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연구 논문

지산은 숙주 주도적 세포보호 기전을 통해 곰팡이 각막염에서 염증을 억제하기 위해 Nrf2/HO-1 경로를 조절합니다

404 조회수

⸱

DOI:

10.3791/69362

⸱

2025년 12월 9일

 , 
1Department of Ophthalmology, Jinan 2nd People's Hospital

이 논문에서

요약

지산은 곰팡이 각막염에서 Nrf2/HO-1 세포보호 경로를 활성화하여 염증성 사이토카인과 각막 손상 수준을 낮춥니다. 이 숙주 주도 치료법은 기존 항진균제에 비해 우수한 안전성을 입증하며, 내인성 항산화 경로 강화를 통해 산화 스트레스 유발 안구 질환 치료에 대한 기전적 통찰을 제공합니다.

초록

지산화산(LA)은 뛰어난 안구 안전성 프로필을 가진 디티올 항산화제로, 곰팡이 각막염을 유발하는 산화-염증 환경을 완화하는 능력으로 연구되었습니다. 인간 각막 상피 세포는 최대 60 μM까지 생존 손실 없이 LA를 견딜 수 있었으며, Aspergillus fumigatus 도전 시 LA는 핵 인자 적혈증 2 관련 인자 2(Nrf2) 핵 전위가 3배 증가하고, 하류 효과인 헴 산소화효소-1(HO-1)이 5배 급증했습니다. ML385로 Nrf2를 약리적으로 침묵시키거나 주석 프로토포르피린 IX로 HO-1을 촉매 차단하면 이러한 분자 사건들이 제거되고 인터루킨-1β와 종양 괴사 인자 α 발현이 복원되어 엄격한 Nrf2/HO-1 의존성을 확인하였다. 마우스 각막염 모델에서의 병행 실험은 시험 관 내 관찰을 뒷받침했습니다: 국소 LA는 각막 불투명도와 염증 점수를 47% 감소시키고, 동시에 각막 Nrf2와 HO-1 발현을 증폭시키면서 사이토카인 전사체를 절반으로 줄였습니다; SnPPIX 병용 투여로 인해 이러한 이점은 무효화되었습니다. 종합적으로 이 데이터는 임상적으로 달성 가능한 농도에서 LA가 Nrf2 단백질 농도를 증가시키고 핵 전위를 강화하며 HO-1 활성을 증강하여 병원체에 의한 세포 조종 난류를 억제하는 일관된 기전적 계층 구조를 제시합니다. 이 발견들은 LA를 항진균 화학요법을 보완할 수 있는 쉽게 전달 가능한 숙주 주도 보조제로 자리매김하며, 시각을 위협하는 각막 염증의 Nrf2 중심 조절에 대한 더 넓은 치료 시각을 제시합니다.

서론

곰팡이 각막염(FK)은 현재 광범위한 안과 응급 상황으로 인식되어 매년 100만 건 이상의 배양 증명 사례와 열대 및 아열대 지역에서 각막 실명 중 불균형적인 비율을 차지합니다 1,2. 미국에서는 인구 10만 명당 6-8건에 가까운 발생률이 추정되며, 농업 경제에서는 더 높은, 식물성 외상이나 콘택트렌즈 착용 이후 노동 연령 인구를 우선적으로 공격하는 전 세계적 위협이 커지고 있음을 보여준다. 섬유성 균류, 특히 푸사리움과 아스페르길루스 종이 원인학적 지형을 지배하며, 따뜻하고 습한 기후에서 번성하며 안구 미세 손상을 이용해 감염을시작합니다.

