스템이 사용되어 저산소 환경을 생성하고 유지했습니다. 이 시스템은 순수 산소와 질소를 특정 비율로 혼합하는 솔레노이드 밸브를 정밀하게 조절하도록 프로그래밍되어 있으며, 혼합물을 맞춤형 스테인리스 스틸 저산소 챔버로 전달했습니다. 이 장치는 가스 공급 시기와 농도를 정확히 제어할 수 있게 했습니다. 챔버 내 산소 농도는 디지털 산소 분석기를 통해 지속적으로 모니터링되었으며, 가스 유량을 조절하는 피드백 메커니즘을 통해 10.0%± 0.5%로 유지되었습니다. CH와 CH+EA 그룹의 쥐들은 저산소 챔버에 함께 수용되어 하루 8시간(오전 9시부터 오후 5시까지) 저산소 상태에 노출되었고, 이후 하루 종일 정상 산소 상태로 돌아갔다. 이 프로토콜은 12주 동안 매일 반복되었습니다. 저산소 노출 기간 내내 동물들은 자유롭게 음식과 물을 섭취할 수 있었습니다. 초기 질소 주입 시 산소 농도를 낮추기 위해 특별한 주의가 기울여졌으며; 이 과정은 급격한 산소 수치 감소로 인한 급성 동물 사망을 방지하기 위해 점진적으로 진행되었습니다. Con 그룹의 쥐들은 인접한 방에서 정상적인 산소 조건 하에 수용되었으며, 다른 모든 거주 환경은 실험 그룹과 동일했습니다.

마취 (그림 2)

전기침 치료 중 동물의 안정성을 보장하고 생리학적 스트레스가 결과에 미치는 간섭을 최소화하기 위해, 본 연구에서는 흡입된 이소플루란을 마취에 사용했다¹⁷. 일관된 수술 조건을 보장하기 위해 실험군 내 모든 마우스에게 마취가 시술되었습니다. 마취 전에는 소동물 마취기( 재료표 참조)와 37°C로 설정된 온도 조절 가열 패드가 준비되어 동물의 저체온증을 예방했습니다. 마취 유도는 밀폐된 유도 챔버에서 2%-2.5% 이소플루란( 재료표 참조)을 사용하여 약 1분간 수행되었습니다. 자발적 움직임 상실과 근육 긴장도의 현저한 감소가 관찰된 후, 각 쥐는 온열 패드로 옮겨졌다. 마취를 유지하기 위해 0.5%-1.2% 이소플루란이 함유된 특별 제작된 미니어처 마스크가 주둥이에 부드럽게 씌워졌다. 마취의 유효 깊이는 눈 깜빡임 반사의 부재와 족저 자극에 대한 유의미한 철회 반사의 부재로 결정되었습니다. 이 마취 프로토콜은 쥐의 마취 상태를 30분 이상 안정적으로 유지했으며, 이는 이후 모든 절차를 완료하기에 충분했습니다.

전기침 치료

만성 저산소증 노출 11주차에 CH+EA 그룹의 쥐에 대해 전기침술 중재가 시작되었습니다. 선택된 경혈은 머리의 백후이(GV20)와 신정(GV24), 그리고 양쪽 주산리(ST36)였습니다. GV20은 두개골 꼭짓점의 중앙선, 즉 두 귀 꼭대기 사이의 대략 중간 지점에 위치^한다. GV24는 이마 중앙선에 위치하며, 눈¹⁹의 안안개를 연결하는 선의 중간점에서 약 1-2mm 위에 위치합니다. ST36은 무릎 관절의 하측 및 외측 후지에 위치하며, 섬유두의 하단 경계에서 약 2mm 아래 움푹 들어간 곳에 있습니다^20,21. 쥐들이 안정적인 마취 상태에 도달한 후, 수술자는 오른손에 일회용 멸균 스테인리스 침술 바늘(제정: 0.18 × 7 mm; 재료표 참조)을 들었다. 경혈(GV24 및 GV20)의 경우, 왼손으로 두피를 부드럽게 들어 올리고, 바늘을 15-30° 각도로 피하에 삽입하여 약 2mm 깊이까지 뒤쪽으로 진행했습니다. 하지의 ST36 경보점에는 바늘을 약 3-4mm 깊이로 수직으로 삽입했습니다. 전기 침술 장치의 출력 전극(재료표 참조)은 바늘 손잡이에 연결되었는데, 한 세트의 리드는 GV20과 왼쪽 ST36을, 다른 세트는 GV24와 오른쪽 ST36을 연결했습니다. 두 개의 와이어 세트를 통해 동시 전기침 자극을 적용하였다. EA 파라미터는 다음과 같이 설정되었습니다: 연속파,^{2Hz 주파수 22, 23}. 현재 강도는 0.1 mA에서 점차 증가하여 국부 사지에 약간의 규칙적인 경련이 관찰되었고(보통 약 2 mA 유지), 전기침술은 하루 1회 30분씩, 6일간 1일 휴식 후 연속으로 총 2주간 시행되었습니다. 한편, Con 그룹과 CH 그룹의 쥐들은 동일한 시간과 조건의 마취 및 구속을 받았으나, 바늘 삽입이나 전기침술 장치 활성화 없이 진행되었습니다.