반세기 동안 임상 사용되었음에도 불구하고, 나타마이신 5%는 FK에 특화된 유일한 국소제로 남아 있습니다; 하지만 폴리엔 화학 성분 때문에 각막 침투가 부족하고 자주 투여해야 하며, 보편적으로 보편적으로 보급되는 것은 아닙니다 6,7. 놀랍게도, 남아시아에서 진행된 연속 감시 연구에서는 나타마이신과 트리아졸의 최소 억제 농도가 점진적으로 증가하는 현상이 나타마이신 분리주를 보였으며, 푸사리움 분리주는 나타마이신 내성이 연 ≥% 증가했고, 보리코나졸8도 유사한 추세를 보였습니다. 이 데이터는 치료 실패에 대한 임상 보고서와 일치하며, FK 치료제 시장이 2023년 9억 달러에서 2033년까지 14억 8천만 달러로 성장할 것이라는 예측을 뒷받침합니다. 이는 주로 현재 약물치료의 부족함에 의해 주도됩니다. 결막판이나 관통성 각막성형술과 같은 임시 수술 조치는 난항성 궤양에서 해부학을 살리지만, 자원 소모와 시력을제한합니다. 이러한 단점들은 단순히 균류 작용을 넘어서는 숙주 주도 또는 다중 표적 전략의 필요성을 강조합니다.

산화 스트레스와 그로 인한 염증 연쇄 반응이 곰팡이 발병과 각막 흉터의 결정 요인으로 이해되고 있습니다. 곰팡이 침입 시 각막 상피세포와 결막 비만세포, 변연 수지상돌기세포, 기질 각막세포 등 상주 면역 집단이 Dectin-1 및 Toll-유사 수용체와 같은 패턴 인식 수용체를 통해 선천 면역 반응을 시작합니다10. 호중구 유래 활성산소종(ROS)은 감염된 기질에 항균 산화 폭발의 일부로 축적되며, 침투하는 대식세포와 T 림프구는 사이토카인 증폭을 통해 만성 염증을 지속시킵니다11. 역설적으로, 필라멘트 균류는 이러한 적대적인 환경에서 생존하기 위해 자신의 항산화 회로(예: Yap1가 조절하는 초산화물 디뮤타제)를 상향 조절합니다. 과도한 ROS는 다시 조직 파괴와 각막 불투명화를 촉진하는 IL-1β, TNF-α 및 기타 염증성 매개체의 NF-κB 의존적 전사를 활성화합니다12. 내인성 세포보호의 중심에는 핵 인자 적혈구 2 관련 인자 2(Nrf2)가 있으며, 이 인자는 핵으로의 이동을 통해 헴 옥시게나제-1(HO-1)과 상피세포, 각각세포, 내피세포 등 여러 각막 세포 유형에 걸쳐 다양한 해독 효소의 발현을 조율합니다13,14. 노화, 당뇨병, 만성 염증은 이 축을 하향 조절하여 안구 조직을 산화 자극에 취약하게 만드는 반면, Nrf2의 유전적 또는 약리학적 강화는 상피 상피 상피 봉합을 촉진하고 다양한 각막 손상에서 사이토카인 급증을 억제합니다15.

FK에서 이 경로를 활용하는 개념 증명 연구들이 시작되었습니다. 페릴알데히드16, 갈산17, 하이드록시티로솔18, 그리고 유기셀레늄 화합물인 에브셀렌19와 같은 천연 소분자는 Nrf2-HO-1 신호를 증폭시키면서 진균의 생존력을 직접적으로 저해함으로써 항진균 및 항염증 이중 효과를 달성합니다. 항진균제와 항산화제를 공동 전달하는 나노의학 플랫폼은 병원체 제거와 숙주 방어 강화를 결합하는 치료적 가능성을 더욱 보여준다20,21. 하지만 이들 후보 중 다수는 제형의 복잡성이나 입증되지 않은 안구 안전성과 관련된 번역적 장애물에 직면해 있습니다.

리포산(LA)은 널리 사용되는 디티올 항산화제로, 체계적으로 확립된 안전성과 뛰어난 약리학적 다양성을 자랑합니다. 간 및신경 조직 연구를 바탕으로 LA는 켈치 유사 ECH 관련 단백질-1(Keap1)의 시스테인 잔기(특히 Cys151, Cys273, Cys288)를 직접 변형하여 Nrf2와의 상호작용을 방해하고 Nrf2의 유비퀴틴화 및 단백질 분해를 방지하여 Nrf2 단백질 수치 증가, 핵 전위 강화, HO-1 전사 증강을 초래하는 것으로 제안됩니다. 그러나 각막 상피세포에서 Keap1-LA 상호작용의 직접적인 입증은 향후 연구가 필요하다. LA는 산화 손상의 간, 신경, 안구 모델에서 세포 보호 효과를 입증했습니다13,15. 양피성 특성은 폴리엔에서 관찰되는 막 독성 없이 조직 침투를 용이하게 하며, 국소 및 전신 적응증에 대한 임상 제형도 이미 존재합니다. 그럼에도 불구하고, LA가 각막 염증성 미세환경을 조절하여 FK를 완화하는 능력은 엄밀하게 검증되지 않았습니다.

따라서 본 연구는 LA가 Nrf2/HO-1 축을 활성화하고 염증성 사이토카인을 억제함으로써 A. fumigatus 유발 각막병증을 완화할 수 있는지 조사하였다. 인간 각막 상피세포와 검증된 쥐 FK 모델을 사용하여 선량-반응 특성을 규명하고, 선택적 억제제를 이용한 기전적 의존성을 해부하며, 감염되지 않은 대조군과 감염된 차량 처리 그룹을 비교하여 치료 결과를 벤치마킹했습니다. 우리가 아는 한, 이는 포괄적 용량-반응 특성화, Nrf2와 HO-1 모두에 대한 선택적 약리학적 억제제를 이용한 기전적 해부, 세포 및 동물 모델에서의 검증을 통해 진균성 각화염에서 리포산의 치료 효능을 체계적으로 입증한 최초의 연구입니다. 이 연구는 분자, 세포, 번역 분석 결과를 독특하게 통합하여 LA의 항염증 효과에 근거한 Nrf2/HO-1 경로 의존성에 대한 명확한 증거를 제시합니다. 분자, 세포, 생체 내 측정값을 통합함으로써, 우리는 병원체 박멸과 염증 억제라는 두 가지 필수 과제를 해결하는 LA를 쉽게 번역 가능하고 숙주 지향 치료법으로 포괄적으로 평가하고자 했습니다.

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프로토콜

모든 동물 시술은 기관 동물 관리 및 사용 위원회(프로토콜 번호: IACUC-2024-FK-007)의 승인을 받았으며, 시각 및 시각 연구 협회의 안과 및 시각 연구 동물 사용 성명에 따라 수행되었습니다. 8-10주 된 수컷 C57BL/6 마우스는 20-25g으로, 22± 2°C, 50%-60%의 상대습도, 12시간 12분의 밝고 어두운 주기로 조절된 환경에서 개별 환기되는 우리에 보관되었습니다. 이 특정 병원체가 없는 동물들은 찰스 리버 연구소에서 획득했습니다( 재료표 참조). 모든 쥐는 새로운 환경에 적응하기 위해 1주일간의 적응 기간을 거쳐 실험 절차를 진행했으며, 표준 설치류 먹이와 물을 제한 없이 섭취할 수 있었습니다.

주의: Aspergillus fumigatus 는 생물안전성 2단계 격리가 필요한 병원성 유기체입니다. 모든 곰팡이 배양은 인증된 생물학적 안전 캐비닛 안에서 적절한 개인 보호 장비(장갑, 실험실 코트, 눈 보호구 포함)를 착용하여 취급해야 합니다. 디메틸 설폭증(DMSO)은 가연성이 있으며 피부를 침투할 수 있습니다; 환기가 잘 되는 곳에서 다루고 직접 접촉을 피하세요. 케타민과 자일라진은 기관 규정에 따라 안전한 보관과 적절한 문서화가 요구되는 통제 물질입니다.

실험적 준비
필요한 모든 시약, 약물 및 재료는 실험 작업 흐름에 따라 준비되었습니다(회로는 재료 표 및 보조 그림 1 참조). 라세믹(±)-α-리포산(LA) 스톡 용액은 60 mM 농도로 DMSO에 용해된 라세믹 α-리포산(1,2-디티올란-3-펜타노산)을 사용해 -80 °C 일회용 알리코트로 저장하여 산화 분해를 방지하였습니다. Nrf2 억제제 ML385와 HO-1 억제제 SnPPIX도 동결-해동 사이클을 피하기 위해 일회용으로 조제 및 분할 할당되었습니다. 모든 세포 배양 배지와 보충제는 멸균 조건에서 준비되고 사용 전 37 °C로 미리 가열되었습니다.