오픈 필드 테스트

오픈 필드 테스트(OFT)는 새로운 환경에서 쥐의 자발적 운동 활동, 탐색 행동, 불안 유사 반응을 평가하기 위해 수행되었다²⁴. OFT 장치는 흰색 칸막이(50 cm 50 cm 30 cm)였으며, 바닥은 행동 분석을 위해 사실상 25개의 정사각형(각 10 cm 10 cm)으로 격자로 나뉘어 있었습니다. 공식 시험 전에 모든 쥐는 환경 변화로 인한 스트레스가 행동 결과에 미치는 영향을 최소화하기 위해 1시간 동안 시험실에 적응시켰습니다. 테스트 중에는 각 마우스를 부드럽게 장치 중앙에 배치했습니다. 2분간의 익숙화 기간 후, 10분간 공식적으로 행동이 기록되었습니다. 전체 세션은 동영상 추적 시스템( 재료표 참조)을 사용해 이동 경로를 자동으로 추적하여 녹화되었습니다. 분석된 매개변수에는 총 이동 거리, 중심 구역에서 머무는 시간, 중심 구역에서의 속도, 그리고 중심 구역으로 진입한 수 등이 포함되었습니다. 모든 쥐는 동일한 중앙 위치에서 탐험을 시작했고, 각 쥐는 한 번씩만 테스트되었다. 후각 간섭을 방지하기 위해 각 마우스 테스트 후 75% 에탄올로 기기를 철저히 세척했습니다

모리스 워터 미로 (MWM)

기억 기능 평가를 위한 표준 방법인 모리스 워터 미로(MWM) 테스트는 주로 쥐의 공간 학습 및 기억 능력을 평가하는 데 사용^되었다. 이 장치는 직경 120cm, 깊이 30cm의 원형 연못으로 구성되었으며, 개념적으로 네 개의 동일한 사분면(I, II, III, IV)으로 나뉘어 있었다. 외부 방해를 최소화하기 위해 수영장 주변에 암막 커튼이 걸려 있었고, 그 위 벽에는 뚜렷한 시각적 단서가 고정되어 실험 내내 일정하게 유지되었다. 수영장은 22-24°C 유지의 물로 채워졌으며, 수위는 플랫폼 표면에서 약 1cm 높이로 유지되었습니다. 무독성 이산화티타늄 분말을 20% 농도로 물에 첨가하여 불투명하게 만들어 쥐와 배경 간의 대비를 강화하여 영상 추적을 더 정확하게 했습니다. 실험 절차는 6일 연속으로 진행되었으며, 5일간의 공간 획득 훈련 단계와 1일간의 공간 탐침 시험으로 구성되었습니다. 훈련 단계에서는 직경 10cm의 원형 플랫폼이 3구역에 설치되어 목표 위치로 사용되었습니다. 첫날에는 플랫폼이 수면에서 약간 위(~1cm) 위치해 쥐들이 탈출 목표를 익힐 수 있도록 했습니다. 2일째부터 5일째까지는 플랫폼이 수면 아래 약 1cm 깊이에 잠겨 공간 학습을 평가했습니다. 매일 모든 쥐는 네 개의 사분면에서 연못 벽을 향한 물에 미리 정해진 순서대로 순차적으로 배치되었다. 실험자는 동물을 놓은 후 의도치 않은 공간적 신호가 되지 않도록 즉시 방을 나갔다. 숨겨진 플랫폼을 찾는 데 걸린 시간(탈출 지연)은 각 시도마다 기록되었습니다. 만약 마우스가 90초 제한 시간 내에 플랫폼을 찾지 못하면, 부드럽게 플랫폼으로 안내되어 30초간 머물게 하여 공간 학습을 강화했으며, 지연 시간은 90초로 기록되었습니다. 마우스가 90초 이내에 플랫폼을 찾으면 10초 동안 플랫폼에 머무를 수 있었습니다. 훈련이 끝난 후 쥐는 수건으로 말리고 다시 집 우리로 돌려보냈다. 시작 사분면 순서는 체계적으로 변했으며, 각 마우스마다 약 20분의 시험 간격이 있었습니다. 비디오 추적 시스템( 재료표 참조)은 수영 거리, 속도, 탈출 지연 시간과 같은 매개변수를 자동으로 기록했습니다. 6일째에는 공간 기억을 평가하기 위한 탐침 시험이 실시되었다. 플랫폼은 목표 사분면(사분면 III)에서 제거되었고, 각 마우스는 이전 목표 지점(사분면 I)과 반대편 사분면에서 풀려나 90초 동안 자유롭게 헤엄칠 수 있었습니다. 목표 사분면(플랫폼이 이전에 위치했던 곳)에서 머무른 시간, 정확한 이전 플랫폼 위치를 넘은 횟수, 그리고 수영 경로가 기록되었습니다. 탐침 실험 직후, 쥐는 완전히 건조되어 저체온증을 예방하기 위해 열원 아래 집 우리로 돌려놓았습니다. 실험 내내 미로 주변의 모든 시각적 단서의 위치는 실험 조건에서의 일관성을 보장하기 위해 변경되지 않았습니다.