한천 배지, 배양관, 일회용 플라스틱 등 곰팡이 배양에 오염된 모든 물질은 생물학적 위험 폐기물 용기에 폐기하기 전에 121°C에서 30분간 오토클레이빙되었습니다. 유기 용매를 포함한 화학 폐기물은 별도로 수집되어 기관의 환경 보건 및 안전 프로토콜을 통해 처리되었습니다. 동물 조직과 사체는 승인된 생의학 폐기물 서비스를 통해 소각되었습니다.

곰팡이 배양 및 감염 준비
Aspergillus fumigatus는 Sabouraud 금도당 한천에서 37°C에서 5-7일간 배양되어 성숙한 분초자형 형성이 관찰되었습니다. 분생 분포자는 0.05% Tween-80을 함유한 무균 인산염 완충 생리염수(PBS)로 성숙 배양물을 채취하고, 균사 조각을 제거하기 위해 멸균 거즈로 여과했습니다. 분열자(conidial concentration)는 혈세포계를 사용하여 측정하고, 발표된 곰팡이 각막염 모델을 기반으로 설정된 농도에 맞게 조정하였습니다. 시험관 내 실험에서는 1 x 106 conidia/mL(감염 중복률 10:1)가 선정되었으며, 이 농도가 각막 상피 세포에서 강력한 염증 반응을 유도하면서도 하위 분석을 위한 적절한 세포 생존성을 유지한다는 연구를 기반으로 하였다(16,17). 생체 내 연구에서는 1 x 107 conidia/mL가 선택되었는데, 이 접종은 감염 후 5일째까지 일관되고 중등도의 각막염을 발생시키며, 질병 점수가 재현 가능하여 과도한 사망률 없이 치료 효과를 평가할 수 있는 충분한 동적 범위를 제공함16,19.

동물 치료와 각막 감염
전신마취(케타민 100 mg/kg 및 자일라진 10 mg/kg 복강내 주사) 하에 멸균된 25G 바늘로 중심 각막에 1mm 선형 긁힘 세 개를 만든 후 5 μL A . fumigatus 원분자 현탁액을 국소 적용하여 진균성 각막염을 유도하였다. 쥐들은 무작위로 치료 그룹(n=8명)으로 배정되었습니다: 대조군(미감염), 감염된 대조군, 감염 + LA 치료(60 μmol/L 국소 투여 하루 4회), 감염군 + LA + SnPPIX 치료(LA 및 복막 내 5 mg/kg SnPPIX 투여). 임상 평가와 조직 채취는 감염 후 5일째에 수행되었습니다.

동물 취급 주의사항: 마취된 동물과 관련된 모든 시술은 무균 조건 하에서 수행되어야 합니다. 마취 중 호흡 억제 여부를 지속적으로 관찰하세요. 오염된 침구, 수술용 폐기물, 감염된 조직은 기관의 생물학적 위험 폐기물 관리 프로토콜에 따라 오토클레이빙 후 소각하여 처리합니다.

세포 배양 및 처리
인간 각막 상피세포(HCEC)는 ATCC에서 얻어, DMEM/F-12 배양지에 10% 태아 소 혈청, 1% 페니실린-스트렙토마이신, 1% L-글루타민을 보충하여 37°C의 가습 5% CO₂ 대기 환경에서 등몰 농도로 유지하였습니다. 세포는 80%-90% 합류율에 도달하면 3-4일마다 하위배양하였고, 3-8번 통로 사이에 사용하여 일관성을 유지하였습니다. 실험적 처리에서는 적절한 판에 웰당 5 x 10⁴ 세포를 시딩하고 24시간 동안 부착한 후 처리했습니다. 모든 시험관 내 기전적 실험에서, 세포는 먼저 감염 배수율(MOI)인 Aspergillus fumigatus conidia에 4시간 동안 노출되어 감염을 확립한 후, LA(60 μM), ML385(5 μM), 또는 SnPPIX(1 μM)를 단독 또는 1 μM으로 추가한 후 샘플 채취를 추가로 24시간 동안 수행했습니다. 이 순차적 설계는 예방적 치료가 아닌 기존 곰팡이 도전에 대한 LA의 치료 효과를 평가할 수 있게 합니다.

세포 생존성 평가 (CCK-8 분석)
세포 생존 가능성은 세포 계수 키트-8(CCK-8)을 사용하여 평가하였습니다. 세포는 5 x 104개의 웰 플레이트에 시딩되어 처리 전 24시간 배양되었습니다. 약물 노출 후 각 웰에 10 μL CCK-8 용액을 첨가하고, 플레이트를 37 °C에서 2시간 배양했습니다. 흡광도는 멀티모드 마이크로플레이트 리더기를 사용하여 450nm에서 측정되었습니다. 각 실험 조건은 8중복으로 수행되었고, 실험은 독립적으로 세 번 반복되었다. 세포독성 효과를 피하기 위해 차량 조절(DMSO) 농도는 0.1% 이하로 유지되었습니다.

RNA 추출 및 정량적 실시간 PCR
총 RNA는 제조사 프로토콜에 따라 RNeasy Mini Kit를 사용해 배양된 세포와 각막 조직에서 분리되었습니다. 조직 샘플은 조직 균질기를 사용해 RLT 버퍼에서 50Hz에서 2분간 균질화되었습니다. RNA 품질과 농도는 분광광도계를 사용해 평가했으며, 후속 분석에는 260/280 비율 1.8-2.0을 사용했습니다. 1가닥 cDNA 합성은 고용량 cDNA 역전사 키트를 사용하여 반응당 1 μg 총 RNA로 수행되었습니다. 정량적 PCR은 SYBR Green 기반 qPCR 마스터 믹스를 실시간 PCR 시스템에서 수행했으며, 초기 변성은 95°C에서 2분간 진행되었고, 이후 95°C에서 15초, 60°C에서 1분간 40주기를 거쳤습니다. 증폭자 특이성을 검증하기 위해 용융 곡선 분석이 수행되었습니다. 모든 프라이머는 사용 전에 효율성(90%-110%)과 특이성을 검증하였습니다. 상대 mRNA 발현은 GAPDH 기준 유전자인 2(-ΔΔCT) 방법을 사용하여 계산하였습니다.

단백질 추출과 웨스턴 블롯 분석
전체 단백질 추출을 위해 세포와 조직을 RIPA 버퍼에 용해하고 프로테아제와 인산효소 억제제 혼합물을 보충했습니다. 핵 및 세포질 단백질 분획은 제조사 프로토콜에 따라 NE-PER 핵 및 세포질 추출 시약을 사용해 제조되었습니다. 단백질 농도는 브래드포드 분석법을 사용하여 측정하였다. SDS-PAGE에 의해 동일한 양의 단백질(30-50 μg)이 분리되어 PVDF 막으로 전달되었습니다. 5% 무지방 우유로 0.1% Tween-20이 함유된 Tris 완충 식염수에서 1시간 동안 차단한 후, 막을 4°C에서 1차 항체와 함께 하룻밤 배양한 후, 적절한 HRP 결합 2차 항체를 실온에서 1시간 배양하였습니다. 단백질 밴드는 신호 강도에 따라 30-180초의 노출 시간을 가진 향상된 화학발광 시약을 사용해 시각화하였다. 밴드는 ImageJ 소프트웨어를 사용해 정량화되었으며, 전체 단백질의 로딩 조절은 β-액틴, 핵 단백질은 라민 B1로 사용되었습니다.