심초음파

마우스 심초음파는 심장 구조와 기능 평가에 중요한 비침습적 실시간 영상 기법으로, 심혈관 질환 모델 연구에 광범위하게 적용되어 왔습니다. 검사는 전신마취 하에서 진행되며, 앞서 설명한 프로토콜에 따라 마취 상태를 유지합니다. 쥐는 37°C로 유지되는 온도 조절 플랫폼 위에 등을 대고 눕혀집니다. 팔다리를 부드럽게 고정한 후, 흉부와 복부 부위에 균일하게 제모 크림을 발라줍니다. 모든 모발과 잔여 크림은 1-2분 후에 완전히 제거하여 최적의 초음파 전송 품질을 보장합니다. 실시간 생리학적 모니터링을 위해 전극 패치를 전도성 젤로 사지에 연결하여 심전도와 호흡수를 지속적으로 기록합니다. 표준 초음파 영상을 얻기 위해 마우스의 위치를 머리가 꼬리보다 약간 높게 조정하여 심장의 긴 축이 플랫폼과 평행하도록 합니다. 특히 탐침으로 흉벽에 과도한 압력을 가하지 않도록 주의해야 하며, 이는 심장 기하학적 구조를 변화시키고 측정 정확도에 영향을 줄 수 있습니다. 면도 부위에 두께 2-5mm 두께의 기포 없는 초음파 젤을 넉넉히 발라줍니다. 고주파 선형 배열 프로브(30-50 MHz)가 사용되며, 프로브의 방향 마커는 항상 마우스 머리를 향합니다. 프로브는 처음에 마우스 몸의 긴 축과 평행하게 위치한 후 약 30°-45° 반시계 방향으로 회전합니다. 왼쪽 심실의 명확한 흉골 측근 장축 시점을 얻기 위해 미세 조정이 이루어집니다. 동적 영상 획득은 초음파 이미지가 좌심실, 대동맥 및 승모판을 명확히 보여주고, 심장 꼭대기가 대동맥 유출로와 수평 정렬되어 있음을 보여주면 시작됩니다. 모든 이미지는 경험 많은 운영자가 일관된 매개변수 설정을 사용하여 데이터 비교 가능성을 보장하여 획득합니다. 검사 후에는 초음파 프로브를 표준 절차에 따라 세척하고, 남은 젤은 마우스 몸에서 닦아냅니다. 그 후 쥐는 따뜻한 우리로 옮겨져 마취에서 완전히 회복하고 정상적인 보행 능력을 회복할 때까지 면밀히 관찰됩니다.