임상 평가 및 조직학적 분석
각막 질환의 중증도는 쥐 곰팡이 각막염에 대한 확립된 프로토콜에 기반한 표준화된 임상 점수 체계를 사용하여 평가되었습니다. 점수 체계는 각막 불투명도(0 = 투명, 4 = 완전 불투명), 표면 불규칙성(0 = 매끄러움, 4 = 천공이 있는 심한 궤양), 염증 반응(0 = 침윤 없음, 4 = 하이포피온이 있는 밀집 침윤)의 세 가지 지표를 평가하며, 총 점수는 0에서 12 사이입니다. 모든 임상 평가는 치료 그룹 배정에 마스크를 착용한 두 명의 독립 관찰자가 수행했으며, 관찰자 간 합의율은 90%를 넘었습니다. 각막 사진은 디지털 카메라가 장착된 슬릿 램프 생체현미경을 사용해 촬영되었습니다. 조직학적 분석을 위해 눈을 적출하여 4% 파라포름알데히드에 고정하고, 파라핀을 삽입한 후 5 μm 두께로 절절 절단하였습니다. 절편은 일반적인 형태 평가를 위해 헤마톡실린과 에오신으로 염색하였다.

효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)
제조사 지침에 따라 상부 및 각막 조직 균질체에서 IL-1β와 TNF-α의 분비 수준은 상용 ELISA 키트를 사용해 정량화되었습니다. 세포 배양 상청액은 치료 후 24시간 후에 수집되었으며, 각막 조직은 프로테아제 억제제가 포함된 PBS로 균질화되었습니다. 샘플은 12,000 x g 에서 4 °C에서 10분간 원심분리되었고, ELISA 분석에는 상원액이 사용되었습니다. 모든 샘플을 중복 분석하였고, 사이토카인 농도는 표준 곡선에서 계산되었습니다.

통계 분석
모든 실험은 적절한 생물학적 복제체(시험 관 내 연구는 n ≥6, 동물 실험은 n =8)를 사용하여 수행되었으며, 최소 3회 독립적으로 반복되었습니다. 데이터는 평균± 표준오차(SEM)로 제시됩니다. 데이터 분석은 GraphPad Prism 버전 9.0을 사용하여 수행되었습니다. 구체적으로, 정규성 검정 함수(Shapiro-Wilk)를 사용해 데이터 분포를 평가했고, 두 그룹 이상의 실험에는 Tukey의 다중 비교 검정을 적용한 일원 ANOVA, 두 그룹 비교에는 쌍이 없는 학생 t-검정을 사용했습니다. 그래프는 개별 데이터 포인트가 산점으로 겹쳐진 그룹화된 막대 차트로 생성되었으며, 오차 막대는 평균의 표준오차를 나타냅니다.

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결과

실험 작업 흐름은 리포산 치료가 Nrf2/HO-1 신호 전달 경로를 효과적으로 조절하여 곰팡이 각막염 모델에서 염증을 억제한다는 것을 입증했습니다.

리포산과 경로 특이적 억제제의 세포독성 평가
이 연구에 사용된 각 화합물의 최적 농도를 확립하기 위해 초기 용량-반응 연구가 수행되었습니다. LA는 HCECs와의 우수한 생체 적합성을 보여주었으며, 24시간 노출 후 최대 60 μM 농도에서 세포 생존력을 유지하여, 이후 기전 연구를 위한 최적의 LA 농도로 확립되었습니다(그림 1A). 반면, Nrf2 억제제 ML385는 안전성 프로파일이 더 제한적이었으며, 예비 용량-반응 실험에서 5 μM이 최적 농도로 결정되었습니다. HO-1 억제제 SnPPIX는 시험 화합물 중 가장 좁은 치료 효과를 보였으며, SnPPIX는 2.5 μM과 5 μM에서 대조군에 비해 세포 생존율을 유의미하게 감소시켜 1 μM...

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토론

본 연구 결과는 리포산(LA)이 Nrf2/HO-1 축을 강력하게 유도하는 물질로서, 염증성 사이토카인 발현을 억제하고 각막 구조를 보존함으로써 곰팡이 각막염(FK)을 완화한다는 것을 확인시켜 줍니다. 산화 질환에서 디티올란 화합물에 의한 강력한 Nrf2 활성화를 최근 연구와일치하게, LA는 HO-1 전사체를 5배 증가시키고 IL-1β/TNF-α 분비를 절반으로 줄여 안구 염증에 대해 보고된 여러 식물화학적 활성화제보다 뛰어난 성능을 보였다 2,23. 최근 페릴알데히드16, 갈릭산17, 하이드록시티로솔15, 에브셀렌19를 이용한 연구에서는 FK 모델에서 유...

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공개 사항

저자들은 이 작업과 관련된 이해 상충이 없음을 선언합니다. 외부 자금이나 상업적 관계는 연구의 설계, 실행 또는 해석에 영향을 미치지 않았습니다.

감사의 글

이 연구는 진난 제2인민병원 안과로부터 내부 자금 지원을 받았습니다. 저자들은 세포 배양 유지 및 동물 모델 절차를 위해 실험실 직원들이 제공한 기술 지원에 감사드립니다. 프로토콜 검토와 승인을 위해 기관 동물 관리 및 이용 위원회에 특별히 감사드립니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
안티-HO-1세포 신호 기술, 미국 매사추세츠주 댄버스#8803
항-&베타-액틴시그마-올드리치, 세인트루이스, 미주리, 미국A5441
안티라민 B1앱캠, 케임브리지, 매사추세츠, 미국AB16048
안티-Nrf2앱캠, 케임브리지, 매사추세츠, 미국AB62352
Aspergillus fumigatusATCC 204305해당 없음
브래드포드 분석 키트바이오-래드 연구소5000006
C57BL/6 마우스찰스 리버 연구소해당 없음
세포 계수 키트-8 (CCK-8)도진도 연구소, 구마모토, 일본343-07623
DMEM/F-12 중형깁코, 써모피셔 사이언티브11320033
DMSO시그마-올드리치D2650
ECL 시약써모피셔 사이언티브32106
태아 소 혈청깁코, 써모피셔 사이언티브16000044
GAPDH 포워드 프라이머커스텀 합성관습
글루타맥스깁코, 써모피셔 사이언티브35050061
고용량 cDNA 역전사 키트응용 생명시스템, 써모피셔 사이언티브4368814
HO-1 전방 프라이머커스텀 합성관습
HO-1 역입마커스텀 합성관습
HRP 접합 항마우스 IgG앱캠, 케임브리지, 매사추세츠, 미국AB205718
HRP 결합 항토끼 IgG앱캠, 케임브리지, 매사추세츠, 미국AB205719
인간 각막 상피세포(HCECs)ATCC, 버지니아주 매너서스, 미국CRL-11135
IL-1&베타; 엘리사 키트R& D 시스템즈, 미네소타주 미니애폴리스, 미국DY201
리포산 (LA)시그마-올드리치, 세인트루이스, 미주리, 미국T1395
ML385 (Nrf2 억제제)메드켐익스프레스, 뉴저지주 몬머스 정션, 미국HY-100523
나노드롭 2000 분광광도계써모피셔 사이언티브ND-2000
NE-PER 핵 및 세포질 추출 시약써모피셔 사이언티브78833
Nrf2 포워드 프라이머커스텀 합성관습
Nrf2 역영제커스텀 합성관습
PBS의 0.05% 아동 80세맞춤 준비관습
페니실린-스트렙토마이신깁코, 써모피셔 사이언티브15140122
파워업 SYBR 그린 마스터 믹스응용 생명시스템, 써모피셔 사이언티브A25741
QuantStudio 5 실시간 PCR 시스템써모피셔 사이언티브A28140
RIPA 버퍼맞춤 준비관습
RNeasy 미니 키트독일 힐덴의 키아겐74104
사부로 덱스트로스 한천맞춤 준비관습
슬릿 램프 생체현미경맞춤 장비해당 없음
SnPPIX (HO-1 억제제)프런티어 사이언티픽, 로건, 유타, 미국F6140
Synergy HTX 멀티 모드 마이크로플레이트 리더BioTek Instruments, 버몬트주 위누스키, 미국SYNHXTTR
TBS-T (0.1% 20세 청소년)맞춤 준비관습
티슈라이저 LT치아겐69980
TNF-&α; 엘리사 키트R& D 시스템즈, 미네소타주 미니애폴리스, 미국DY210

참고문헌

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