파라핀 절면의 준비

행동 검사가 완료된 후, 쥐들은 복막 내 주사인 펜토바르비탈(20 mg/kg)으로 마취를 받았습니다. 전신 고정은 식염수를 이용한 경심관 관류와 10% 파라포름알데히드( 재료표 참조)로 이루어졌습니다. 뇌 조직을 조심스럽게 추출한 후, 10% 파라포름알데히드에 담가 실온에서 72시간 동안 고정시켰습니다. 심장 관류가 심근 미세구조를 변화시키기 때문에, 본 연구에서 조직학적 분석에 사용된 심장 표본은 관류 절차를 받지 않은 쥐에서 특별히 채취했으며, 다른 모든 취급 조건은 동일하게 유지되었습니다. 고정이 완료된 후, 조직은 흐르는 물에 6시간 동안 헹구었습니다. 이후 구배 탈수는 자동화된 조직 프로세서( 재료표 참조)를 사용하여 수행되었으며, 60%, 70%, 90% 에탄올에 차례로 1시간 동안 침수한 뒤, 95% 및 100% 에탄올을 각각 2시간 동안 담갔습니다. 탈수 시료는 자일렌에 2시간 동안 정화한 후 60°C에서 파라핀으로 3시간 침투되었다. 마지막으로, 조직을 임베딩 머신을 이용해 파라핀에 삽입하여 표준 해부학적 방향을 확보했습니다. 임베디드 블록이 완전히 굳은 후, 4 μm 두께의 직렬 단면을 회전식 미세절단기로 절단하여 폴리-L-라이신 코팅 유리 슬라이드에 장착하고 공기 건조하여 보관하여 이후 염색 및 분석을 위해 보관했습니다.

헤마톡실린-에오신 염색

뇌 및 심장 조직의 조직학적 검사는 헤마톡실린과 에오신(HE) 염색을 사용하여 저산소 손상을 평가하고 전기침술 개입의 치료 효과를 평가하였습니다. 두께 4 μm의 조직 절편은 먼저 자일렌 I과 자일렌 II에서 탈파라핀(각각 10분씩)한 후, 등급별 에탄올 시리즈(100%, 95%, 80%, 각각 2분씩)를 통해 다시 수화한 후, 마지막으로 증류수로 세척했습니다. 염색을 위해 절편들은 헤마톡실린 용액에 3-8분간 담가 명확한 핵 염색이 이루어질 때까지 했으며, 흐르는 물에 헹구어 블루잉을 유도한 후, 이후 에오신으로 1-3분간 카운터 염색하여 세포질에 적절한 분홍색을 얻었습니다. 마지막으로, 착색된 부분은 절대 알코올로 탈수한 후 자일렌으로 깨끗이 처리한 후 중성 발삼으로 부착되었습니다.

니슬 스테인

해마 영역에서 뉴런의 생존 상태를 평가하기 위해 Nissl 염색을 사용하여 Nissl 체체의 분포와 뉴런 내 세포 형태를 관찰하였다. 뇌 조직 파라핀 절편의 탈파라핀화 및 재수화 후, 절단은 예열된 톨루이딘 블루 염색 용액에 담가 56°C에서 일정 온도 인큐베이터에서 1시간 배양했습니다. 염색 후, 조각들은 증류수로 부드럽게 헹군 후 Nissl 분별액에 몇 초간 최대 2분간 옮겼습니다. 이 구분 과정은 현미경으로 면밀히 관찰되어 배경이 거의 무색해질 때까지 진행되었습니다. 이후 분화된 절편들은 절대 에탄올 시리즈를 통해 신속히 탈수되고, 자일렌으로 정화된 후 중성 수지로 고정되어 영구 보존과 관찰을 수행하였습니다.

마송 트리크롬 염색

고전적인 결합조직 염색 기법인 마손 삼색 염색은 주로 심장 조직 내 콜라겐 섬유와 근섬유를 구분하기 위해 사용되었습니다. 심장 파라핀 절편의 탈파라핀화 및 재수화 후, 염색 절차는 Masson 트리크롬 염색 키트에 제공된 제조사 지침에 따라 수행되었습니다(재료 표 참조). 염색 절차는 다음과 같이 진행되었습니다. 초기에는 절편들을 갓 준비한 바이거트 철 헤마톡실린 작업 용액에 4분간 담가 핵을 염색하고, 균일한 염색을 위해 부드러운 교반을 가했습니다. 이후 절단부를 흐르는 물에 헹군 후 1% 산성 알코올로 5-10초간 분별한 후, 4분간 청색 용액으로 처리하여 선명한 청자색 핵 염색을 얻었습니다. 이후 절단은 5분간 폰소산 푸흐신 용액으로 염색한 후, 0.2% 인산성 용액에서 1분간 분별하였습니다. 약한 산성 작업액에서 1분간 짧게 헹군 후, 0.2% 아닐린 블루(pH 6.8) 용액으로 2분간 콜라겐 섬유를 강조하기 위해 단면을 대염색했습니다. 염색 단계가 완료된 후, 해당 구역들은 등급 에탄올 시리즈를 통해 탈수되고, 자일렌으로 투명화한 후 중성 발삼으로 마운팅되었습니다. 모든 장착된 단면은 완전 자동화 슬라이드 스캔 시스템( 재료표 참조)을 통해 디지털 캡처되어 후속 분석을 수행했습니다.

통계 분석

얻어진 결과는 SEM± 평균으로 제시됩니다. 데이터는 일원 ANOVA를 사용한 후 LSD 사후 검사 또는 t-검정을 통해 분석되었습니다. 양방향 ANOVA를 사용하여 OFT와 MWM 데이터를 분석했습니다. p < 0.05가 유의수준으로 간주되었습니다. 통계 분석과 차트는 GraphPad Prism 9.0 소프트웨어로 제작되었습니다.

결과

전기침술은 쥐에서 만성 지속 저산소증으로 인한 불안 유사 행동과 인지 기능 장애를 완화합니다.

CH에 노출된 쥐의 불안 유사 행동은 처음에 OFT를 사용해 평가하였다(그림 3A). 궤적 그래프는 뚜렷한 행동 패턴을 드러냈는데, 대조군 쥐는 새로운 환경에서 강한 탐색 경향을 보였으며, 움직임 패턴은 경기장 전체를 덮고 주로 코너 구역에 집중되었다(왼쪽 패널). 반면, CH 모델 쥐는 주로 모서리에 머물며 중앙 영역(중간 패널)을 거의 피하는 탐색이 현저히 감소했습니다. EA 치료 후 저산소 마우스는 탐색 행동이 개선되었고, 중심 영역(오른쪽 패널)에서 활동이 현저히 회복되었습니다. 정량적 분석 결과, 대조군과 비교했을 때 CH 마우스는 총 이동 거리, 중심 영역에서의 시간 및 중심 영역 통과 횟수(모두 P < 0.001)에서 유의미하게 감...

토론

이 연구는 장기간 만성 저산소증이 쥐에게 불안과 유사한 행동과 공간 기억 장애를 유발할 수 있음을 확인시켜 주었으며, 이는 이전 연구 결과와 일치합니다^26,27. 한편, 장기 만성 저산소증은 심장 기능 장애와 심근 구조 손상을 유발할 수 있음을 발견했습니다. 하지만 현재 저산소증으로 인한 인지 및 심장 장애를 동시에 완화할 수 있는 치료 전략은 부족합니다. 이를 위해 장기 만성 저산소증으로 인한 인지 기능 장애 및 심장 기능 저하 개선에 EA 개입의 잠재력을 평가하였습니다. 이 연구는 인지 기능 향상에 흔히 사용되는 경혈 세트(GV20, GV24, ST36)에 대한 EA 자극이 인지 기능 향상뿐만 아니라 심장 기능과 심근 구조를 유의미하게 향상시켜 저산소증으로 인한 인지 장애와 심장 기능 저하를 동시에 완화할 수 있음을 처음으로 확인한 것입니다. 따라서 행동적·조직...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
10% 파라포름알데히드 용액	바이오로이(베이징) 바이오테크놀로지 주식회사,< > Ltd	RL3234
ANY-미로	과학	SA201	비디오 트래킹 시스템
C75BL/6J 마우스	베이징 HFK 바이오사이언스<> 주식회사	번호 110322220103041767	성별: 남성, 그리고 nbsp; 체중: 18 – 22g
일회용 침 바늘	화투오	246076	일회용 멸균 침 바늘 (0.25mm 및 급성; 13mm)
전기침 기기	만리장성	KWD-808 I
HistoCore MULTICUT - 반자동 회전 미세절기	독일, 라이카	RM2245	파라핀 슬라이서
화도 침술  바늘	쑤저우 의료기기 공장	2655519
이소플루란	RWD 라이프 사이언스 주식회사	R510-22
매슨' s 트리크롬 스테인 키트	솔라비오	G1340	매슨 스테인 키트
모리스 워터 미로	산스비오	SA201	모리스 워터 미로 장치
나노줌머 디지털 병리학	하마마츠 포토닉스 K. K	C9600-01
NDP. 뷰 2	일본, 사쿠라		슬라이드 스캐너 소프트웨어
소동물 마취기	후륜구동	YL-LE-A106
티슈 테크 프리즈마 플러스	일본, 사쿠라	20B2X00014000034	파라핀 내립 조직 절편, 냉동 절편, 슬라이드 장착 세포 등 표본 염색을 위해 설계된 완전 자동화 장치입니다.
티슈텍 TEC 6 임베딩 모듈	일본, 사쿠라	M01-021E-02	파라핀 임베딩 머신